作者：刘晨 辛晓燕 张瑜 张恩娣
【关键词】 宫颈肿瘤
关键词: 层粘连蛋白;受体，层粘连蛋白;宫颈肿瘤;肿瘤浸润;肿瘤转移
摘 要:目的 探讨层粘蛋白及受体在人宫颈癌中表达及其临床意义. 方法 应用SABC免疫组化法检测20例正常宫颈组织，26例宫颈原位癌，21例宫颈浸润癌Ⅰ-Ⅱ级，18例宫颈浸润癌Ⅲ级组织中层粘蛋白及受体的表达. 结果 层粘蛋白在正常宫颈组织及原位癌中强表达，在宫颈浸润癌中间断或缺失，二者有显著性差异（P&<0.05）.层粘蛋白受体在正常宫颈组织及原位癌中阴性表达，在宫颈浸润癌中呈强阳性表达.有显著性差异（P&<0.05）. 结论 层粘蛋白及受体在人宫颈浸润癌组织中有显著性改变，可为宫颈癌病理诊断及预后判断的标志.
Keywords:laminin;receptors，laminin;cervix neoplasms;neoplasm invasiveness;neoplasm metastasis
Abstract:AIM To investigate the expressions and singnifi-cance of laminin and laminin-receptors in human cervical car┐cinoma.METHODS Tissues from normal cervices，26cases with carcinoma in situ，21cases with microinvasive cancer and18cases with frankly invasive cancer were observed by SABC immunohistochemical method for expressions of laminin and laminin-receptors.RESULTS The positive staining for laminin was observed in normal cervical tissues and carcinoma in situ，but was weak or abscent in cervical in-vasive carcinoma tissues.（P&<0.05）.The staining for laminin-receptors of normal cervical tissues and carcinoma in situ was negative，but was positive in cervical invasive carci-noma tissues（P&<0.05）.CONCLUSION There were posi-tive changes in laminin and laminin-receptors in cervical inva-sive carcinoma tissues.These changes may be very useful in the pathologic diagnosis and prognosis of human cervical car-cinomas.
0 引言
层粘蛋白（LN）是细胞外基质中大分子非胶原糖蛋白，是基底膜的主要结构蛋白.在细胞粘附、增生、移行中起重要作用［1］ .近年，LN在肿瘤浸润转移中的作用得到普遍的研究肯定.LN是与其受体（LNR）结合共同发挥作用的.我们就LN及LNR在宫颈癌中的表达及意义进行了研究探讨.
1 对象和方法
1.1 对象 收集1998-01/1999-12陕西省妇幼保健院宫颈鳞状细胞癌及宫颈腺癌病理蜡块标本85例，患者术前均未经过放、化疗.依据1994年FIGO宫颈癌分级标准进行组织病理分级.正常宫颈组织20例，宫颈原位癌26例，宫颈浸润癌Ⅰ-Ⅱ级21例，宫颈浸润癌Ⅲ级18例.
1.2 方法 蜡块标本作4μm连续切片，常规脱蜡至水，3%h3 O2 灭活内源性酶，复合消化液消化酶，正常山羊血清封闭.滴加一抗（Anti-laminin美国Sigma;Laminin Receptor Ab-1.NeoMarkers公司）37℃2h，0.01mmol・L-1 PBS液洗涤，加入二抗，用SABC免疫组化试剂盒（武汉博士德公司），DAB显色，苏木素轻染，脱水、透明、封片.
1.3 结果判定 以组织基底膜，癌细胞质、胞膜出现明确棕黄色颗粒，其染色强度高于背景非特异性染色为阳性.强度分为:阴性（-）为完全无表达或阳性小于5%;阳性（+）为5%～50%阳性物质表达;强阳性（）为阳性物质表达大于50%.已知阳性片作阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照.
统计学处理:采用χ2 检验法及精确概率法.数据应用Spass for windows8.0软件包处理.
2 结果
2.1 LN的表达 LN在正常宫颈组织及原位癌基底膜呈连续强表达，在宫颈浸润癌Ⅰ-Ⅱ级中呈间断阳性表达，在宫颈浸润癌Ⅲ级组织中则缺失阴性表达（Fig1～3）.
2.2 LNR的表达 LNR在正常宫颈组织及原位癌中不显色，在宫颈浸润癌Ⅰ-Ⅱ级中，癌细胞质、胞膜及毛细血管中有棕黄色颗粒阳性表达，在宫颈浸润癌Ⅲ级组织中癌细胞质、胞膜及毛细血管呈强阳性表达（Fig4～6）.
图1 － 图6 略
2.3 统计分析结果 LN及LNR在宫颈组织各病理分级中的表达有显著性差异（Tab1，2）.LN及LNR蛋白受体之间表达具有明显相关性（Tab3）.
3 讨论
肿瘤的发生、发展是多因素的结果，有细胞结构、细胞间因素以及细胞外基质因素.而在肿瘤浸润转移中细胞外基质起着重要作用［2］ .LN是一种大分子非胶原糖蛋白，由α、β、γ3链组成，各链有不同的结构功能活性位点，依据细胞、组织特定性有10种同分异构体.LN是细胞外基质主要结构蛋白，在正常组织中维持组织结构和细胞形态;促进细胞增殖、分化、维持细胞生命营养;具有很强的介导细胞粘附和受体结合的特性;而在肿瘤组织中促使肿瘤细胞增殖、分化.LNR是位于细胞膜上的粘附分子.有3类:inte-grin，galectin和CD44［3-5］ .LNR与LN结合发挥其功能，促进肿瘤细胞粘附、浸润转移;特定位点的LN与LNR有其特定的作用;LNR介导细胞与基膜及细胞间的信号传导作用.在正常组织中LN广泛存在各组织细胞基底膜，基底膜完整，LN连续表达.在未浸润性肿瘤组织中，LN表达增强，在肝、肺、乳腺癌及妇科肿瘤中均显著增强［6-8］ .体外试验也显示LN优先于肿瘤细胞粘附，使肿瘤细胞增生［9］ .LNR表达则逐渐增强;而在浸润性肿瘤中，肿瘤细胞的LNR与基底膜LN结合，促使Ⅳ型胶原蛋白酶分解，破坏基底膜结构［10，11］ ，基底膜缺失、断裂，肿瘤得以浸润转移.这时LN减少缺失，LNR则显著增加，其与肿瘤的进展、预后密切相关.
表2 LNR在宫颈组织中的表达 略
表3 LN与LNR表达的相关性 略
本研究显示，LN在正常宫颈及原位癌基底膜组织中连续线状表达，在浸润癌Ⅰ-Ⅱ级中间断、不完整阳性表达，而在宫颈浸润癌Ⅲ级组织中则缺失无表达，有显著性差异.LNR在正常宫颈组织及原位癌中呈阴性表达，而在宫颈浸润癌Ⅰ-Ⅱ级中阳性表达，在宫颈浸润癌Ⅲ级组织中呈强阳性表达，肿瘤微血管基膜也明显阳性表达，均有显著性差异.而LN与LNR在宫颈组织病理分级中表达具有明显相关性.充分说明LN在宫颈组织中稳定、粘附细胞，促进细胞增殖、分化，LNR在肿瘤组织中促进肿瘤细胞的增殖、粘附，浸润转移［12-14］ .LN受体的增多与肿瘤浸润转移程度及肿瘤预后情况密切相关［15］ .而LNR的mAb可抑制体外肺癌细胞对LN粘附，并阻断体内浸润［16］ .充分证明了LN及LNR在肿瘤组织浸润转移中的重要作用.
LN及LNR在宫颈组织中的显著性表达，进一步证实了LN及LNR在正常组织及肿瘤组织浸润转移中的重要作用.可为宫颈癌浸润转移病理发展的机制之一，并可为临床探讨单克隆抗体治疗宫颈癌阻断其浸润的新方法.而LN及LNR亦可作为宫颈癌病理诊断分级及预后判断的标志.
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