作者：龙铟，刘莉，王宗仁，夏天，马世平，陈学福，梅其炳，晏培松
【关键词】 芪丹通脉片
【Abstract】 AIM: To study the effects of Qidantongmai tablet (QDTMT )， a compound preparation made up of pure traditional Chinese medicine， on platelet function in rats with myocardial injury. METHODS: The suspension of QDTMT was administered to SD rats by gastrogavage for 14 days and from the 12th day rats were given subcutaneous injection of isoproterenol (ISO， 48 μmol・kg-1d-1) once per day for three days， thus establishing the myocardial injury model. RESULTS: Compared with model group， the group treated with QDTMT markedly alleviated the myocardial injury， inhibited platelet aggregation， decreased thromboxane B2（TXB2）level and increased 6ketoprostaglandinF1α (6ketoPGF1α) level and 6ketoPGF1α/TXB2 ratio (P&<0.05， 0.05， 0.05， 0.01). CONCLUSION: The results show that QDTMT can inhibit the activation of platelet function and regulate the equilibrium of prostaglandin and thromboxane to prevent myocardial injury.
【Keywords】 Qidantongmai tablet; myocardial injury; platelet function; rats
【摘要】 目的： 研究中药复方制剂芪丹通脉片（QDTMT）对心肌损伤大鼠血小板功能的影响. 方法： 用QDTMT 给SD大鼠连续灌胃14 d，第12日起动物皮下注射ISO（48 μmol・kg-1d-1），每日一次，连续3 d，复制心肌损伤大鼠模型. 结果： 中药复方制剂QDTMT能明显减轻心肌损伤程度，抑制血小板聚集功能，降低血浆血栓素B2（TXB2）水平，提高6酮前列腺素(6ketoPGF1α)水平和 6ketoPGF1α/TXB2比值，与模型组相比有显著性差异（P&<0.05， P&<0.05， P&<0.05和P&<0.01）. 结论： QDTMT可能通过抑制血小板活化，调节前列环素与的血栓素平衡来抗心肌损伤.
【关键词】 芪丹通脉片；心肌损伤；血小板功能；大鼠
0引言
心肌缺血时，血小板聚集和释放反应增强，提示存在血小板活化. 血小板活化不仅是动脉粥样硬化和血栓形成的必要条件，而且对缺血后梗死范围的扩展和疾病的预后起着重要作用［1］. 根据临床经验研制的中药复方制剂芪丹通脉片（Qidantongmai tablet， QDTMT）能明显改善心肌缺血程度和范围，并且具有细胞保护作用［2，3］. 我们观察QDTMT对心肌损伤大鼠血小板功能的影响，以进一步研究QDTMT的抗心肌缺血作用.
1材料和方法
1.1材料健康雄性SD大鼠32只，体质量（268±35） g，第四军医大学实验动物中心提供. QDTMT由黄芪30 g、丹参30 g、当归15 g、红花30 g、桂枝10 g组成，上述5味药的提取浸膏干粉由西京医院生产，1 g干粉相当于2.86 g生药；硫氮卓酮片（herbesser， HB），30 mg/片，上海延安制药厂产品（批号：951206）；异丙肾上腺素粉剂（isoproterenol， ISO），Sigma公司产品；二磷酸腺苷(ADP)为Sigma公司产品，用缓冲液配成终浓度为3 μmol・L-1的溶液，现配现用. 枸橼酸钠，500 g/瓶，北京工业学校产品，批号：921015，用双蒸水配成3.8%的溶液. 消炎痛EDTA・Na2液由解放军总医院东亚免疫技术研究所提供. 6酮前列腺素（6ketoprostaglandinF1α， 6ketoPGF1α)放免试剂盒及血栓素B2（thromboxane B2， TXB2）放免试剂盒均由解放军总医院东亚免疫技术研究所提供（批号: 980428）；乙醚，500 mL/瓶，西安化学试剂厂产品（批号：951208）. 日产Bh3 型Olympus显微镜；PABER1型血小板聚集、血凝测试仪，北京中勤世帝科学仪器有限公司制造；TLLC型台式冷冻离心机，军事医学科学院实验仪器厂制造.
1.2方法将动物随机分为4组，每组8只：生理盐水组（NS）；ISO心肌损伤模型组（Model）；QDTMT治疗组（QDTMT）；HB治疗组. 以上各组分别用10 mL・kg-1生理盐水或相应等体积的药物悬液连续灌胃14 d，每日2次，自第12日上午灌胃后1 h，按文献［4］复制ISO性大鼠心肌损伤模型，Model组、QDTMT组、HB组动物皮下注射ISO（48 μmol・kg-1・d-1），NS组动物皮下注射等量的生理盐水，连续3 d，全部动物于末次注射ISO 24 h后乙醚麻醉动物，剖腹并分离腹主动脉，采血5 mL，其中2 mL放入含38 g・L-1枸橼酸钠（按血液与抗凝剂9∶1比例配备）的“血小板最大聚集率（MPAR）”离心管，以200 g离心8 min，分离上层富血小板血浆（PRP），余血再以2200 g离心10 min，分离上层贫血小板血浆（PPP），用PPP调整PRP，使其血小板数量为4×105・mm-3，在血小板聚集仪上测定；3 mL放入含消炎痛EDTA・Na2的“TXB2及6ketoPGF1α” （按血液与抗凝剂50∶1比例配备）离心管中，4℃离心，3000 g，15 min，分离血浆，-20℃保存，按操作说明测定各指标. 取心尖部心肌用100 g・L-1的福尔马林溶液固定，制作6 μm组织切片，HE染色，参照标准［5］将心肌病理损伤分级.
统计学处理：实验数据用SPSS10.0软件进行非参数kruskalwallis检验及mannwhitney检验. 采用Ridit分析法统计.
2结果
2.1各组大鼠心肌病理损伤分级的比较NS组8只大鼠心肌损伤程度均为0°; Model组心肌损伤程度为4只 Ⅱ°，4只 Ⅲ°;ODTMT组心肌损伤程度为2只Ⅰ°，6只Ⅱ°；HB组心肌损伤程度为1只Ⅰ°，6只Ⅱ°，1只Ⅲ°.
经Ridit分析法统计，NS组和Model组二组间有显著性差异(P&<0.01);ODTMT组、HB组间无显著性差异（P&>0.05），两组分别与Model组比较有显著性差异（P&<0.05）.
2.2QDTMT对血小板功能的影响与NS组相比，Model组大鼠血浆TXB2水平和MPAR显著增高，6ketoPGF1α水平和6ketoPGF1α/TXB2比值明显降低（P&<0.01）. 与Model组比较，QDTMT组血浆TXB2和MPAR明显降低（P&<0.05），6ketoPGF1α和6ketoPGF1α/TXB2 比值显著提高（P&<0.05， P&<0.01），HB组有降低血浆TXB2水平及提高6ketoPGF1α/TXB2比值的趋势（P&>0.05），增加6ketoPGF1α水平和降低MPAR（P&<0.05， Tab 1）.
表 1QDTMT对异丙肾上腺素心肌损伤大鼠血小板的影响（略）
3讨论
我们在实验中观察到，Model组的心肌病理损伤从心内膜到心外膜，有片状坏死灶，甚至大片状坏死灶之间相互连接，肌纤维排列紊乱、增生，坏死细胞胞质溶解，坏死间质区炎性细胞浸润. 结果说明心肌损伤大鼠模型是成功、可靠的. QDTMT组与钙离子拮抗剂HB组大鼠心肌病理损伤则主要表现为散在性点状坏死，多为局限于心内膜下的凝固性坏死灶，或呈灶间无连接的片状坏死灶，提示益气活血药QDTMT可能具有保护心肌的作用.
PGI2与TXA2是花生四烯酸代谢产物，分别由血管壁内皮细胞内及血小板合成. TXA2具有强烈的促血小板聚集和收缩冠脉血管作用，PGI2则能抑制血小板聚集和舒张冠脉血管，TXB2和6ketoPGF1α分别是其代谢产物；构成了PGI2TXA2平衡调节系统，在调节血小板功能，维持血管张力及血管壁的完整性方面有重要的意义. TXB2随心肌缺血程度的加重而逐渐升高，6ketoPGF1a则逐渐降低，6ketoPGF1α/TXB2比值减少［1］；说明冠脉狭窄引起心肌缺血时，血小板功能可能发生明显异常，造成冠脉循环障碍，促进血栓形成，利用药物可降低血小板聚集功能，改善心肌供血，提高患者存活率［6］. 因此，血小板聚集率，血小板代谢产物TXB2及6ketoPGF1α的测定对观察血小板活化聚集情况及监测CHD病情有重要的意义.
冠心病心绞痛属于中医胸痹范畴，其基本病机为气虚血瘀，属于本虚标实证，本虚以气虚为主，标证则以血瘀多见. 研究发现，冠心病血瘀证患者TXB2升高，6ketoPGF1α降低，6ketoPGF1α/TXB2比值降低；提示TXB2是血瘀的主要特征之一，PGI2是气虚的表现，PGI2TXA2失衡则构成气虚血瘀的病理基础之一［7］. 根据中医气血相关理论配伍的中药复方制剂QDTMT具有益气活血、通脉止痛之效，临床治疗冠心病心绞痛已取得显著疗效［8］. 本实验中发现，Model组大鼠血浆TXB2水平和MPAR分别增加68%和119%，6ketoPGF1α水平和6ketoPGF1α/TXB2比值分别减少61%和76%，而QDTMT 组血浆TXB2和MPAR分别降低 15%和22%，6ketoPGF1α水平和6ketoPGF1α/TXB2比值提高 87%和120%，提示QDTMT能抑制血小板活化，调节PGI2TXA2平衡性，说明诸药合用具有益气活血，标本兼治的功效，这可能是QDTMT具有抗心肌损伤和活血化瘀作用的重要机制之一，为临床应用QDTMT 提供了实验依据.
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