作者：张丙芳 林允信 戚好文 李志超 薛军 贾斌 赵淑华
【关键词】 急性肺损伤
关键词: 急性肺损伤;降钙素基因相关肽;肿瘤坏死因子;白介素-8;内皮素-1
摘 要:目的 探讨降钙素基因相关肽（CGRP）对油酸型急性肺损伤（ALI）家兔血与支气管肺泡灌洗液（BALF）中TNF-α，IL-8和ET-1含量的影响. 方法 观察油酸型ALI家兔CGRP治疗前、后不同时间静脉血与BALF中上述3种细胞因子的含量，并测定其肺含水量. 结果 油酸致伤后30，60，120min血及BALF中TNF-α，IL-8和ET-1含量均显著增高（P&<0.05～0.01），尤其以TNF-α增幅最大.CGRP治疗后各因子含量明显下降（P&<0.05），并维持在低水平，肺含水量也显著降低（P&<0.05）. 结论 iv CGRP可有效降低油酸致伤后血及BALF中TNF-α，IL-8和ET-1水平，抑制肺内炎症反应，减轻肺损伤.
Keywords:acute lung injury;calcitionin gene-related pep-tide;tumour necrosis factor;interleukin-8;en-dothelin-1
Abstract:AIM To investigate the effects of calcitionin gene-related peptide（CGRP）on the levels of TNF-α，IL-8 and ET-1in blood and bronchio-alveolar lavage fluid（BALF）from rabbits with acute lung injury（ALI）induced by oleic acid.METHODS The concentrations of the three cytokines in venous blood and BALF were continuously analysed at dif-ferent time points before and after treated with CGRP（0，30，60，120min）.Additionally，extravascular lung water was observed at the end of the study.RESULTS The concentra-tions of the three cytokines in blood and BALF were marked-ly increasd at30，60and120min after the intravenous infu-sion of oleic acid（P&<0.05～0.01）.In contrast the levels of the three cytokines remarkably decreased and were kept at a lower state after the intravenous infusion of CGRP（P&<0.05）.So did the extravascular lung water（P&<0.05）.CONCLUSION CGRP may effectively decrease the levels of TNF-α，IL-8and ET-1in blood and BALF after infusion of oleic acid，inhibit intrapulmonary inflammation and reduce the lung injury.
0 引言
急性肺损伤（ALI）和急性呼吸窘迫综合征（ARDS）的发病机制极为复杂，涉及到细胞因子网络，而肿瘤坏死因子（TNF）α，白细胞介素（IL）-8，内皮素（ET）-1是肺内炎症的启动和放大因子［1］ .它们可通过多种途径直接或间接损伤细胞-毛细血管膜，使其通透性增高，产生渗透性肺水肿［2，3］ .抑制这些因子成为防治ALI和/或ARDS的主要方向之一.降钙素基因相关肽（CGRP）具有保护血管内皮细胞、抑制ET-1产生、促进心钠素（ANP）释放等多种作用，可降低实验性ALI动物的平均肺动脉压并减轻其肺水肿［4］ ，但CGRP对ALI时体内炎性因子水平的影响文献报道较少.我们通过观察CGRP治疗前后油酸型ALI家兔血与BALF中TNF-α，IL-8和ET-1含量的变化，探讨其减轻肺损伤的机制.
1 材料和方法
1.1 材料 健康家兔18只，雌雄不拘，体质量2.5～3.0kg，由第四军医大学实验动物中心提供，随机分为3组，每组6只.①油酸模型（OA）组;②CGRP组;③健康对照（C）组.OA组和CGRP组均经耳缘静脉注射油酸60μL kg-1 建立ALI模型.C组以等量生理盐水代替油酸静注.
1.2 方法 实验前禁食12h，用30g L-1 戊巴比妥钠（1mL kg-1 ）经耳缘静脉麻醉后，将家兔仰卧固定于实验台上，沿颈部正中切开皮肤，钝性分离各层组织，置入右颈外静脉导管至上腔静脉供采血及给药.然后按前述方法建立油酸型ALI模型.CGRP组于注射油酸30min时给予CGRP1.5μg kg-1 .各组均于试验前（0min）、实验后30，60，120min由右颈外静脉导管采集静脉血各3mL，分置于含有100g L-1 EDTA-Na2 30μL和抑制肽酶40μL的试管或非抗凝试管中混匀，4℃3000r min-1 离心15min，分离血浆或血清，-20℃保存待测血浆ET-1和血清TNF-α，IL-8含量.兔ET放免检测盒由解放军总医院放免所提供，TNF-α和IL-8酶联免疫检测盒购自第四军医大学免疫学教研室，均按说明书统一测定.各组于实验后120min放血处死动物，立即开胸取肺，将右肺称湿质量后置于75℃烤箱72h取出称干质量.计算肺水质量分数=（肺湿质量-肺质量）/肺湿质量×100%.
统计学处理:各组数据以x ±s表示，用SPSS统计软件进行数据分析，组内各时间点数据比较用方差分析，并行均数间两两比较，各组间比较用团体t检验及直线相关分析.
2 结果
OA组、CGRP组家兔于注射油酸后很快出现呼吸急促、紫绀，呼吸频率由实验前38～56次 min-1 ，增至100～132次 min-1 .但iv CGRP后，上述症状逐渐减轻，至实验结束时呼吸恢复至45～80次 min-1 ，C组实验前后呼吸无异常变化.
2.1 血中TNF┐α，IL┐8和ET┐1的含量 OA组、CGRP组血中TNF-α，ET-1含量在油酸致伤后30min均显著升高（P&<0.01），约为致伤前的2～5倍，也明显高于C组（P&<0.01）.OA组120min时仍维持高水平，而CGRP组60min时即明显下降（P&<0.05～0.01），120min时仍呈下降趋势，与OA组比较显著降低（P&<0.05，Tab1）.IL-8含量也于致伤后显著升高（P&<0.05），但其较TNF-α和ET-1滞后30min，CGRP治疗60min时明显降低（P&<0.05）.
2.2 BALF中TNF┐α，IL┐8和ET┐1的含量 油酸致伤后120min时，OA组和CGRP组TNF-α，IL-8和ET-1含量均显著高于C组（P&<0.05～0.01），但 CGRP组各细胞因子水平均明显低于OA组（P&<0.05～0.01，Tab2）.
表1 急性肺损伤家兔各组血TNF-α及ET-1含量变化 略
表2 急性肺损伤家兔120min时BALF中细胞因子含量 略
2.3 肺水质量分数与细胞因子的关系 油酸致伤后120min OA组肺水质量分数（84.3±0.8）%明显高于C组（78.5±0.9）%，P&<0.01;CGRP组（82.6±0.9）%明显低于OA组（P&<0.05）.肺水质量分数与120min时血中TNF-α，IL-8，ET-1的相关系数分别为0.9235，0.8417和0.9350（P&<0.01），也与BALF中3种细胞因子的含量呈显著正相关.
细胞因子在肺损伤炎症反应的发生和发展中起重要作用，特别是TNF被称为ALI的启动因子，在ARDS炎症反应早期起关键作用.我们的结果显示油酸致伤早期（30min）血中TNF-α和ET-1即显著升高，TNF-α更是高达致伤前的5倍，至120min时仍维持在高水平，并呈上升趋势;而IL-8升高则较TNF-α可滞后30min.这种滞后的意义在于IL-8接受TNF-α的刺激后合成释放增多，并放大其炎症信号，使肺内炎症反应加强［3］ .BALF中这3种细胞因子含量在油酸致伤后也显著升高，并与肺水含量呈显著正相关（P&<0.01），提示油酸致伤后肺内TNF-α，IL-8，ET-1产生持续增多，直接参于了肺损伤的过程.用免疫吸附法清除循环中TNF-α后，ALI肺充血及中性粒细胞浸润明显减轻［5］ .结果提示，若降低肺内及血中TNF-α，IL-8，ET-1含量，有可能减轻油酸所致的急性肺损伤.
最近发现CGRP可减轻ARDS动物的肺水肿［4］ .本结果表明，静注CGRP除可减少油酸致伤后家兔的肺水含量外，还能快速有效地降低血及BALF中TNF-α，IL-8，ET-1含量.提示CGRP不仅可有效抑制ALI时肺内炎性因子的合成及释放，而且还能加强ALI时肺对炎性因子的灭活和清除而减轻肺内炎症反应.
综上所述，CGRP能够明显减轻油酸型ALI，其主要作用机制可能是:①降低血及BALF中炎性细胞因子含量，并抑制其损伤效应，减轻肺内炎症反应;②保护血管内皮细胞，从而减轻炎症损伤;③促进心钠素释放，发挥抗炎作用［6］ ;④扩张肺血管，改善肺循环，减轻肺水肿.此外，CGRP作用发挥快，持续时间较长，这对拮抗油酸致伤早期炎症因子的表达及其肺损伤作用有实际意义.
参考文献
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