【摘要】 目的 研究马齿苋多糖的抗衰老效果。方法 将衰老小鼠随机分成马齿苋多糖高、中、低剂量组和衰老模型组，每组各10只；青年小鼠为标准对照组。低、中、高剂量组每日分别灌服相应剂量(100、200、300 mg/kg体重)的多糖，共30 d。衰老模型组和标准对照组每日灌服同等剂量（1 ml）的生理盐水。结果 各剂量马齿苋多糖均能明显降低老年小鼠血清和脑组织丙二醛（MDA）、一氧化氮自由基（NO）、脂褐质（LPF）含量及明显提高超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）活力和胸腺、脾、肝指数。结论 马齿苋粗多糖可能通过改善自由基代谢发挥抗衰老作用。
【关键词】 抗衰老；马齿苋粗多糖；超氧化物歧化酶；脂褐质；抗氧化；小鼠
马齿苋属一年生草本植物，具有药食两重性。以往的实验表明马齿苋可以治疗急性肠炎、痢疾、腹泻等〔1〕。现代医学研究表明，马齿苋具有抗肿瘤〔2〕、抗氧化、对人红细胞膜具有保护作用〔3〕。近年来，马齿苋亦被用于治疗高脂血症、老年性冠心病及动脉硬化等疾病，收到了良好的疗效〔4〕。朱晓宦〔5〕报道马齿苋粗多糖的提取及清除经自由基活性作用，但马齿苋粗多糖在生物体内的抗氧化作用，尚未研究。为了考察马齿苋粗多糖是否具有抗老化的作用，本实验研究了马齿苋多糖对衰老小鼠体内氧化应激的影响，进一步研究马齿苋多糖的药理作用。
1 资料与方法
1.1 实验动物
衰老昆明小鼠，12月龄，体重(45±3)g，40只，雌雄各半；青年昆明小鼠，体重(26±2)g，10 只，2月龄，雌雄各半，实验动物由本学院动物室提供。
1.2 试剂
一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)、丙二醛(MDA)、脂褐素质(LPF)试剂盒由众磊生物科技发展有限公司提供。
1.3 马齿苋多糖的制备〔6〕
野生马齿苋采自新疆省石河子市市郊，采后全草经清洗于70℃下烘干，干粉用水浸泡，料水比1∶20，加热提取，静置离心，取滤液减压浓缩至原体积的25%。浓缩液加入2～4倍体积的95%乙醇沉淀，沉淀物依次用无水乙醇、丙酮及乙醚洗涤，用蒸馏水复溶，透析，Sevage法除蛋白，烘干得马齿苋多糖粗品。
1.4 实验方法
1.4.1 动物分组
将衰老小鼠随机分成高、中、低剂量组和实验对照组（衰老模型）；每组10只。10只青年小鼠为标准对照组。低、中、高剂量组每日分别灌服相应剂量的多糖（100，200，300 mg/kg体重），共30 d。实验对照组和标准对照组每日灌服同等剂量的（1 ml）生理盐水。眼眶取血，3 000 r/min离心10 min取血清，各组取肝脏、脾脏、胸腺称重，取脑冰浴条件下制备组织匀浆。脏器指数=脏器重(g)／体重(g)×100。
1.4.2 检测指标
脑组织中GSHPx、SOD、MDA、LPF测定：分别取青年组、老年组及多糖组小鼠脑50 mg，置于9倍组织重的预冷的生理盐水中，冰水浴中匀浆10 min，制成10%的组织匀浆液，于4℃，10 000 r/min，离心15 min，取上清液测定NO、GSHPx、SOD、MDA、LPF含量，采用众磊生物科技发展有限公司提供的试剂盒，测定严格按试剂盒操作程序进行。血清中NO、GSHPx、SOD、MDA测定：分别取青年组、老年组及多糖组小鼠血，3 000 r/min离心10 min取血清，上清液测定NO、GSHPx、SOD、MDA 含量。
1.5 统计学分析
数据采用SPSS 11.0软件包完成统计分析。结果以x±s表示，多组间样本均数比较采用t检验进行。
2 结 果
2.1 马齿苋多糖对各组鼠胸腺指数，脾指数和肝指数的影响
与青年小鼠比，衰老小鼠的胸腺指数、肝脏指数和脾脏指数明显下降（P＜0.01），衰老小鼠连续灌服多糖30 d后，能剂量依赖地抑制衰老小鼠胸腺指数、肝脏指数和脾脏指数的下降（P＜0.05，P＜0.01）。见表1。表1 马齿苋多糖对脏器指数的影响(略)
2.2 马齿苋多糖对鼠脑组织MDA，SOD，GSHPx，LPF水平的影响
与青年小鼠比，衰老小鼠脑中MDA、LPF水平明显上升（P＜0.01），而脑中SOD、GSHPx的活力明显下降（P＜0.01）；衰老小鼠连续灌服多糖30 d后，多糖能剂量依赖地抑制脑中MDA，LPF水平含量升高和SOD及GSHPx活性下降（P＜0.05；P＜0.01）。见表2。表2 马齿苋多糖对脑组织MDA，SOD，GSHPx，LPF水平的影响(略)
2.3 马齿苋多糖对各组鼠血清中MDA，SOD，GSHPx，NO水平的影响
与青年小鼠比，衰老小鼠血清中MDA、NO水平明显上升（P＜0.01），而脑中SOD、GSHPx的活力明显下降（P＜0.01）；衰老小鼠连续灌服多糖30 d后，多糖能剂量依赖地抑制脑中MDA，NO水平含量升高和SOD及GSHPx活性下降（P＜0.05，P＜0.01）。见表3。表3 马齿苋多糖对各组鼠血清中MDA，SOD，GSHPx，NO水平的影响(略)
3 讨 论
本研究显示衰老小鼠血清和脑SOD、GSHPx活力下降、MDA含量增高，表明衰老小鼠体内产生氧化损伤，脂质过氧化物的体内蓄积量增大。牛广财等报道〔7〕，马齿苋多糖能不同程度增加血清中SOD及GSHPx活力，极显著降低MDA含量。这与本结果相一致，马齿苋多糖随能够随剂量增加而加强体内自由基的清除，从而减少自由基对机体的损害。马齿苋多糖不仅对衰老小鼠SOD的活性有促进作用，而且对GSHPx的活性也有明显的提高，同时能够抑制MDA含量的增加。说明马齿苋多糖的抗衰老作用与其提高抗氧化酶的活性和抑制脂质过氧化物的产生等抗氧化作用密切相关，而且这种作用随剂量的增加而加强。
LPF是膜脂质和蛋白质过氧化形成的复合产物Schiff碱，其含量与年龄增长呈正相关。过氧化脂质可以经过氧化物酶分解，生成MDA，然后与蛋白质、肽类、脂类聚合，交联形成老年色素或脂褐素。存在于脑组织中脂褐素随着年龄老化而增多，本研究结果表明，马齿苋多糖能够随剂量增加减少脂褐素和MDA的含量，
NO是一种难溶于水的脂溶性气体，其分子结构中含有不配对电子，故NO也是一种自由基〔8〕，NO对于机体的作用具有双重性。一方面，它可以与氧自由基相互作用生成具有更强毒性的过氧亚硝酸自由基（·OONO-），促进脂质过氧化反应而加速衰老。另一方面，NO又具有清除自由基的作用，使自由基灭活，避免脂质过氧化而起到延缓衰老的作用。有文献报道，衰老与NO过量合成产生细胞毒作用有密切关系〔9〕，本实验验证了这一结论，马齿苋多糖低、中、高剂量给药组的血清NO水平低于对照组，说明低、中、高剂量马齿苋多糖可能是通过降低血清NO的含量，进而减少过氧亚硝酸自由基的生成，间接抑制脂质过氧化反应而起到了抗衰老的作用。
衰老的免疫学学说认为，细胞免疫功能低下是导致衰老及多种老年性疾病的重要原因之一〔10〕。马齿苋多糖提高免疫功能的作用已被研究，如卢新华等报道〔11〕，马齿苋多糖可显著提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数，促进溶血素及溶血空斑的形成，促进淋巴细胞的转化。王晓波等报道〔12〕，不同剂量马齿苋多糖与对照组相比可明显促进淋巴细胞的转化、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力，可有效的增加荷瘤小鼠脾淋巴细胞的转化和腹腔巨噬细胞的吞噬能力以及白介素1(IL1)和白介素2(IL2)的分泌。本实验结果发现，老年小鼠的肝脏指数、脾脏指数和胸腺指数明显低于年青对照组，马齿苋多糖能显著提高老年小鼠的肝脏指数、胸腺指数和脾指数，提示马齿苋多糖可能通过调节机体的细胞免疫功能，来延缓衰老，
参考文献
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12 王晓波，刘殿武，王立芹，等.马齿苋多糖对S180荷瘤小鼠免疫功能的影响〔J〕.天然产物研究与开发，2005;17（14）:4536.