【摘要】 目的: 探讨诱导分化剂维胺酸对卵巢浆液性囊腺癌细胞超微结构的影响。方法: 选取37例晚期卵巢浆液性囊腺癌患者为研究对象， 随机分为两组， 了解在手术和化疗的基础上联合维胺酸诱导分化治疗后肿瘤细胞超微结构的变化。结果: 诱导分化组肿瘤细胞出现明显的成熟性分化趋势: 核浆比例减小， 细胞质较丰富; 细胞间出现发育较好的桥粒连接、 紧密连接; 线粒体数量增加形态较规则， 基质电子密度增加; 细胞质内糖原颗粒丰富; 部分细胞中出现数量较多的粗面内质网和形态较规则的高尔基复合体。结论: 诱导分化剂维胺酸可诱导和促进肿瘤细胞分化， 诱导分化疗法能够改善卵巢浆液性囊腺癌肿瘤细胞的恶性生物学行为。
【关键词】 卵巢浆液性囊腺癌; 维胺酸: 超微结构
卵巢恶性肿瘤是女性常见恶性肿瘤之一， 死亡率高居女性生殖系统恶性肿瘤之首， 尤其晚期卵巢癌患者的5年存活率一直徘徊在30%～40%左右。因此如何提高晚期卵巢癌生存率变得十分重要。本研究旨在手术和化疗的基础上联合维胺酸诱导分化治疗后， 观察卵巢浆液性囊腺癌组织肿瘤细胞超微结构的变化， 我们在寻找一种更为有效的治疗晚期卵巢癌的手段。
1 对象和方法
1.1 研究对象 选取2000-01/2005-12月间， 烟台毓璜顶医院妇科初治的晚期卵巢浆液性囊腺癌患者37例为研究对象， 随机分为两组， 实验组20例（高分化5例、 中分化5例、 低分化10例）， 年龄24～78岁; 对照组17例（高分化4例、 中分化5例、 低分化8例）， 年龄20～75岁。
1.2 方法 所有患者入院后先进行腹腔镜探查确定为III期（FIGO1988卵巢肿瘤分期标准）卵巢浆液性囊腺癌。探查内容包括彻底抽吸腹水、 准确分期、 腹腔转移灶电灼、 腹腔灌注DDP 60 mg/m2化疗和标本采集。腹腔镜探查后次日进行拓扑特肯1.2 mg/m2（topotecan， TP）全身静脉化疗， 其中实验组在此基础上加服诱导分化剂维胺酸30 mg/d; 对照组不加任何处理。3周后两组患者均全麻下开腹行卵巢癌肿瘤细胞减灭术， 手术中再次留取组织标本， 方法同上。将所采集新鲜组织标本切块分成2份， 1份以100 g/L中性甲醛液固定， 石蜡包埋， 4 μm切片， HE染色， 光镜观察， 另1份置25 g/L戊二醛中固定， 0.1 mol/L的磷酸缓冲液漂洗过夜， 10 g/L四氧化锇固定液固定2 h， 0.1 mol/L的磷酸缓冲液和蒸馏水分别漂洗， 分别用乙醇和丙酮梯度脱水， Epon812环氧树脂包埋， 置温箱中聚合过夜， 将包埋好的组织块在普通石蜡切片机上切成0.5-2 μm半薄切片， 显微镜下观察定位， 100 g/L的冰醋酸去氧化剂中浸泡， 无水乙醇洗涤后烘干， 制成50 nm的切片， 用枸橼酸二铅染色， JEM1200EX透射电镜对肿瘤组织标本进行电镜检查观察分析。
2 结果
2.1 光镜观察 单纯化疗组（对照组）肿瘤组织的周边（与腹腔内化疗药物接触）可见大量坏死肿瘤细胞， 组织中也可见散在的坏死细胞， 细胞膜消失， 细胞核碎裂消失， 细胞质区域无任何细胞器。另外还可见数量不一的凋亡细胞。维胺酸诱导分化组（实验组）肿瘤细胞除可见细胞凋亡坏死外， 还可见细胞及细胞核形态较规则， 细胞质丰富， 并可见大片的透明样变。
2.2 电镜观察 对照组肿瘤细胞的形态轮廓尚在， 部分细胞膜欠完整。细胞核异染色质边集， 部分核固缩、 碎裂， 细胞质内线粒体、 内质网等细胞器减少或消失， 出现较多的空泡样结构， 溶酶体数量增加（图1）。
实验组除了因化疗所致的肿瘤细胞凋亡坏死等特征以外， 还清楚可见存留的卵巢浆液性囊腺癌组织细胞形态渐趋规则， 细胞核形态也较规则， 核仁不明显， 核浆比例变小， 异染色质丰富。细胞表面微绒毛减少， 细胞之间出现发育较好的桥粒连接和紧密连接， 部分细胞之间可见较典型的连接复合体。细胞质较丰富， 细胞器发育较好、 数量较多， 并可见成堆的糖原颗粒和较丰富的粗面内质网， 部分细胞内出现较成熟的高尔基复合体。细胞内线粒体数量明显增加， 体积变小， 形态较规则呈圆形或杆状， 大小较一致; 线粒体内室变小， 内嵴明显， 基质电子密度增高。凋亡细胞也明显增多（图2）。
3 讨论
卵巢上皮性癌是最常见的卵巢肿瘤， 因其在发生转移时才出现非特异性症状， 故患者在诊断时已属晚期， 是妇科肿瘤中预后最差、 死亡率最高的恶性肿瘤。尽管超广泛的手术及反复大剂量的化疗可暂时控制肿瘤的发展， 一定程度上延长患者的存活时间， 然而由于其同时存在的对机体正常细胞的损伤， 可造成严重的毒副作用， 使得部分患者无法耐受， 常常妨碍了疗程的顺利进行， 因而限制了其疗效的进一步提高， 晚期患者的5年存活率一直徘徊在30%～40%左右。将细胞诱导分化剂维胺酸作为卵巢癌化疗的辅助治疗， 其本身并不杀伤肿瘤细胞， 自然也不杀伤正常细胞， 而是通过诱导肿瘤细胞向高分化成熟阶段分化， 使其恢复部分正常细胞或接近正常的表型与功能， 来完成其抗肿瘤功效。许多体外实验［1-3］也证明维甲酸类药物对胃癌、 肺癌、 肝癌、 乳腺癌等多种肿瘤细胞的生长增殖、 运动黏附、 侵袭能力和转移起抑制作用， 并促进凋亡， 诱导分化。
我们采用维胺酸诱导分化联合手术及化疗后， 电子显微镜下卵巢浆液性囊腺癌肿瘤细胞的超微结构显示出明显的高分化趋向转变。组织细胞形态渐趋规则， 细胞核形态也较规则， 核仁不明显， 核浆比例变小， 异染色质丰富。细胞表面微绒毛减少， 细胞之间出现发育较好的桥粒连接和紧密连接， 部分细胞之间可见较典型的连接复合体。细胞质较丰富， 细胞器发育较好、 数量较多， 并可见成堆的糖原颗粒和较丰富的粗面内质网， 部分细胞内出现较成熟的高尔基复合体。细胞内线粒体数量明显增加， 体积变小， 形态较规则呈圆形或杆状， 大小较一致; 线粒体内室变小， 内嵴明显， 基质电子密度增高。刘琦等［3］用全反式维甲酸对卵巢上皮性癌荷瘤鼠干预后肿瘤细胞的超微结构变化从体外实验进一步证实维甲酸类药物对肿瘤细胞的诱导分化作用。国内还有研究者分别观察了乳腺、 子宫内膜从增生性病变到癌的细胞超微结构变化， 其结果与本研究应用维胺酸后的变化正好相反， 说明维胺酸可能具有使癌细胞逆转的作用［4-6］。
本研究在临床实验从细胞形态学上证明了维胺酸对卵巢浆液性囊腺癌肿瘤细胞的诱导分化作用， 从而为治疗晚期卵巢癌患者提供了更有效的辅助治疗手段。
参考文献
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