作者：马爱玲，王宗仁，李军昌，行利，郑瑾，王文，李晶华
【关键词】 缺血再灌注
【Abstract】 AIM: To investigate the effects of Qidantongmai tablet (QDTMT) on the equilibrium between ET and NO and the equilibrium between TXB2 and 6ketoPGF1αin the canine model of myocardial ischemia reperfusion injury (MIRI). METHODS: Twentyfour adult healthy crossbred canines were randomly assigned to four groups: Control group， ischemia preconditioning group， QDTMT low dosage group (QDTMTL) and QDTMT high dosage group (QDTMTH). Canines in all groups took QDTMT (or NS) orally for a week under the same condition. The model of MIRI was established by ligating levoanterior descending branch of coronary artery. The contents of ET， NO， TXB2 and 6ketoPGF1α in plasma were measured at four time points: Predrug (T1)， 20 min after ligation (T2)， 10 min (T3) and 30 min (T4) after reperfusion respectively and the equilibrium between NO / ET and that between 6ketoPGF1α/ TXB2 were analyzed. RESULTS: Compared with the control group， QDTMTL and QDTMTH reduced the level of ET and TXB2， promoted the expression level of NO， increased the activity of 6ketoPGF1α， and regulated the equilibrium between NO and ET and that between 6ketoPGF1α and TXB2 （P&<0.05， P&<0.01）. There is no significant difference between QDTMT groups and the ischemia preconditioning group（P&>0.05）. CONCLUSION: Just as ischemia preconditioning， QDTMT has good protective effects on MIRI. The mechanism of protection relates to its function of decreasing the level of ET and TXB2， promoting the expression level of No， increasing the activity of 6ketoPGF1α， and regulating the equilibrium between NO and ET and the equilibrium between 6ketoPGF1α and TXB2.
【Keywords】 ischemia reperfusion; ischemia preconditioning; Qidantongmai tablet; endothelin; nitric oxide; thromboxane B2; 6ketonprostaglandin.
【摘要】 目的： 观察芪丹通脉片（Qidantongmai tablee， QDTMT）对心肌缺血再灌注损伤（MIRI）犬的血浆内皮素（ET）/一氧化氮（NO）平衡、血栓素B2（TXB2）/6酮前列腺素（6ketoPGF1α）平衡的影响. 方法： 成年健康杂种犬24只，随机分为空白对照组（Control）、缺血预处理组(IP)、QDTMT低剂量组（QDTMTL）、QDTMT高剂量组（QDTMTH），均于同等条件下口服给药(或生理盐水)1 wk后，采用结扎犬冠状动脉左前降支的方法建立MIRI模型，分别测用药前（T1）、结扎后20 min (T2)、再灌注后10 min (T3)，再灌注后30 min （T4）4个时间点血浆ET， NO， TXB2与6ketoPGF1α的含量，分析NO/ET，6ketoPGF1α/ TXB2的平衡关系. 结果： 与对照组比较，QDTMT组能降低血浆ET和TXB2水平，升高NO表达水平，提高6ketoPGF1α的活性，升高NO/ET和6ketoPGF1α/ TXB2比值（P&<0.05， P&<0.01），调节NO/ET及6ketoPGF1α/ TXB2的平衡关系，QDTMTH及QDTMTL与IP比较无显著差异（P&>0.05）. 结论： QDTMT能起到与IP相似的保护作用. 其机制与降低血浆ET和TXB2水平，升高NO水平，提高6ketoPGF1α活性，调节NO/ET和6ketoPGF1α/ TXB2的平衡有关.
【关键词】 缺血再灌注；缺血预处理；芪丹通脉片；血浆内皮素；一氧化氮；血栓素B2；6酮前列腺素
0引言
心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemia reperfusion injury， MIRI）已受到普遍关注. 其发病机制主要与氧自由基大量产生、脂质过氧化及细胞内钙超载等因素有关［1］. 已知缺血预处理（ischemia preconditioning， IP）对MIRI有保护作用［2］，但临床多无法进行. IRI属中医气虚血瘀的范畴. 实验研究已经证明QDTMT对急性心肌缺血、急性心肌梗死的心肌细胞有明显的保护作用［3］. 我们测定心肌缺血再灌注犬血浆ET，TXB2，NO和6ketoPGF1α的含量，进而分析NO/ET和6ketoPGF1α/ TXB2的平衡关系，探讨QDTMT对MIRI保护作用的机制.
1材料和方法
1.1材料健康成年犬24只，雌雄不拘，由第四军医大学实验动物中心提供，体质量（14.5±2.6） kg，随机分为4组，每组6只，雌雄比例相当，随机分配为空白对照组（Control）、缺血预处理组(IP)、QDTMT低剂量组（QDTMTL）、QDTMT高剂量组（QDTMTH）. 各组动物体质量统计学检验无显著差异；各组动物在用药前10 min各指标差异无统计学意义. QDTMT提取清膏干粉（1 g干粉相当于原生药2.862 g，西京医院提供)，由黄芪30 g、丹参30 g、桂枝10 g、当归15 g和红花30 g等组成.
1.2方法所有动物在同等条件下口服给药1 wk，空白对照组、缺血预处理组给予生理盐水3 mL・kg-1， QDTMT低剂量组给予QDTMT提取清膏干粉1 g・kg-1，QDTMT高剂量组给予QDTMT提取清膏干粉2 g・kg-1；动物经戊巴比妥钠（30 mg・kg-1）静脉麻醉，气管插管，连接SC3电动呼吸机，左侧第4肋间开胸，暴露心脏，分离冠状动脉左前降支中段，穿线以备结扎；缺血预处理组：结扎冠脉5 min，再灌注5 min，进行预处理，再次结扎30 min，其后再灌注30 min，其余各组均结扎30 min，然后再灌注30 min；静脉采血，分别测用药前（T1）、结扎后20 min(T2)、再灌注后10 min(T3)，再灌注后30 min（T4）4个时间点血浆ET，NO，TXB2和6ketoPGF1α含量，并分析NO/ET和6ketoPGF1α/ TXB2的平衡关系.
统计学处理： 数据用x±s表示，采用SPSS10.0软件进行重复测量方差分析以及多重比较.
2结果
在结扎冠状动脉导致的心肌缺血及再灌注过程中，空白对照组动物血浆ET和TXB2含量明显升高，而NO和6ketoPGF1a含量降低. 与空白对照组相比，IP及QDTMTH、QDTMTL均能显著抑制血浆ET和TXB2的释放（P&<0.05， P&<0.01），提高6ketoPGF1a和NO的含量，提高NO/ET和6ketoPGF1α/ TXB2之比值（P&<0.05， P&<0.01， Tab 1， 2），调节心肌保护因子与损伤因子的平衡；QDTMTH和QDTMTL与IP比较无显著差异（Tab 1，2）. 说明QDTMT能起到与IP相似的保护作用.
Tab 1Contents of ET， NO， TXB2 and 6ketoPGF1α in plasm of canines（略）
3讨论
近年来大量研究表明预处理可能是通过刺激心脏合成并释放内源性心肌保护物质，随后激活细胞内信号转导途径、影响心肌细胞电生理而发挥作用［4，5］. 这些心肌内源性保护物质其中包括NO和PGI2（6ketoPGF1α的前体物质）. NO是内皮细胞分泌的一种舒张血管活性物质，除了能调节血管平滑肌张力之外，还具有抗氧化、抗氧自由基、保护血管内皮细胞等功能. ET是内皮细胞产生的一种具有缩血管作用的活性多肽，且作用强，持续时间久，其过量释放可引起冠脉痉挛、心肌缺血坏死，并可加重心肌缺血再灌注损伤. 心肌缺血再灌注时产生大量氧自由基，自由基与膜结构中的不饱和脂肪酸产生脂质过氧化物，导致生物膜的破坏，促进ET的合成、释放；TXB2是TXA2的代谢产物，促进血小板粘附、聚集，与ET同属缩血管物质. 保护因子（NO， PGI2）与损伤因子（ET， TXB2）具有相反的调节作用，在正常情况下两者代谢、消长处于动态平衡，这对维持心肌的血流动力学有重要作用.
表2各组犬PGF1α/TXB2和NO/ET比值变化（略）
Tab 2Odds of PGF1α/TXB2 and NO/ET in canine at different time(略）
研究已证实黄芪、丹参和川芎等中药或中药提取物有抗心肌缺血再灌注损伤的作用［6，7］. QDTMT系由黄芪、丹参、桂枝、当归和红花等中药组成的复方制剂，具有益气活血的作用，原有实验研究已经证明QDTMT通过影响血生化、血流变指标，抑制血小板聚集从而对急性心肌缺血、急性心肌梗死的心肌细胞起到明显保护作用［8，9］. 本实验表明QDTMT能降低血浆ET和TXB2水平，升高NO水平，提高6ketoPGF1α的活性，升高NO/ET和6ketoPGF1α/ TXB2比值（P&<0.05， P&<0.01），能有效地改善NO/ET和6ketoPGF1α/ TXB2的平衡，起到与缺血预处理类似的心肌保护作用，对维持血管紧张性和抑制血小板聚集有重要意义.
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