活血散结中药外用治疗老年乳腺增生病模型大鼠的疗效研究

　　　　 作者：马民 张桂娟 马义 李德辉 郭慧 翟贺宁 吕志刚

【摘要】 目的 研究活血散结中药外用治疗乳腺增生病的作用机制。方法 60只老年大鼠随机分为对照组、模型组、散结乳癖组、三苯氧胺组、活血散结中药小、中、大剂量组。通过雌孕激素联合造模方法，形成老年乳腺增生病模型鼠，造模同时给予不同药物进行干预。观察治疗前后模型鼠体重、血液流变学、乳房血流动力学、左侧第2只乳头高度及直径、血清激素等方面变化。结果 大鼠经造模并用药干预后，第2周内出现模型组及各用药组大鼠体重增长幅度较对照组明显降低(P＜0.01)，第3周后恢复正常。大鼠乳腺微循环灌注量，模型组和各用药组低于对照组(P＜0.01)；经药物干预治疗后，各用药组微循环灌注量高于模型组(P＜0.01)，活血散结中药中、大剂量组高于散结乳癖组(P＜0.05)。活血散结中药外用能够影响模型大鼠的血液流变学参数，改善血液的高黏高凝状态。各药物组均能明显抑制雌孕激素造模所引起的大鼠乳头高度的变化(P＜0.01)，活血散结中药大、中剂量组效果优于小剂量组和散结乳癖组(P＜0.05)。除活血散结中药小剂量组外，其余各药物干预组均能明显抑制雌孕激素造模所引起的大鼠乳头直径的变化(P＜0.01) ，三苯氧胺组疗效优于其他各组（P＜0.05）；活血散结中药中剂量组和散结乳癖组相比有明显差异(P＜0.05)。活血散结中药能显著降低模型大鼠的雌激素(E2)、泌乳素(PRL)、卵泡生成素(FSH) 水平，升高孕激素(P)、血清睾酮（T）和黄体生成素(LH)水平(P＜0.05)。各药物均能显著降低模型大鼠乳腺增生的程度(P＜0.01)，活血散结中药大剂量组优于散结乳癖组(P＜0.05)，与三苯氧胺组无显著性差异（P＞0.05）。结论 活血散结中药组方外用可改善乳房部血液循环，抑制腺体增生，促进纤维组织吸收，有效调整体内激素水平，对乳腺增生病有良好疗效。

【关键词】 活血散结中药外治；乳腺增生病

　　【Abstract】 Objective To investigate the mechanism of Huoxuesanjie external use for hyperplasia of mammary gland. Methods 60 aged rats were randomly pided into control， model， Sanjierubi emplastrum， tamoxifen paste， Huoxuesanjie traditional Chinese estraderm elements extracting solution small， middle and large dose groups. Hyperplasia mammary gland model rats were made by the union of estrogen and progestational hormone. At the same time of making model， the rats were given different durg. The body weight， hemorheology， breast hemodynamic， height and diameter of the left second ripple and serum hormone level were detected before and after treatment. Results Compared with control group， the body weight increasing degree decreased in model and each treatment groups on second week(P＜0.01) and regain the normal level on the third week. The mammary gland circulation perfusion in control group was higher than that of model and each treatment groups (P＜0.01). After drug interference， the mammary gland circulation perfusion in each treatment group was higher than that of model group (P＜0.01)， and the mammary gland circulation perfusion in Huoxuesanjie middle and large dose group was higher than that of sanjierubi group(P＜0.05). Huoxuesanjie could improve the model rat′s blood high viscosity and highcoagulate state. The change of ripple height in each treatment group could be inhibited (P＜0.01) and the effect of large and middle dose of Huoxuesanjie were better than that of small dose of Huoxuesanjie and sanjierubi (P＜0.05). Except small dose of Huoxuesanjie， the other drug could inhibite the change of ripple diameter (P＜0.0l)， and tamoxifen was better than other drugs and there was obvious difference between middle Huoxuesanjie and sanjierubi (P＜0.05). Huoxuesanjie could efficiently decreased the level of estrogen， prolactin (PRL)， folliclestimulating hormone (FSH) and increase the level of progestational hormone， testosterone， and luteinizing hormone (LH）(P＜0.05).Each drug could decrease the hyperplasia of mammary gland degree (P＜0.0l)， the effect of large dose of Huoxuesanjie was better than that of sanjierubi (P＜0.05) and there was no difference between the large dose of Huoxuesanjie and tamoxifen（P＞0.05）. Conclusions Huoxuesanjie external use has a better therapeutic effect on hyperplasia of mammary gland by improving blood circulation， inhibiting gland hyperplasia， stimulating fibroustissue absorption and regulating hormone level.
　　
　　【Key words】 Huoxuesanjie external use; Hyperplasia of mammary gland

　　乳腺增生病是中老年妇女最常见的乳房疾病，常有不同程度、不同性质的乳房疼痛和肿块。其中非典型增生与老年乳腺癌关系密切，属于癌前病变范畴，是乳腺癌一级预防的重点〔1〕。西医认为本病与内分泌素紊乱有关，目前尚无特效疗法。中药外治法是中医学传统特效的治疗方法之一，具有药物经皮吸收和作用于经络穴位的双重治疗作用，“内病外治”的临床疗效显著。本研究选择疏肝调经、活血软坚的中草药，研制开发成中药药贴外敷治疗乳腺增生病，其不仅通过皮肤、肌肉渗透和穴位刺激直达病灶，而且通过循行于乳房部的肝、胃、冲、任等经络，作用于全身以改善乳房血运，产生止痛、消肿散结及反射性调节内分泌功能的作用，为有效防治老年乳腺癌提供临床实验依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 动物

　　SPF级Wistar雌性大鼠70只，18月龄，体重(380±20)g，南方医科大学实验动物中心提供，合格证号：2006A052；大鼠常规饲养1 w，适应环境后开始实验，用脱毛剂脱去第2、3对乳房周围的体毛进行用药干预。

　　1.2 药物及试剂

　　本药贴系广东省科技攻关课题成果，主要药物有：玫瑰花、橘核、当归、乳香等，各药物按1∶1等分经粉碎、萃取等制剂加工程序，制作成5 cm×5 cm外用中药贴剂，每贴含生药6 g。本研究实用药贴组方提取液。按处方称取玫瑰花等10味中药，加入75%乙醇适量提取3次，收集醇提液；将药渣加水煎煮3次，收集水煎液。醇提液分别在水浴锅水浴并收集滤液和乙醇，将滤液合并浓缩，加入95%的乙醇，醇沉48 h过滤，收集滤液。过滤后的醇提液和水提液合并，浓缩至相对密度为1∶10的浸膏作为药贴组方提取液以外用，由暨南大学医学院研制。散结乳癖贴膏，齐齐哈尔鹤祥制药有限责任公司生产，批号050702，5 g/片，研末后制成软膏，4℃冰箱保存备用。苯甲酸雌二醇（E2）注射液，上海通用药业股份有限公司，批号040304，2 mg/支；黄体酮，浙江仙锯制药股份有限公司，批号040620，10 mg/支；脱毛膏，广州市卡美奥化妆品有限公司，批号K005041302，80 g/支。三苯氧胺，山东健康药业有限公司，批号0504238，10 mg/片，以聚乙二醇4000、聚乙二醇400、丙二醇为基质，制成1%的软膏备用。血清性激素测定药盒(北京北方生物技术研究所)，10%甲醛，3%水合氯醛。

　　1.3 仪器

　　英国Moor公司工EC6011型激光多普勒微循环分析仪;Moor LAB Measurement Statistics软件系统;WT11001R型电子天平（江苏省常州市万德天平仪器厂），OLYMPUS (BH2)照像显微镜、光学显微镜，隔水式电热恒温培养箱(PYXDHS)，LEICA RMZ135切片机等。

　　1.4 方法

　　1.4.1 分组、造模及给药

　　将老年大鼠随机分为7组，每组10只。对照组:自然饲养，不做特殊处理；模型组:大鼠腿内侧肌肉注射苯甲酸E2 0.5 mg·kg-1·d-1，连续25 d，然后肌注黄体酮4 mg·kg-1·d-1，连续5 d，制造乳腺增生动物模型。造模同时自然饲养，不做特殊处理；散结乳癖组:在造模的基础上，同时于造模大鼠乳腺部位分别涂抹散结乳癖贴膏0.2 g；三苯氧胺组：在造模的基础上，同时于造模大鼠乳腺部位分别涂抹三苯氧胺软膏0.2 g；活血散结中药小、中、大剂量组:在造模的基础上同时于造模大鼠乳腺部位分别涂抹药贴成分提取液0.2、0.4、0.8 g。各用药组均为每天1次，并按摩每只乳房1 min，共30 d〔2〕。

　　1.4.2 观察方法

　　各组动物分别于实验开始第1、2、3、4 w末称重;造模及涂药30 d后，用3%的水合氯醛按300 mg/kg经腹腔注射麻醉后，置入37℃温箱内10 min，然后固定于操作平台上，准备以下实验。

　　1.5 实验步骤

　　1.5.1 血流动力学检测

　　造模及用药30 d后用激光多普勒的激光探头轻轻接触大鼠胸前第2对乳房，探头与测定部位垂直，进行微循环血流动力学观察，观察时间为10 s，探头频率40 Hz，38 V。

　　1.5.2 大鼠乳头高度、直径测量及乳房组织取材

　　用精密游标卡尺测量各组大鼠左侧腋前第2只乳头高度、直径；取第2，3对乳房，用10%福尔马林固定，石蜡包埋切片，常规HE染色后在光镜下观察其增生程度。

　　1.5.3 血液流变学、血清性激素检测

　　完成血流动力学测试后，将大鼠固定，从下腔静脉抽取6 ml静脉血，注入已加肝素的试管中，摇匀，行血液流变学检查。另抽取2 ml静脉血，检测血清性激素水平。

　　1.5.4 大鼠乳腺组织学诊断标准

　　参照文献〔3〕，将老年大鼠乳腺组织分为4类:无增生、轻度增生、中度增生、重度增生。

　　1.6 统计学方法

　　实验数据用x±s表示，采用SAS软件进行方差分析和t检验。

　　2 结 果

　　2.1 各组大鼠体重变化

　　见表1。大鼠经E2、黄体酮联合造模并用药干预后，第2周内出现模型组及各用药组体重增长幅度较对照组明显降低(P＜0.01)，第3周后恢复正常。表1 老年模型大鼠体重变化（略）

　　2.2 各组大鼠乳房血流动力学变化

　　各组大鼠乳腺微循环灌注量为：对照组（576.12±20.15）、模型组（402.63±17.26）、散结乳癖组（452.87±21.08）、三苯氧胺组（485.28±25.75）、活血散结中药小剂量组（438.08±22.46）、中剂量组（488.24±25.13）、大剂量组（481.90±24.07）。结果表明，模型组和各用药组大鼠乳腺微循环灌注量显著低于对照组(P＜0.01)；经药物干预治疗后，各用药组微循环灌注量高于模型组(P＜0.01)，活血散结中药中、大剂量组高于散结乳癖组(P＜0.05)，说明活血散结中药外用能够有效地改善大鼠乳房的微循环。

　　2.3 各组大鼠血液流变学变化

　　见表2，模型组大鼠血液出现高黏高凝状态，表现为血液流变学指标均高于对照组(P＜0.05)，经各种药物干预后，血液流变学指标有明显改善(P＜0.05)。实验结果显示活血散结中药外用能够影响模型大鼠的血液流变学参数，改善血液的高黏高凝状态。表2 各组大鼠血液流变学变化（略）

　　2.4 各组大鼠乳头高度及直径变化

　　见表3。各药物干预组均能明显抑制模型大鼠乳头高度的变化(P＜0.01)，活血散结大、中剂量组效果优于活血散结中药小剂量组和散结乳癖组(P＜0.05)。除活血散结中药小剂量组外，其余各药物干预组均能明显抑制模型大鼠乳头直径的变化(P＜0.01)，三苯氧胺组疗效优于其他各组（P＜0.05）；活血散结中药中剂量组和散结乳癖组相比有明显差异(P＜0.05)。表3 各组大鼠乳头高度及直径的检测（略）

　　2.5 各组大鼠血清性激素变化

　　见表4。各药物均能显著降低模型组大鼠的E2水平，升高孕激素(P)水平(P＜0.05)，对于E2的作用活血散结中药大剂量组作用优于散结乳癖组(P＜0.05)，与三苯氧胺组无显著性差异（P＞0.05），对于P的作用三苯氧胺组疗效优于其他各药物组（P＜0.05），活血散结中药大剂量组作用优于散结乳癖组(P＜0.05)；各组药物均能够明显降低模型大鼠泌乳素(PRL)水平(P＜0.05)，活血散结中药大剂量组作用优于散结乳癖组(P＜0.05)；活血散结中药能够提高血清睾酮(T)和黄体生成素(LH)的水平(P＜0.05)，降低卵泡生成素(FSH)的水平(P＜0.05)，且活血散结中药大剂量组作用优于散结乳癖组(P＜0.05)，对于FSH的作用三苯氧胺组疗效优于活血散结中药小剂量组（P＜0.05），与活血散结中药大剂量组无显著性差异（P＞0.05）。表4 各组大鼠血清性激素的测定结果（略）表5 各组大鼠乳腺组织形态学观察结果（略）

　　2.6 各组大鼠乳腺组织形态学变化

　　见表5，模型组大鼠乳房的病理形态以中重度增生为主，与对照组比较有显著差异；经药物干预后，能够显著降低乳腺增生的程度，三苯氧胺组疗效优于散结乳癖组、活血散结中药小剂量组（P＜0.05），与大剂量组无显著性差异（P＞0.05）。活血散结中药大剂量组优于散结乳癖组(P＜0.05)；活血散结中药大、中、小剂量组间无显著性差异(P＞0.05)。

　　3 讨 论

　　乳腺增生病属于中医乳癖的范畴。中医学认为肝气郁结、痰凝血瘀、冲任失调为本病病机，中医药治疗以活血化瘀、化痰散结理气、调摄冲任为基本大法。目前乳腺增生病的治疗尚无特效药物，现代医学认为本病主要是由内分泌功能紊乱，雌激素比例失调所致。以往用单纯的西药和中药复方制剂口服疗程长，病人一般很难坚持治疗，故治疗力求多方位、多靶点给药，转换给药途径〔4，5〕。本研究以玫瑰花、橘核、当归、乳香等10味中药研制成具有活血化痰、散结理气、调理肝肾作用的中药贴剂外用治疗乳腺增生病，临床取得较好疗效。

　　3.1 活血散结中药对老年模型大鼠乳头高度、乳头直径及乳腺组织形态的作用

　　本研究显示，老年大鼠经E2、黄体酮联合造模后，乳头的高度明显高于其他各组，乳房的病理形态以中重度增生为主，说明外源性激素能够很好地复制老年乳腺增生病模型，经药物干预后，呈现较好的治疗效果，活血散结中药大剂量组外用具有明显抑制老年大鼠乳腺组织增生的作用，表现为大鼠乳头高度、直径的缩小，病理形态增生程度的降低，总体疗效优于散结乳癖贴膏，与三苯氧胺作用无显著性差异。

　　3.2 活血散结中药对老年乳腺增生大鼠乳腺血流动力及血液流变学的作用
　　正常机体内，血管的生长与抑制处于相对平衡状态，新生血管受到严格控制，所以乳腺组织很难检测到动脉血流信号。随着乳腺组织的增生，有可能出现新的血管生成，通过特殊的检测设备，能够检测到乳腺组织的血流信号。本实验采用新型的激光多普勒血流计(LDF)，以780 nm激光照射乳腺组织，根据多普勒频移原理反映激光照射范围内流动红细胞的平均速度和密度，所用激光探头的直径仅为0.46 mm，对乳腺组织损害较小，而且监测过程中大鼠保持全身麻醉，实验过程中注意排除外界环境的干扰，因此能准确稳定地反映乳腺组织微循环的变化。

　　本研究中进行激光多普勒微循环检查，观察老年大鼠乳腺的微循环血流动力学，结果老年大鼠乳腺增生造模出现后，局部微循环血流量降低，这可能与乳腺组织增生后，局部表现为瘀血状态有关，而经活血散结中药干预治疗后，可明显得到改善，各用药组微循环灌注量高于模型组，活血散结中药中、大剂量组高于散结乳癖组，说明活血散结中药能够有效地改善老年大鼠乳房的微循环。大鼠血液流变学检测结果表明，经外源性激素造成老年乳腺增生病模型后，血液出现高黏高凝状态，表现为血液流变学参数均高于对照组，经各种药物干预后，有不同程度的改善。实验说明活血散结中药外用可改善局部微循环，提高局部血流量，促进局部代谢产物清除，保持良好的局部环境，对老年乳腺增生病疗效确切〔6〕。

　　3.3 活血散结中药对老年乳腺增生大鼠血清性激素的作用

　　乳腺组织是性腺激素的靶器官，乳腺的生理、病理改变与激素的调节关系十分密切。乳腺导管生长有赖于雌激素的刺激，腺泡的生长有赖于E2和P的共同作用，雌激素的过度刺激可使乳腺上皮细胞及间质细胞增生，使结缔组织水、钠储留增加，进而导致小叶间水肿。P可促使腺泡发育，在一定条件下能对抗雌激素的增生效应，抑制乳腺对E2的反应。在周期性性激素的影响下，乳腺组织发生着节律性的生理变化，已有许多学者证实性激素对乳腺组织的生长、发育及病理改变起着主导作用。本实验通过对老年模型大鼠和正常大鼠血清激素水平的测定，结果显示，经雌、孕激素造模后的大鼠E2，PRL水平明显高于正常大鼠，P水平明显降低，其他激素呈现紊乱状态，活血散结中药能显著降低模型大鼠的E2、PRL、FSH水平，升高P、T和LH水平，这提示活血散结中药的作用机制可能是通过调整体内的内分泌平衡，抑制异常激素对乳腺组织的不良刺激，改善血清性激素的异常分泌来实现的，这可能是活血散结中药外用治疗老年乳腺增生病的作用机制之一。

　　综上所述，本活血散结中药组方外用治疗老年乳腺增生病，其不仅通过皮肤、肌肉渗透和穴位刺激直达病灶，而且通过循行于乳房部的肝、胃、冲、任等经络，作用于全身以改善乳房部血液循环，抑制腺体增生，促进纤维组织吸收，有效调整体内激素水平，对乳腺增生病有良好疗效。活血散结中药外用治疗老年乳腺增生病更深层次的微观机制有待进一步研究。

参考文献

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　　2 林 毅，唐汉钧.现代中医乳房病学〔M〕.北京:人民卫生出版社，2003：1018.

　　3 饶金才，李兰珍，陈云生，等.乳腺增生病动物模型的复制及病理类型〔J〕.中国病理生理杂志，1992；8(6)：6712.

　　4 徐 利，刘丽芳，欧 春.乳增宁贴膏外贴治疗乳腺增生病的临床研究〔J〕.中华中医药学刊，2007；25（1）：1035.

　　5 宋爱莉，李湘奇，孙贻安，等.乳宁霜对乳腺增生病大鼠血液流变学及乳房微循环的影响〔J〕.中国中医药信息杂志，2006；13（8）：202.

　　6 宋爱莉，任旋磊，李湘奇，等.乳宁霜对乳腺增生病大鼠血清性激素影响的实验研究〔J〕.中华中医药学刊，2006；24（12）：217981.