【关键词】 甲状腺激素
关键词: 受体，甲状腺激素;糖尿病;白细胞
摘 要:目的 了解T3 核受体介导的T3 反应在糖尿病患者外周血白细胞中的表达. 方法 应用半定量RT-PCR法，将30例糖尿病患者分为无并发症组（A组）、急性并发症组（B组）及慢性并发症组（C组），观察各组T3 核受体（T3 R）各亚型mRNA变化. 结果 糖尿病患者外周血白细胞中T3 Rα1 ，T3 Rα2 mRNA表达增强（P&<0.05），T3 Rβ1 ，T3 Rβ2 mRNA变化不大.B，C两组这种变化显著（P&<0.05）. 结论 在外周血白细胞中，T3 R mRNA各亚型表达与糖尿病患者低T3 综合征密切相关.
Keywords:receptors，thyroid hormone;diabetes mellitus;leukocytes
Abstract:AIM To observe the relationship between the T3 R mRNA expression in diabetes mellitus（DM）.METH┐ODS By using semi-quantitative RT-PCR method，we ex-amined T3 R mRNA levels in peripheral leukocytes of DM（A，B，C）.RESULTS T3 Rα1 ，T
3 Rα2 mRNA levels all in-creased in DM，especially in B and C（P&<0.05）.CONCLU┐SION In peripheral leukocytes，the expression levels of T3 R mRNA are related to DM，except T3 RβmRNA level.
0 引言
甲状腺激素作用于人体组织、器官，对人体生长发育、代谢起着重要的调节作用.三碘甲状腺原氨酸（T3 ）和其受体（T3 R）形成复合物，介导靶基因的启动因子，从而促进结构基因表达，调节相关蛋白的合成，维持机体代谢平衡.研究发现糖尿病患者存在低T3 综合征，且伴随有并发症而加重［1，2］ .我们对糖尿病患者低T3 综合征时外周血白细胞中T3 R mRNA的表达进行了半定量分析，旨在了解低T3 综合征状态下T3 R mRNA各亚型变化及变化趋势.
1 对象和方法
1.1 对象 按1999年WHO诊断标准确诊的糖尿病患者30（男17，女13）例;平均年龄45（17～67）岁;病程6mo～21a，其中Ⅰ型糖尿病6例，Ⅱ型糖尿病24例.根据是否并发急、慢性并发症将患者分为3组.A组（无并发症组）10（男7，女3）例，平均年龄46（29～67）岁，病程2mo～6a，其中Ⅰ型1例，Ⅱ型9例.B组（急性并发症组）10（男6，女4）例，其中糖尿病酮症酸中毒5例，肺部感染4例，高渗性非酮症昏迷1例，平均年龄40（17～60）岁，病程6mo～5a，Ⅰ型糖尿病5例，Ⅱ型糖尿病5例.C组（慢性并发症组）10（男4，女6）例，并发有糖尿病肾病和/或糖尿病视网膜病变，平均年龄57（41～67）岁，病程4～15a，均为Ⅱ型糖尿病.D组（正常对照组）15（男7，女8）例，平均年龄45（18～60）岁.
1.2 方法 外周血白细胞RNA的提取采用异硫酸肽-酚-氯仿一步法［3］ ，随后取RNA加入随机引物，70℃水浴5min，0℃水浴5min，后加入AMV（禽源反转录酶）逆转录酶，5×AWV缓冲液，10mol・L-1 dNTP，0.67kat・L-1 RNA酶抑制剂，加DEPC处理水至总体积20μL，37℃恒温1h，95℃灭活5min后的cDNA存于-20℃冰箱，以逆转录产物cDNA为模板，以GAPDH为内参照，在DNA自动扩增仪上进行PCR.T3 Rα的扩增条件为94℃变性30s，59℃复性45s，72℃延伸45s.T3 Rβ的扩增条件为94℃变性30s，55℃复性45s，72℃延伸45s.28个循环后，取反应产物8μL，以GADDH为对照，20g・L-1 琼脂糖凝胶电泳后，用凝胶图像分析系统（GDS8000）进行灰度分析.
统计学处理:扩增后产物灰度值与内参照灰度值进行比较，所得数值以x ±s表示，组间采用方差分析法.
2 结果
2.1 糖尿病（A+B+C）组与正常对照（D）组总T3 R mRNA变化 40例糖尿病患者外周血中白细胞T3 mRNA明显高于正常对照组（Tab1）.
表1 糖尿病组和正常对照组T3 R mRNA比较 略
2.2 各组糖尿病外周血白细胞中T3 R各亚型mRNA表达水平 各组糖尿病患者T3 Rα1 ，T3 Rα2 mRNA较对照组都明显增加，且随并发症而逐渐增强，T3 Rβ1 ，T3 Rβ2 mRNA虽然与对照组无明显差异，但是有一定的增长趋势（Tab2）.
表2 A，B，C，D组T3 R各亚型mRNA比较 略 3 讨论
糖尿病是临床常见多发病，由高血糖引起的机体代谢紊乱可从不同水平影响甲状腺功能，出现低T3 、高rT3 血症，血糖越高，低T3 综合征越重，有急、慢性并发症者，这种甲状腺功能的改变尤为突出［1，2］ .但 是T3 调节机体功能，主要是在基因水平.T3 必需与靶细胞核受体（T3 R）结合，才能发挥其生物效应.基于此种情况，我们研究了低T3 综合征的糖尿病患者T3 R表达情况，以冀了解糖尿病患者T3 R各亚型mRNA与糖尿病及其并发症的关系.从实验结果看，糖尿病患者普遍存在T3 Rα1 ，T3 Rα2 mRNA表达水平升高.且随糖尿病并发症出现而愈明显.而T3 Rβ1 mRNA，T3 Rβ2 mRNA虽有增加趋势，并无统计学意义.
T3 R存在多个亚型，其中T3 Rα1 ，T3 Rβ1 ，T3 Rβ2 结合T3 ，对T3 调节起正性作用，而T3 Rα2 不结合T3 ，对T3 调节起负性作用.低T3 综合征时，患者T3 Rα1 mRNA上升，可使在低T3 状态下，机体合成T3 Rα1 增加，增加了机体对T3 的反应性，以对抗低T3 对机体影响.T2 Rα2 不能结合T3 ，其与结合配基的其他T3 R的抑制作用相对，是一个作用很弱的内源性抑制因子.T3 Rα2 不与T3 特异性结合，从而对T3 调节基因转录起负性作用.当机体处在低T3 状态时，T3 Rα2 mRNA上升，可能是由于T3 Rα1 和T3 Rα2 mRNA为同一基因α所转录，T3 Rα的基因转录增加，编码T3 Rα的mRNA剪接产物同时增加，但T3 Rα1 mRNA变化的幅度高于T3 Rα2 mRNA变化幅度，所以在低T3 状态下以正性效应为主.T3 Rβ1 表达水平与其他三个亚型受体不同，与T3 水平无关.T3 Rβ2 被认为是在T3 R各亚型中调节能力最强的受体，低T3 状态时，机体β基因转录上升，T3 Rβ2 mRNA水平上调合成T3 Rβ2 增加，机体对T3 反应性上升，以对低T3 状态进行代偿性反应［4-6］ .
T3 Rα和T3 RβmRNA对不同甲状腺状态表现出不同的反应［7-9］ .在外周血白细胞中T3 RαmRNA的表达大于T3 RβmRNA的表达，这也许是T3 Rα作用大于T3 Rβ.在低T3 状态下，T3 R mRNA总体是上升，这是由于甲状腺功能的异常，机体产生反馈性作用增加T3 R合成，从而增加反应基因上T3 结合位点处T3 R的数目，增加机体对T3 的反应性，以减少在T3 浓度降低时机体平衡被打破而对机体产生不良影响，是机体的一种代偿反应［10］ .当机体低T3 状态被纠正后，T3 含量恢复到正常水平，其基因水平的转录亦逐渐恢复平衡，T3 R合成接近正常，细胞对T3 反应性将恢复正常水平.
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