关于杜仲叶水提醇沉工艺对氯原酸含量的影响

作者：吴红　李稳宏　吴道澄　李晓晔

【关键词】 氯原酸
　　关键词: 杜仲叶;氯原酸;提取;醇沉
　　0 引言
　　氯原酸（chlorogenic acid，CHA）是名贵补益中药杜仲的主要活性成分之一，对多种致病菌和病毒有较强的抑制和杀灭作用，是众多药材和中成药抗菌解毒、补中益气、镇痛强志、消炎利胆的主要有效成份.杜仲传统仅以皮入药，近来研究证实杜仲叶和皮成分基本相同，且叶中CHA含量明显高于皮.若以叶为原料提取CHA，不但可变废为宝，而且为杜仲叶的综合利用开辟了一个新途径.目前国内外对氯原酸的提取分离多以咖啡豆及金银花为原料，甲醇、乙醇等有机溶剂提取，用柱层析、沉淀萃取及HPLC分离纯化，这些方法不但成本高而且工序复杂.CHA分子中有五个羟基，有一定的水溶性.因此我们尝试了水提醇沉工艺，着重研究了一次醇沉及以梯度递增方式醇沉（分次醇沉）对水提液中CHA含量的影响，为后续CHA分离纯化打下基础.
　　
　　1 材料和方法
　　
　　1.1 材料 杜仲叶由陕西省城固县科委提供.氯原酸标准品由美国进口.日本岛津UV-265自动记录分光光度计.ZF-2型三用紫外仪.展开剂:正丁醇-乙酸-水（4∶1∶5）上清液.新华1号层析纸.所用试剂均为分析纯.
　　
　　1.2 方法 杜仲叶60℃干燥后搓成粗粉，过20目筛，称取杜仲叶粗粉4份各100g，分别加水600mL，50℃下浸提40min，趁热过滤，滤渣加水600mL，重复操作，第三次加水400mL，50℃下浸提30min，合并滤液，减压浓缩至60mL，紫外分光光度法测定含量［1］ .滤液分别进行一次醇沉和分次醇沉，除去蛋白质多糖等杂质，测定含量.滤液加饱和醋酸铅至不再生成沉淀为止，滤取沉淀，水洗，10%h3 SO4 脱铅，活性炭脱色，调节pH值，减压干燥得粗品氯原酸，纸层析法分析其纯度. 　　2 结果
　　用6倍于杜仲叶重量的水，50℃下40min，浸提3次，平均浸出率93.82%，加90mL无水乙醇醇沉至60%（溶液中乙醇浓度）时，CHA损失率为6.5%;若用240mL无水乙醇醇沉至80%时，CHA损失率9.8%;540mL无水乙醇醇沉至90%时，CHA损失率为16.4%.若采用梯度递增方式醇沉即60%～80%～90%，依次加入95%的乙醇103mL，216mL，760mL，CHA损失率仅为11.7%.由纸层析图谱可知，紫外灯下Rf 0.70处为CHA斑点（蓝色荧光），随着醇沉浓度的增加，杂质含量逐渐减少，当醇沉浓度达90%时，几乎未检出杂质，且分次醇沉比一次醇沉至90%时所得CHA斑点大，显色深.粗品氯原酸纯度仅为22.14%.
　　
　　3 讨论
　　氯原酸水提工艺简单经济，但与一般中草药提取不同的是CHA的邻苯二酚结构不稳定，高温及长时间加热易氧化分解.为此我们对水提液温度作了正交实验，发现50℃以后随着温度增加，浸提液中氯原酸含量反而下降.醇沉除杂时醇沉浓度越高越有利于除去杂质，但损失率随之增大，氯原酸含量反而下降.这主要是因为醇沉时夹带着析出部分CHA造成的.一次醇沉至溶液中乙醇浓度为90%时损失较大，损失率达16.4%，而分次醇沉仅为11.7%.一次醇沉至60%时，损失率虽然较低，但其中的杂质在纸层析上显而易见.因此选择合适的醇沉浓度及醇沉方式非常重要.分次醇沉（60%～80%～90%）不但除杂效果好，且减少了杂质对药液的包裹，效果明显优于一次醇沉.对杜仲叶中氯原酸提取物的分离，我们尝试了铅沉、脱铅脱色工艺，但损失较大，分别为8.4%，9.3%.根据氯原酸的结构特点及杂质性质，拟采用离子交换树脂和吸附树脂对水提醇沉后的滤液进一步分离，以期得到纯度较高的氯原酸提取物.
　　参考文献:
　　
　　［1］Wu H，Li WH，Wu DC，Liu W，Li DW.Determinative way’s comparison of chlorogenic acid from the leaf of Eucommia ul-moides Oliv ［J］.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），preprinting.