关于Bcl┐2及Bag┐1基因产物在肾癌组织中的表达及意义

作者：于磊，袁建林，武国军，康福霞，王栋

【关键词】 基因
　　关键词: 基因，Bcl-2;Bag-1;肾肿瘤;免疫组织化学;基因表达
　　摘 要:目的 讨论基因Bcl-2和Bag-1在肾癌组织中的表达及相互关系，了解肿瘤增殖与凋亡的特点. 方法 采用免疫组化SABC法对41例肾癌与10例正常肾组织的石蜡标本切片对照，进行产物表达的统计研究. 结果 Bcl-2在肾癌组织中阳性表达率为75.6%，与正常肾组织30.0%相比，有显著性差异（P&<0.05），但其表达与不同病理细胞类型、病理分级及临床分期无关（P&>0.05）.Bag-1在肾癌组织中表达率为61.0%，正常肾组织10.0%表达.Bag-1与肿瘤分级、分期及预后密切相关（P&<0.05），随肾癌恶性程度增加，其表达强度也增加.Bcl-2与Bag-1的表达正相关（r=0.438）. 结论 肾癌组织中Bag-1表达可作为预后指标;Bcl-2可能参与肾组织由良性向恶性转化的过程，但与癌细胞恶性分化程度无关.
　　
　　Keywords:genes，Bcl-2;Bag-1;kidney neoplasms;immuno-histochemistry;gene expression
　　
　　Abstract:AIM To investigate Bcl-2and Bag-1expressions in renal cell carcinomas and to evaluate their clinical signifi┐cance.METHODS Bcl-2and Bag-1expressions were stud-ied with immunohistochemstry Streptavidin-Biotin-Peroxidase Complex（SABC）methods in41samples of renal carcinoma tissues and in10normal renal tissues，and their clinical sig-nificance were analysed.RESULTS The positive rate of Bcl-2expression in the renal carcinoma tissues was75.6%，while it was30.0%in the normal renal tissues（P&<0.05）.Ac-cordingly，the positive rate of Bag-1expression in the carci-noma tissues was61.0%，it was10.0%in the normal tissues（P&<0.05）.However，Bcl-2was not related to the tumor grade，clinical stage and pathological cell types.On the other hand，Bag-1was positively related to the tumor grade，tumor stage and the prognosis of the patient（P&<0.05）.Significant correlation was noted between Bcl-2and Bag-1（r=0.438）.CONCLUSION Bag-1might serve as a prognostic maker for the renal cell carcinoma.Bcl-2might be involved in the trans-formation of benign to malignant process but is not related to the degree of differentiation of the tumor cells.
　　
　　0 引言
　　
　　Bcl-2与Bag-1都是细胞抗凋亡基因，在肾癌的发病及肾癌细胞逃避凋亡的过程中可能具有不可忽视的重要作用.我们用免疫组化方法控制Bcl-2和Bag-1在肾癌不同病理阶段的表达水平，与正常肾组织作对照，以了解Bcl-2与Bag-1表达的意义及相互关系.
　　
　　1 材料和方法
　　
　　1.1 材料 1989/1997手术切除的肾癌石蜡包埋组织块41例，均来自我院病理科存档标本，平均年龄58.4（46～77）岁.其中透明细胞癌26例，颗粒细胞癌15例.按WHO病理分级:G1 期5例，G2 期13例，G3 期23例.按UICC TNM分期:Ⅰ期18例，Ⅱ期12例，Ⅲ期8例，Ⅳ期2例.所有病理均获随访8mo～5a，平均5a生存率为70.7%.正常肾组织石蜡标本10例作对照.
　　
　　1.2 方法 兔抗人Bcl-2抗体购自美国Santa Cruz公司，兔抗人Bag-1抗体由加拿大Dr.H.Bliss Murphy癌症中心赠送，SABC免疫试剂盒购自武汉博士德公司.石蜡组织连续切片5μm厚，常规脱蜡至水.采用SABC法测定Bcl-2与Bag-1的表达.抗Bcl-2及Bag-1的工作浓度1∶50，生物素化单抗和SABC试剂的工作浓度均为1∶100.石蜡切片经抗原修复后，滴加1∶50抗Bcl-2或抗Bag-1抗体，4℃过夜，次日滴加生物素化山羊抗兔IgG及SABC试剂，DAB显色，苏木精复染，以PBS代替一抗作阴性对照，以已知阳性反应片作阳性对照.Bcl-2染色胞质棕黄色为阳性，Bag-1胞质胞核棕黄色染色为阳性.在10×40倍光镜下随机观察5个视野，计算其平均数，每个视野计数100个细胞.Bcl-2阳性标准:阳性细胞占肿瘤细胞数&<30%为低表达（+），30%～50%为中度表达（），&>50%为高表达（）.Bag-1染色阳性细胞&<10%为低表达（+），10%～30%为中度表达（），&>30%为高表达（）.
　　
　　统计学方法:阳性表达率比较用χ2 检验，平均表达率比较采用t检验，Bcl-2与Bag-1关系采用相关系数（r）分析.
　　
　　2 结果
　　
　　2.1 Bcl┐2与Bag┐1在肾癌组织中的表达
　　
　　2.1.1 Bcl-2的表达 10例正常组织中，阳性3例，阴性7例，阳性率30.0%，阳性细胞多分布在肾小管上皮及肾小球壁层细胞.41例肾癌组织中，阳性31例，阴性10例，阳性率75.6%，Bcl-2蛋白主要表达在癌细胞的胞质，呈棕黄色颗粒.肾癌组织中Bcl-2表达明显高于正常组织，χ2 检验，二者有显著差异（P&<0.05）.肾癌的两种细胞类型中，Bcl-2蛋白在26例透明细胞癌中，阳性19例，阳性表达率为73.1%，15例颗粒细胞癌中，阳性12例，阳性率则为80.0%，χ2 检验，二者无显著差异（P&>0.05），说明Bcl-2的表达与肾癌细胞类型无明显相关（Fig1）. 2.1.2 Bag-1的表达 Bag-1蛋白表达在癌细胞的胞质及核膜，呈棕黄色颗粒.Bag-1在10例正常组织中只有1例阳性表达，阳性率为10.0%，肾癌组织中的阳性表达有25例，占61.0%，χ2 检验，二者有显著差异（P&<0.05）.Bag-1蛋白在26例透明细胞癌中，阳性16例，阳性表达率为61.5%，在15例颗粒细胞癌中，阳性9例，阳性率则为60.0%，χ2 检验，二者无显著差异（P&>0.05），说明Bag-1的表达与肾癌细胞类型无明显相关（Fig2）.
　　
　　2.2 Bcl┐2与Bag┐1表达的意义
　　
　　2.2.1 WHO病理分级 G1期5例，G2期13例，G3期23例.Bcl-2的阳性平均表达率进行每级之间的两两比较，用t检验，结果G1与G2:P&>0.05，G2与G3:P&>0.05，G1与G3:P&>0.05.Bag-1表达结果G1与G2:P&<0.05，G2与G3:P&<0.05，G1与G3:P&<0.05（Tab1）.结果说明Bcl-2与肾癌的病理分级无关;Bag-1与肾癌的病理分级密切相关，病理分级越高，其表达强度相对较高.
　　
　　图1 － 图2 略
　　
　　表1 肾癌组织Bcl-2与Bag-1阳性表达率　略
　　
　　2.2.2 UICC TNM临床分期 Ⅰ期18例，Ⅱ期12例，Ⅲ期8例，Ⅳ期2例.Bcl-2的阳性平均表达率进行每期之间的两两比较，t检验，结果各期之间P&>0.05.Bag-1表达结果各期之间P&<0.05（Tab1）.结果说明Bcl-2与肾癌的临床分期无关;Bag-1与肾癌的临床分期密切相关，临床分期期别越高，其表达强度相对越高.
　　
　　2.2.3 预后情况 所有病理病例均获随访8mo～5a，按5a生存率分组，术后存活超过5a的有29例，占70.7%.分析预后与基因阳性表达的关系，t检验结果:Bcl-2与肾癌的预后无关（P&>0.05），Bag-1与肾癌的预后密切相关（P&<0.05），而且术后生存时间越长，Bag-1的表达越低（Tab1）. 转贴于 　　2.3 Bcl┐2与Bag┐1表达的相互关系 对41例肾癌标本中Bcl-2和Bag-1蛋白的平均阳性表达率进行相关系数分析，r=0.438，二者正相关（Fig3）.说明肾癌的发病机制是由多因素调控的，其中Bcl-2与Bag-1在肾癌的发生及发展过程中有相互促进作用.
　　
　　图3 略
　　
　　3 讨论
　　
　　Bcl-2是一种抗凋亡基因.主要通过抑制细胞凋亡而参与肿瘤的发病，与肿瘤的分级、分期及预后有关［1，2］ .但在肾癌的研究中其表达意义尚不能肯定.Hofmockel等［3］ 测定31例肾癌组织Bcl-2的表达情况，认为其表达与肿瘤的分期分级及预后无关.国内部分研究与其相符［4］ ，但也统计资料认为其表达对评价肾癌的恶性程度及分期等有意义.这可能是因为应用了不同的mAb和不同的免疫组织化学方法所致.我们发现，在各个病理分级及临床分期的肾癌组织中均有Bcl-2蛋白高表达，但Bcl-2的高表达与肿瘤的病理细胞类型、临床分期、病理分级及预后无明显相关性.说明Bcl-2可能参与了肾组织由良性向恶性转化的过程，但与恶性分化可能无关.
　　
　　Bag-1在正常组织中几乎不表达，而在乳癌、肺癌、前列腺癌、肾癌、膀胱癌等中都有阳性表达［5，6］ .
　　
　　本实验表明，Bag-1在正常组织和肾癌组织中表达差 异有显著性，但Bag-1阳性癌细胞在肿瘤组织中所占百分比较低，且正常组织几乎不表达.Bag-1与肿瘤分级、分期及预后具有显著相关性，但与肾癌的病理细胞类型无明显相关性，在高级别、高期别及生存期较短的病例中，其表达强度较高.说明Bag-1与肾癌的发生发展相关，且参与了肿瘤的恶性分化过程.Bag-1的启动子区与Bcl-2具有高度同源性，Bag-1蛋白的抗凋亡机制及途径与Bcl-2相近，可与Bcl-2蛋白密切结合形成复合物，相互增强抗凋亡作用.我们对41例肾癌病理组织切片中Bcl-2与Bag-1的平均阳性表达率进行相关系数分析，r=0.438，表明二者呈正相关.该结果说明肿瘤的发生发展是由多基因调节的，其中抗凋亡基因Bcl-2与Bag-1之间又相互增强作用.
　　参考文献:
　　
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　　［3］Hofmockel G，Wittmann A，Dammrich J，Bassukas ID.Expres-sion of p53and bcl-2in primary locally confined renal carcino-mas:No evidence for prognostic significance ［J］.Anticancer Res，1996;11:3807-3811.
　　［4］Tang QH，Wang H，Chen BQ，Cong YP，Shao GX，Lei F，Wang WY.Experssion and significance of anti-apoptosis gene bcl-2in renal carcinoma ［J］.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），1999;20（2）:141-145.
　　［5］Tang SC，Shaheta N，Chernenko G，Khalifa M，Wang X.Ex-pression of BAG-1in invasive breast carcinomas ［J］.J Clin On-col，1999;17（6）:1710-1719.
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