作者：左巍 马东初 左伟 陈红 杜欣 赵红
【关键词】 狼疮肾炎
关键词: 狼疮肾炎;淋巴细胞亚群;免疫球蛋白
摘 要:目的 探讨狼疮性肾炎（LN）患者外周血淋巴细胞亚群、活化状态和免疫球蛋白的变化及其相互关系. 方法 采用流式细胞仪和酶联检测仪对21例LN进行了研究. 结果 ①LN患者CD3+ +CD4+ （0.24±0.10），CD45RA+ （0.29±0.06），CD45RO+ （0.02±0.02），CD4+ +CD45RA+ （0.11±0.06），CD4+ CD45RO+ （0.05±0.04）细胞比例明显减少，与对照组（0.41±0.09，0.45±0.11，0.05±0.05，0.21±0.07，0.08±0.02）比较P&<0.05，P&<0.01;②LN患者HLA-DR+ （0.13±0.04），CD19+ +HLA-DR+ （0.08±0.03），CD19+ +CD43+ （0.03±0.02），CD19+ +CD5+ （0.05±0.02）细胞比例明显增高，与对照组（0.06±0.04，0.04±0.04，0.01±0.004，0.01±0.01）比较P&<0.05，P&<0.01;③LN患者IgE水平明显升高，与对照组（81±40）kU・L-1 相比，NS组（467±299）kU・L-1 P&<0.01，非NS组（224±151）kU・L-1 P&<0.05，两组比较P&<0.05;IgM，NS组（3.7±2.0）g・L-1 ，非NS组（3.6±2.9）g・L-1 ;IgA，NS组（4.7±1.1）g・L-1 ，非NS组（4.1±2.0）g・L-1 水平也升高（P&<0.05），两组比较，P&>0.05;IgG NS组（6.0±4.8）g・L-1 明显降低，而非NS组（30.5±17.5）g・L-1 明显升高，P均&<0.01，两组比较P&<0.01. 结论 LN患者外周血T淋巴细胞亚群及免疫球蛋白的变化与SLE患者并不完全相同，甚至出现截然相反的结果;LN患者免疫功能的紊乱与淋巴细胞活化及其亚群之间的失调密切相关;LN患者存在B细胞过度活化，由此而产生的自身多克隆抗体是引发本病的根本原因.
Keywords:lupus nephritis;lymphocyte subsets;immunglob-ulins
Abstract:AIM To investigate the distribution of activated state of lymphocyte in peripheral blood and levels of serum immunoglobulins in patients with lupus nephritis.METH┐ODS The immunophenotype of peripheral blood lympho-cytes was analysed by flowcytometry with double-labeling an-ti-CD3，anti-CD4，anti-CD5，anti-CD19，anti-CD43，anti-CD45RA，anti-CD45RO，HLA-DR mAbs，while the levels of serum IgE，IgG，IgA，and IgM were detected by ELISA.The experimental groups were Group A（9cases with nephritic syndrome），Group B（12cases without nephritic syndrome）and control group（30cases of normal volunteers）.RESULTS ①The percentages of CD3+ +CD4+ （0.24±0.10），CD45RA+ （0.29±0.06），CD45RO+ （0.02±0.02），CD4+ +CD45RA+ （0.11±0.06），CD4+ +CD45RO+ （0.05±0.04）cells in LN patients were lower than those in normal volunteers（0.41±0.09，0.45±0.11，0.05±0.05，0.21±0.07，0.08±0.02）（P&<0.05or P&<0.01）;②The percentages of HLA-DR+ （0.13±0.04），CD19+ +HLA-DR+ （0.08±0.03），CD19+ +CD43+ （0.03±0.02），CD19+ +CD5
+ （0.05±0.02）cells in LN patients were higher than those in normal volunteers（0.06±0.04，0.04±0.04，0.01±0.004，0.01±0.01）（P&<0.05，P&<0.01）;③The serum IgE level in Group A（467±299）kU・L-1 and Group B（224±151）kU・L-1 of LN patients was higher than that in normal volunteers（81±40）kU・L-1 （PA &<0.01，PB &<0.05）;Group A was lower than Group B，（P&<0.05）;the serum IgM，IgA levels in Group A（3.7±2.0，4.7±1.1）g・L-1 and Group B（3.5±1.9，4.1±2.0）g・L-1 of LN patients were higher than those in normal volunteers（1.8±0.9，2.7±0.7）g・L-1 （P&<0.05）;the serum IgG level（6.0±4.8）g・L-1 in Group A of LN patients was lower than that in normal volunteers（18.2±5.6）g・L-1 （P&<0.01）.In contrast serum IgG level in Group B（30.5±17.5）g・L-1 was higher than that in the normal volunteers（P&<0.01）;Group A was lower than Group B（P&<0.01）.CONCLUSION The changes of peripheral blood lymphocyte subset and serum immunoglobulins are of some difference be-tween patients with LN and with systematic lupus erythe-matosus.Sometimes they are even opposite.The dysfunction of immune system in the patients with LN may be related to the activation of lymphocytes and imbalance among the subset of lymphocytes.Self-polyclonal antibody produced by B cells with excessive activation may give rise to LN.
0 引言
系统性红斑狼疮（SLE）是一种损伤多脏器的自身免疫性疾病，表现为多种自发抗体的产生和T淋巴细胞数量及功能异常［1，2］ .狼疮性肾炎（LN）免疫功能的紊乱与其不尽相同，我们应用流式细胞仪和酶联检测仪，对LN患者外周血淋巴细胞亚群活化状态及免疫球蛋白的变化及相互关系进行研究如下.
1 对象和方法
1.1 对象 我院1994-01/1999-12住院患者21例，均为女性，年龄19～44（27±9）岁.全部诊断符合1982年美国风湿协会修订的标准，且均处于活动期.根据有无肾病综合征（NS）表现分为NS组（9例）和非NS组（12例）.正常志愿者30例，均为女性，年龄25～49（33±8）岁.
1.2 方法 使用Ficoll（1077g・L-1 ）分离外周血单个核细胞，PBS洗涤2次，以2×1010 ・L-1 悬于PBS中，按文献［3］方法进行标记.所用的异硫氰酸荧光素（FITC）标记的mAb为CD4，CD19，HLA-DR，藻红蛋白（PE）标记的mAb为CD3，CD5，CD43，CD45RA，CD45RO，HLA-DR.以标记FITC的抗钥孔虫戚血蓝素mAb IgG2a和标记PE的抗钥孔虫戚血蓝素mAb IgG1处理细胞作为阴性对照.FACSort流式细胞仪读取数据，每个样本读5000～10000细胞.Cellquest软件分析.采用ELISA法检测血清IgE（试剂盒由天津新传生物技术有限公司提供），IgG，IgM，IgA水平，同时检测血尿素、血肌肝、血清白蛋白及24h尿蛋白排出量.
统计学处理:所有数值均采用x ±s表示，组间采用t检验分析.
2 结果
2.1 外周血淋巴细胞免疫分型 LN患者CD3+ +CD4+ ，CD45RA+ ，CD45RO+ ，CD4+ +CD45RA+ ，CD4+ +CD45RO+ 细胞比例明显减少（与对照组比较，P&<0.05，P&<0.01）;CD5+ 略低于对照组，CD19+ 略高于对照组，但无统计学意义（P&>0.05，Tab1）.
表1 LN患者外周血淋巴细胞分布 略
2.2 外周血淋巴细胞活化状态 LN患者HLA-DR+ ，CD19+ +HLA-DR+ ，CD19+ +CD43+ ，CD19+ +CD5+ 细胞比例明显增高（与对照组比较，P&<0.05，P&<0.01，Tab2）.
表2 LN患者外周血淋巴细胞活化状态 略
2.3 血清免疫球蛋白的变化 LN患者IgE水平明显升高（与对照组相比，NS组P&<0.01，非NS组P&<0.05，两组比较P&<0.05）;IgM，IgA水平也升高（P&<0.05），NS组与非NS组比较，P&>0.05;IgG NS组明显降低，而非NS组明显升高，P均&<0.01，两组比较P&<0.01（Tab3）.
3 讨论
T淋巴细胞是参与机体免疫调节最重要的细胞群之一，其亚群之间相互协调作用维持着机体正常的免疫功能
［4］ .SLE是一种多系统、多脏器受累的自身免疫性疾病，存在着B细胞多克隆活化和T淋巴细胞的异常［1，2］ .而SLE患者外周血T淋巴细胞亚群的异常改变与LN患者并不相同［5］ .前者CD4+ /CD8+ 比值增高，而LN患者CD4+ /CD8+ 比值下降［5，6］ ，并且蛋白尿较重者CD4+ /CD8+ 比值下降更为明显.CD4+ 细胞有两种亚群，一种为CD4+ +CD45RO+ 细胞，它可作用于可溶性抗原，诱导B细胞分泌免疫球蛋白;另一种为CD4+ +CD45RA+ 细胞，可引起前CD8+ 抑制细胞转变成为CD8+ 效应抑制细胞.本结果显示LN患者CD45RA+ ，CD45RO+ ，CD4+ +CD45RA+ ，CD4+ +CD45RO+ 均降低，这可能与转化终止、中间型增加有关，有待于今后研究.作者等研究发现，伴有NS表现的LN患者CD4+ /CD8+ 比值下降较不伴有NS表现的LN患者更明显，且CD4+ /CD8+ 比值下降与CD4+ 凋亡增加有关［6］ ;活化的CD4+ 细胞减少可能是引起LN发病的原因［7］ .本结果提示，CD4+ +CD45RA+ ，CD4+ CD45RO+ 细胞减少可能是CD4+ 细胞减少另一个原因，但其真正原因目前尚无定论.
本结果显示，LN患者CD5+ 下降，CD19+ 升高，但与对照组相比P&>0.05;HLA-DR+ ，CD19+ +HLADR+ ，CD19+ +CD43+ ，CD19+ +CD5+ 较对照组升高（P&<0.01，P&<0.05）.此结果除提示LN患者的B细胞在祖B细胞阶段已明显增多外，而且证明LN患者存在B细胞过度活化.活化的B细胞分化和增殖，逐渐增加分泌型的免疫球蛋白，并可发生免疫球蛋白的类别转换，从产生IgM转换为产生IgG，IgA或IgE的B细胞，由此而产生自身多克隆抗体.本结果表明，LN患者血清IgG水平的变化有明显不同，非NS组明显高于正常人（P&<0.01），NS组明显低于正常人（P&<0.01）;而血清IgE的升高NS组明显高于非NS组.作者等研究发现［8］ ，尿中丢失IgG是引发血清IgG水平降低的一个原因;血清IgG降低可能是导致血清IgE继发升高的一个因素;但血清IgE的合成主要受CD4+ +CD45RO+ 细 胞亚群中主要分泌IL-4的Th3亚群所控制，IL-4是诱导B细胞合成IgM转化合成IgE的关键细胞因子［9］ .因此我们推测IL-4可能在NS的发病中起一定作用，这有待于进一步研究.
参考文献:
［1］Qian Y，Santiago C，Borrero M，Tedder TF，Clarke SH.Lu-pus-specific antiribonucleoprotein B cell tolerance in nonautoim-mune mice is maintained by differentiation to B-1a governed by B cell receptor signaling thresholds ［J］.J Immunol，2001;166:2412-2419.
［2］Hu S，Tao D，He P.Immunophenotying of lymphocyte T and B in the peripheral blood of systemic lupus erythematosus ［J］.J Tongji Med Univ（Engl），2001;21（2）:108-109.
［3］Ma DC，Sun YH，Zuo W，Chang KZ，Chu JJ，Liu YG.CD34+ cells derived from fetal liver contained a high proportion of im-mature megakaryocytic progenitor cells ［J］.Eur J Haematol，2000;64:304-314.
［4］Li XM，Chen JZ，Zhang NY，Nan Y，Xie YH.Association of TCM-bion zheng with T-lymphocyte subsets and thyroidism in patients with diabetes mellitus ［J］.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），2000;21:233-234.
［5］Zeng LX，Sun L，Ye RG，Xu HS，Yu XQ，Kong QY，Zhou FY.Distribution of interleukin-6receptors（CD126and CDw130）on circulating lymphocytes in patients with lupus nephritis ［J］.Zhonghua Neike Zazhi（Chin J Intern Med），2000;39:603-606.
［6］Zuo W，Ma DC，Liu YH，Zuo W，Guan X，Chen H，Zhao H.Mechanism of reduction of CD4
+ cell in patients with lupus nephritis ［J］.Shenzhangbing Yu Touxi Shenyizhi Zazzhi（Chin J Nephrol Dialysis Transpl），1999;8:435-438.
［7］Zuo W，Ma DC，Lu YH，Zuo W，Chen H，Yang ZF，Wang LN.Chang of subset and activated state of lymphocytes from patients with lupus nephritis ［J］.Xibao Yu Fenzi Mianyixue Zazhi（J Cell Mol Immunol），2001;17:316-317.
［8］Zuo W，Zuo W，Chen H，Liu YH，Zhao H，Liu YL.The change and clinical significance of Ig E and Ig G in the patients of lupus nephritis ［J］.Linchuang Huicui（Clini Focus），2000;15:509.
［9］Chen L，Jia ZS，Lin YX，Wang YM.Clinical significance of de-tecting serum IgE levels and allergen skin test in diagnosis of al-lergy ［J］.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），2001;22（4）:344-346.