坎地沙坦对高盐致心室肥厚的作用及对炎症因子表达的影响

【摘要】 目的 研究血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）拮抗剂干预在高盐饮食大鼠心室肥厚中的作用及与炎症因子表达的关系。方法 将Wistar大鼠30只随机分为高盐组、高盐+坎地沙坦干预组（2 mg/kg/d）、高盐+三联干预组（mg/kg/d：肼屈嗪20+氢氯噻嗪7+ 利血平0.15）；每组10只。各组均以8% NaCl高盐颗粒饲料喂食；干预组分别予以坎地沙坦或三联药物灌胃。分别在实验前、实验4 w和8 w后测定尾动脉血压，8 w后称左心室重量(LVM)，计算左室/体重指数(LVI)；用酶联免疫法（ELISA）测定各组血清白细胞介素1（IL1β）、白细胞介素6（IL6）的表达。结果 ①高盐喂养8 w后，高盐组较基础血压明显升高（P<0.01），坎地沙坦或三联药物干预组血压较高盐组明显降低（均P<0.01），且两组干预组血压无明显差异(P>0.05)。②坎地沙坦组较高盐组LVM减轻、LVI降低(P<0.01)；而三联药物组虽降低但未达到统计学差异（P>0.05）。③坎地沙坦组较高盐组或三联药物组都有明显的IL1β、IL6表达降低(均P<0.01)，而三联药物组与高盐组间无明显差异(P>0.05)。结论 高盐喂食可以导致心肌肥厚的发生，不完全依赖于血压的升高。AT1R拮抗剂能够逆转高盐对心肌的影响，独立于降压作用之外，与其抗炎作用有关。

【关键词】 高盐；心室肥厚；炎症因子；血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂

高盐摄入是重要的心脑血管危险因素，可通过血压之外的作用对心脏等靶器官产生不良作用〔1〕；血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）1型受体（AT1R）拮抗剂作为一个有效的降压药物，在心血管保护方面的作用与其拮抗循环或局部组织Ang有关。目前认为AT1R拮抗剂还能降低炎症因子，改善心血管微炎症反应〔2〕。本实验旨在观察AT1R拮抗剂坎地沙坦对高盐摄入所致左室结构的影响，并探讨其与炎症因子的关系。

　　1 材料与方法

　　1.1 实验动物

　　清洁级雄性Wistar大鼠30只，体质量（200±10）g，由中科院动物实验中心提供。

　　1.2 主要试剂或药物

　　大鼠白细胞介素(IL)6、IL1β ELISA试剂盒由R&D公司提供；坎地沙坦由广州白云山天心制药股份有限公司提供；肼屈嗪由江苏大丰天生制药提供；氢氯噻嗪由天津力生制药股份有限公司提供；利血平由上海齐奥化工有限公司提供。

　　1.3 主要仪器

　　RBP1型尾动脉血压计（北京中日友好临床研究所），AB104N型1/万电子天平（MetterToledo上海公司），自动平衡式离心机（北京医用离心机厂），STARlet酶联免疫分析仪（Hamilton Bonaduz AG） 。

　　1.4 方法

　　1.4.1 实验模型与分组

　　将30只雄性Wistar大鼠随机分为3组：高盐组、高盐+坎地沙坦干预组、高盐+三联干预组；每组10只。适应性喂养2 w后开始实验。

　　1.4.2 动物喂养与给药

　　各组均以8%氯化钠(NaCl)颗粒饲料喂养，每只大鼠等量喂食，自由饮用自来水。坎地沙坦组大鼠每日按坎地沙坦2 mg/kg灌胃给药，三联干预组每日按（肼屈嗪20+氢氯噻嗪7+ 利血平0.15）mg/kg灌胃给药，高盐组则以等量蒸馏水灌胃作对照；灌胃时间均为8 w。

　　1.4.3 取材

　　高盐饲料喂养8 w后，大鼠用氯胺酮腹腔注射麻醉，剖开胸腔，暴露心脏并取血，分别注入相关试管内，离心，分离血浆或血清，取上清分装，-80℃冰箱冻存备用；取出心脏装入冻存管内，冻存于液氮中，再转移至-80℃冰箱中备用。

　　1.4.4 大鼠血压测定

　　实验前、高盐饲料喂养4 w和8 w后，用尾动脉脉压法监测各组动物清醒状态下的血压，连续测定3次，取平均值。

　　1.4.5 左室质量（LVM）及左室/体重指数（LVI）测定，血浆IL1β、IL6水平的放免测定

　　去除心房、大血管及右室游离壁，将左心室+室间隔准确称量作为LVW，计算LVI。将待测血清样本常温下复融，血浆样本冷水中复融，采用碘标记的放免测定法，严格按照试剂盒说明操作。

　　1.5 统计学方法

　　计量资料以x±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，方差齐性用SNK检验，方差不齐用t′检验。所有实验结果用SPSS13.0版统计软件处理。

　　2 结 果

　　2.1 各组血压变化

　　高盐组、三联药物及坎地沙坦干预组各组基础血压无明显差异（116.9±5.6，116.8±6.0，117.9±4.6）mmHg。治疗8 w后三联药物组及坎地沙坦组较高盐组血压明显下降〔(124.6±7.2)，(125.2±3.0) vs (136.4±3.8)mmHg〕(均P<0.01)，且两干预组间无明显差异（P>0.05）。见图1。

　　2.2 各组LVW、LVI变化

　　三联药物干预8 w后较高盐组LVM以及LVI有下降，但未达到统计学差异〔LVM (mg)：853.4±31.7 vs 830.4±29.6，P>0.05;LVI:2.698±0.283 vs 2.850±0.243，P>0.05〕，而坎地沙坦干预8 w后较高盐组LVM〔(712.4±25.9)mg〕以及LVI〔(2.135±0.232)mg〕明显降低(均P<0.01)。

　　2.3 各组IL1β、IL6水平变化

　　与高盐组相比较，三联药物干预8 w后炎症因子下降不明显〔IL1β(pg/ml):56.34±5.12 vs 61.64±3.78(P>0.05)；IL6(pg/ml):105.67±9.98 vs 113.45±11.03(P>0.05)〕，而坎地沙坦干预8 w后血浆炎症因子IL1β〔(39.68±5.64)pg/ml〕、IL6〔(80.07±8.93)pg/ml〕明显降低(均P<0.01)。

　　3 讨 论

　　本实验中高盐摄入导致左室肥厚，而心室结构改变在三联药物组单纯降压后并没有显著改善，说明高盐摄入导致心肌损伤并不完全依赖于血压的升高。高盐饮食可能是一个非血压依赖性的独立影响因素，即使在不改变血压的情况下仍可以产生对心肌的不良影响〔1〕。

　　高盐饮食导致心室肥厚的机制尚不完全清楚。微炎症是一种低强度、慢性进展非显性炎症状态，是心血管疾病发生发展的重要因素，通过对心肌细胞体内外研究发现炎症因子促进了心肌肥大的发生〔3，4〕。本研究中高盐饮食导致左室肥厚，同时也有炎症因子IL6和IL1β的升高，两者之间可能存在联系。其机制可能是高盐摄入可以不同程度的激活组织或循环肾素血管紧张素系统（RAS）尤其是AngⅡ的活性〔5，6〕；在病理状态下，AngⅡ可增强炎症因子的表达〔7，8〕，而炎症因子如肿瘤坏死因子（TNFα）则可能上调成纤维细胞等的AT1R表达，促进AngⅡ的作用〔9〕；形成RAS与炎症因子之间的恶性循环，导致微炎症反应，继而促进左室肥厚。

　　研究发现AT1R拮抗剂不仅可以降压，而且还有明显的抗炎作用。本实验中坎地沙坦组较三联组同等降压，却明显抑制炎症因子的表达，而三联药物干预单纯的降压并不能有效降低炎症因子表达，可能是AT1R拮抗剂实现心肌肥厚明显降低的有效机制。Schieffer等〔10〕通过对冠心病人的研究也证实了AT1R拮抗剂类似的抗炎作用。AT1R拮抗剂对炎症因子的抑制可能与其对RAS尤其是局部组织AngⅡ的抑制有关〔11，12〕；也可能通过调节核转录因子（NFκB）等产生抗炎作用〔2〕。正是这种有效抗炎作用，AT1R拮抗剂能够独立于其降压作用之外降低心肌肥厚的发生。Varagic〔13〕对高盐喂食的自发性高血压大鼠予坎地沙坦也有类似的降压外保护心肌损伤的作用。

　　总之，高盐摄入不仅对血压产生影响，更对心脏等靶器官产生不良作用；AT1R拮抗剂降压的同时能够减轻微炎症发生，降低高盐摄入对靶器官的损害，具有比较全面的心血管保护作用。本研究也提示了单纯降压的局限性，需要改变生活方式以及有效药物的综合干预才能更好的降低心脑血管疾病的发生。

参考文献

　1 Burnier M，Phan O，Wang Q.High salt intake:a cause of blood pressureindependent left ventricular hypertrophy〔J〕? Nephrol Dial Transplant，2007;22(9):24269.

　　2 Yu C，Gong R，Rifai A，et al.Longterm，highdosage candesartan suppresses inflammation and injury in chronic kidney disease:nonhemodynamic renal protection〔J〕.J Am Soc Nephrol，2007;18（3）:7509.

　　3 张敏莉，李昭屏，肖 晗，等.不同类型心脏肥大大鼠模型心肌中炎症细胞因子表达差异〔J〕.北京大学学报，2007;39(6)：5706.

　　4 吴 杏，叶任高，汪 涛，等.TNFα、IL1β、LPS对心肌细胞影响的研究〔J〕.中国病理生理杂志，2004;20(6)：92934.

　　5 胡剑平，谈世进，丁在咸.雄性激素在高盐引发高血压中的作用〔J〕.中华高血压杂志，2008;16(11):9913.

　　6 Shimamura T，Masui M，Torii M，et al.Hypotensive and prophylactic effects of angiotensin Ⅱ subtype 1 receptor antagonist，irbesartan，in stroke prone spontaneously hypertensive rats〔J〕.Clin Exp Hypertens，2004;26 (1)：2742.

　　7 Labarrere CA，Zaloga GP.C reactive protein：from innocent bystander to pivotal mediator of atherosclerosis〔J〕.Am J Med，2004;117(7):499507.

　　8 杨 维，叶 平，周 新，等.吡格列酮对大鼠肥大心肌细胞炎性细胞因子表达的影响〔J〕.中华老年心脑血管病杂志，2006;8(8):5525.

　　9 Peng J，Gurantz D，Tran V，et al.Tumor necrosis factoralphainduced AT1 receptor upregulation enhances angiotensin IImediated cardiac fibroblast responses that favor fibrosis〔J〕.Circ Res，2002;91（12）:111926.

　　10 Schieffer B，Bunte C，Witte J，et al.Comparative effects of AT1 antagonism and angiotensin converting enzyme inhibition on markers of inflammation and platelet aggregation in patients with coronary artery disease〔J〕.J Am Coll Cardiol，2004;44(2):3628.

　　11 Barauna VG，Magalhaes FC，Krieger JE，et al.AT1 receptor participates in the cardiac hypertrophy induced by resistance training in rats〔J〕.Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol，2008;295(2):3817.

　　12 余 毅，吴可贵.坎地沙坦对盐负荷高血压大鼠肾脏肾素血管紧张素系统表达的影响〔J〕.中国药理学通报，2007;23(6):78590.

　　13 Varagic J，Frohlich ED，Susic D，et al.AT1 receptor antagonism attenuates target organ effects of salt excess in SHRs without affecting pressure〔J〕.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2008;294(2):8538.