补肾复方对围绝经期卵巢衰老大鼠血清性激素水平的影响

　　　　 作者：丁原全 万绍晖 王翠霞 马乾章 刘鹏

【摘要】 目的 研究补肾复方对围绝经期卵巢衰老大鼠血清性激素的影响。方法 将实验大鼠随机分为模型组、补肾复方高、中、低3个剂量组、对照组。另选4月龄大鼠为青年组，18月龄大鼠为老年组，连续15 d用药后取血，采用磁性分离酶联免疫测定法测定雌二醇(E2)、睾酮(T)、促卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、孕酮(P)。结果 补肾复方可使升高的T、FSH、LH水平下降，同时显著提高大鼠血清E2、P水平（P＜0.05）。与青年组比较，模型组、老年组及用药各组E2/T均降低（P＜0.05）；与模型组比较，补肾复方各剂量组均能使E2/T比值显著升高（P＜0.05），对照组有升高的趋势，差异不显著（P＞0.05）。结论 补肾复方通过增强内源性雌激素效用，有效地调节多项生殖内分泌激素水平，对围绝经期卵巢早衰具有积极的防治作用。

【关键词】 围绝经期；补肾复方；大鼠；卵巢衰老；性激素

中医认为围绝经期综合征，是肾气渐衰，天癸将竭，肾阴阳失和，冲任二脉虚损而致。肾为先天之本，元气之根，主藏精气，是人体生长发育和生殖的根本。而精又为化血之源，直接为胞宫的行经、胎孕提供物质基础。因此期妇女已历经经、孕、产、乳，肾气逐渐衰退，阴精日益亏耗，不能灌溉五脏，滋养诸经，则易导致脏气不和，诸变迭起。本研究观察补肾复方对围绝经期卵巢衰老大鼠血清性激素水平的影响。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 实验动物

　　Wistar雌性大鼠，由沈阳医学院实验动物中心提供。质量合格证号：SCXK（辽）20030016，微生物控制等级一级。11～12月龄大鼠50只，体重(321.36±29.37)g， 4月龄青年大鼠10只，体重(210±10.54)g；18月龄老年大鼠10只，体重(380±30.18)g。实验前，置辽宁中医药大学动物实验中心动物室于室内适应性饲养1 w。实验期间同一室内笼养，12 h光照，12 h黑暗的条件下，自由饮水，摄食颗粒饲料。大鼠全价颗粒饲料由沈阳医学院实验动物中心提供。室温18～22℃。

　　1.1.2 实验药物

　　补肾复方由熟地、山药、山萸肉、菟丝子、仙灵脾、丹参组成。六味地黄汤（阳性对照组）由熟地、山茱萸、山药、丹皮、泽泻、茯苓组成，按8∶4∶4∶3∶3∶3比例称取生药。所有生药均由辽宁省中医院门诊中药局提供，并经生药检验；由制剂室制作相应浓度的水煎剂。高压密封备用。

　　1.1.3 实验仪器

　　低温高速离心机（BIOFUGE28RS，德国HERAEUS）；低温冰箱（Indeslt，意大利NABILA）；TDL60B离心沉淀机（江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司）等。

　　1.1.4 主要试剂

　　雌二醇(E2)试剂盒、促卵泡刺激素（FSH）试剂盒、促黄体生成激素（LH）试剂盒、睾酮（T）试剂盒、孕酮（P）试剂盒(均购自北京倍爱康生物技术股份有限公司)。生理盐水、乙醚、95%乙醇溶液、1%美兰溶液、4%多聚甲醛固定液、2.5%戊二醛固定液均为国产试剂。

　　1.2 方法

　　1.2.1 造模与分组

　　采用自然老化的围绝经期大鼠模型。以阴道上皮角化试验验证模型，涂片呈现动情周期紊乱、动情间期延长为围绝经期模型成功。随机分为模型组、补肾复方高、中、低3个剂量组、模型对照组。另选4月龄大鼠为青年组，18月龄大鼠为老年组。每组各10 只。

　　1.2.2 给药

　　每天上午9时专人负责灌胃，每日1次，连续灌胃15 d。补肾复方高、中、低剂量组分别相当于人临床一日用量的10、6、3倍量，即含生药分别为5.8、3.5、1.75 g/ml；对照组灌服六味地黄汤，20 ml·kg-1·d-1；模型组、青年组与老年组每日灌服4 ml的生理盐水。

　　1.2.3 标本采集与测定

　　标本采集于最后一次给药24　h后，用20%乌拉坦2～5 ml腹腔注射麻醉后，固定，颈总动脉取血，置于一预先准备好的干净试管中，放入37℃恒温水浴中2 h，再置于离心机中，速度3　000 r/min，离心20 min，分离血清，取上清液，置于-20℃低温冰箱保存，用于测定雌二醇（E2）、T、FSH、LH、P。采用磁性分离酶联免疫测定法测定。严格按照试剂说明书进行实验操作。

　　1.3 统计学处理

　　应用SPSS12.0统计软件，数据以x±s表示，采用单因素方差分析和q检验。

　　2 结 果
　　
　　2.1 补肾复方对大鼠血清E2、T水平的影响

　　见表1。与青年组比较，模型组血清T水平有升高趋势，老年组血清T显著降低（P＜0.05）；与模型组比较，各用药组均能显著降低血清T水平；与对照组比较，补肾复方显著降低血清T水平，随着剂量的增高，降低的幅度在加大。与青年组比较，模型组、老年组及用药各组E2/T均降低（P＜0.05）；与模型组比较，补肾复方各剂量组均能使E2/T比值显著升高，对照组有升高的趋势，但差异不显著；与对照组比较，补肾复方高、中剂量组E2/T比值显著升高，低剂量组有升高的趋势，无统计学意义。表1 补肾复方对大鼠血清E2、T水平的影响(略)

　　2.2 补肾复方对大鼠血清FSH、LH、P水平的影响

　　见表2。随着增龄，血清FSH、LH水平逐渐升高，P水平则降低；用药后，FSH、LH升高及P降低的趋势有所改变。表2 补肾复方对大鼠血清FSH、LH、P水平的影响(略)

　　3 讨 论

　　卵巢合成及分泌的性激素，主要为雌激素、孕激素和雄激素等甾体激素（steroid hormones）。雌激素是由卵泡内膜细胞及颗粒细胞协同作用产生的。体内合成的雌激素以E2和雌酮为主，E2由T经芳香酶转化而来，雌酮则由雄烯二酮转化生成，且E2和雌酮可以相互转化。LH刺激卵泡膜细胞产生雄激素，FSH刺激卵泡颗粒细胞的芳香化酶，将雄激素转化为雌激素。

　　女性卵巢功能衰退最早出现的生殖内分泌变化是垂体FSH的分泌增加〔1〕，这是由于卵巢功能逐渐衰退，内分泌发生紊乱，表现为卵泡发育不全，卵泡颗粒细胞分泌的雌激素水平明显降低，对下丘脑垂体负反馈功能障碍，卵巢分泌的抑制垂体FSH分泌的因子减少所致。LH在卵泡的发育成熟及周期性排卵过程中起着十分重要的作用，LH与其受体结合后启动细胞内一系列酶活动，合成雄激素，在芳香化酶的作用下生成雌激素。垂体LH/FSH的分泌是受下丘脑促性腺激素释放激素（GnRH）及卵巢雌、孕激素的共同协调作用下调控的。当FSH、LH水平升高时，可对卵泡的发育和卵子的生长产生抑制作用，卵巢功能进一步衰退，影响了卵泡正常发育，甚至不能排卵，同时加快了剩余卵泡的闭锁，由此卵巢逐渐走向衰老。

　　本实验结果表明：大鼠随着增龄的变化，大鼠血清E2、P水平显著降低，T、FSH、LH水平显著升高。补肾复方各剂量组可使升高的T、FSH、LH水平下降，同时显著提高大鼠血清E2、P水平，使E2/T比值显著升高。

　　补肾中药具有类雌激素的作用〔2，3〕。补肾复方可能通过下丘脑垂体性腺轴等途径，作用于垂体、下丘脑或更高中枢，直接或间接调节垂体促性腺机能，通过提升体内多种雌激素受体表达，增强内源性雌激素效用，升高E2、P水平，降低FSH、LH、T水平，重建卵巢与垂体之间的负反馈关系，使血中激素建立新的平衡状态。具有补肾、活血、祛瘀作用的中药制剂补肾复方能够有效地调节多项生殖内分泌激素水平，对围绝经期卵巢早衰具有积极的防治作用。

参考文献

　　1 Hermann BP，Heckert LL.Transcriptional regulation of the FSH receptor：new perspectives〔J〕.Mol Cell Endocrinol，2007；260（2）：1008.

　　2 魏玉芳，王长海，刘钰林，等.补肾法对大鼠绝经后骨质疏松模型的影响〔J〕.第四军医大学学报，2007；28（6）：5445.

　　3 董 莉，姜 琳，林晓倩，等.补肾活血方对卵巢早衰患者血清FSH、LH、E2及PRL的影响〔J〕.上海中医药杂志，2007；41（11）：489.