作者：赵越平，畅婕，陈晓莉， 武丽华，张三奇
【关键词】 榆芨活肤液
【Abstract】 AIM: To develop an effective method for quality control of Yu Ji Huo Fu Ye. METHODS: The technique of TLC was used to identify Radixi Sanguisorbae， Rhizoma coptidi and Rhizoma Polygoni Cuspidati. The content of Emodin was determined by TLCscanning method. RESULTS: Good linearity was shown between the concentration and peak area in the concentration range of 0.1295 ~1.554 g・L-1 for Emodin. The average recovery rate was 96.35% and RSD 2.30%. CONCLUSION: The method is simple， rapid and accurate， and it can be used for controlling the quality of Yu Ji Huo Fu Ye.
【Keywords】 Yuji huofuye; Emodin; TLCscanning
【摘要】 目的： 建立榆芨活肤液（烧伤药水）的质量控制方法. 方法：采用TLC法对榆芨活肤液中的地榆、虎杖、黄连进行了定性研究，并用薄层扫描法对虎杖中的大黄素进行了含量测定. 结果：大黄素在0.1295~1.554g・L-1范围内呈线性关系，回收率为96.35%，RSD为2.30%. 结论： 该方法简单快速，结果可靠，可用于控制榆芨活肤液的质量.
【关键词】 榆芨活肤液；大黄素；薄层扫描法
0引言
榆芨活肤液主要由地榆、白芨、忍冬藤、虎杖、黄连等六味中药组成，具有清热解毒、收敛止血、消肿生肌的作用，用于中、小面积的Ⅱ°烧伤. 经20余年临床应用证明该药疗效确切，使用方便. 为使该药推广使用和质量可控，我们对方中的地榆、虎杖、黄连进行了定性分析；并采用薄层扫描法测定了虎杖中大黄素的含量.
1材料和方法
1．1材料CS9000双波长飞点快速扫描仪，点样定量毛细管（美国Drummond公司），硅胶G（青岛海洋化工厂），没食子酸、盐酸小蘖碱、大黄素对照品（含量测定用，批号：07569707）购自中国药品生物制品鉴定所；中性氧化铝（天津市化学试剂厂），自铺板（10.0 cm×10.0 cm×0.4mm）以2.5g・L-1羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G板，所用试剂均为分析纯.样品来源：本院中草药制剂室生产，100mL/瓶，批号19971218， 20000726， 20010606， 20010926， 20011105. 每批样品依法检测三次(n=3).
1．2方法
1.2.1薄层样品溶液的制备取本品2 mL，置水浴上蒸干，加（6→100）盐酸甲醇20 mL，超声提取30 min，浓缩至约10 mL，加于已处理好的中性氧化铝柱（70目，8 g，内径15 mm）上，加（6→100）盐酸甲醇50 mL洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干后用甲醇溶解并定容至2 mL量瓶中，作为供试品溶液. 取虎杖粗粉约0.5 g，精密称定，按供试品溶液制备方法制成2 mL，作为虎杖药材对照液. 精密称取大黄素标准品2.59 mg，用甲醇溶解并定容至10 mL，备用［1-3］.
1．2．2地榆鉴别样品的制备取本品2 mL置水浴上蒸干，残渣加甲醇10 mL，密塞，时时振摇，冷浸1 h，滤过，滤液浓缩至2 mL，作为供试品溶液. 取没食子酸对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液. 照薄层色谱法（中国药典2000年版一部附录VIB；下同）试验，吸取供试品溶液1 μL，对照品溶液各2 μL， 分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以苯醋酸乙酯甲酸（8.0∶5.0∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视.
1．2．3黄连鉴别样品的制备取本品5 mL置水浴上蒸干，残渣加盐酸甲醇（1→100）冷浸1 h，滤过，蒸干，用甲醇制样1 mL，作为供试品溶液. 另取盐酸小檗碱对照品，用甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液. 照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各1 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇醋酸水（7∶2∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光（365 nm）下检视［4］.
1.2.4虎杖鉴别样品的制备取大黄素对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液（c）. 照薄层色谱法试验，吸取1.2.1项上的供试品溶液2 μL，对照品溶液1 μL， 分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）甲酸乙酯甲酸（15∶5∶1）放置分层的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置可见光下检视. 后置氨蒸气中熏后，斑点变为红色［5］.
1.2.5大黄素含量测定［ 4，7-10］ 测定条件：对层析后的样品及标准品在400~700 nm范围内扫描，二者在440 nm处均有最大吸收. 因此测定波长λS=440 nm，λR=560 nm，线性化参数SX=3，双波长反射线性扫描. 精密吸取大黄素标准品溶液0.5，1，2，3，4，5，6和7 μL，点于同一薄层板上，按选定的色谱条件展开后，置薄层扫描仪上测定峰面积积分值，对所得的数据进行分析处理得回归方程为: Y=20158.85 X+6836.87， 确定系数R2 =0.9988 (F=3375.089， P=0.000). 结果表明：大黄素点样量0.1295~1.554 μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系. 精密吸取一定量对照品溶液、对照药材及供试品溶液，点于同一薄层板上，按上述条件展开，扫描.
统计学处理:用SPSS统计软件.
2结果
2.1薄层色谱条件的选择层析板：自制2.5 g・L-1羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G板（10 cm×10 cm×0.4 mm），100℃活化30 min后置干燥器内备用. 展开剂：以石油醚（30～60℃）甲酸乙酯甲酸（15∶5∶1）放置分层的上层溶液［6］.
2.2薄层色谱鉴别结果
2.2.1地榆的鉴别供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的暗斑，检出地榆中没食子酸（Fig 1）.
2.2.2黄连的鉴别供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色萤光斑点，检出黄连中盐酸小檗碱（Fig 2）.
2.2.3虎杖的鉴别供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点，说明检出虎杖中大黄素（Fig 3）.
1: Without Radixi Sanguisorbae; 2: GaLLic acid; 3: Yuji huofu ye.
图1榆芨活肤液中的地榆（略）
Fig 1Radixi Sanguisorbae of Yuji huofu ye（略）
1: Without Rhizoma coptidis; 2: Rhizoma Coptidis; 3: Yuji huofu ye.
图2榆芨活肤液中的黄连 （略）
Fig 2Rhizoma coptidis of Yuji huofu ye（略）
1: Without Rhizoma PoLygoni Cuspidati; 2: Emodin; 3: Yuji huofu ye.
Fig 3Rhizoma poLygoni cuspidati of Yuji huofu ye（略）
2.3样品含量层析后的大黄素样品测定峰面积积分值，每隔60 min测定1次，连续测4次. 检测结果4 h内稳定，RSD为1.28%. 精密吸取供试品溶液3 μL，在同一薄层板上点5个相同量的点，依法测定各斑点峰面积积分值，结果RSD为1.3%. 精密吸取同批样品一定量，分别点于5块层析板上，依法测定峰面积积分值，RSD为2.06%. 精密称取已知含量的同批样品适量，准确加入一定量的大黄素，按供试品溶液的制备方法制备，依法测定大黄素的含量，计算回收率为96.35%，RSD为2.30%（n=3）. 含量测定结果：批号分别为19971218，20000726，20010606，20010926，20011105的五批检品及虎杖药材，大黄素的含量分别为215， 342， 296， 277， 284和381 g・L-1，RSD分别为2.51%， 2.40%， 2.69%， 3.02%， 2.31%和2.12% (n=3).
3讨论
为简化操作步骤，采用甲醇提取方法，可用薄层层析法鉴别虎杖和地榆，所得色谱分离效果好，其他成分无干扰.
在做本次实验前曾查阅大量的
参考文献
，其中大黄的大黄素的含量测定文章很多；虎杖多是测定白黎芦醇甙的含量的文章，测定大黄素的含量文章少见. 鉴于虎杖在本处方中起着重要的作用. 首先，抗菌、抗病毒，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均有明显的抑制作用；其次，抗炎止血，是中医医治烫火伤的主药. 外用对烫火伤创面有收敛、防止感染和消炎作用. 我们把虎杖中的大黄素作为含量测定指标. 经多次实验，榆芨活肤液单纯甲醇冷浸、超声提取或回流提取杂质多，大黄素斑点分离不好，不够清晰；试用乙醚或氯仿萃取，大黄素损失较多；最后确定了用盐酸甲醇超声提取，中性氧化铝柱纯化的步骤，结果排除了干扰，色谱斑点分离效果好.我们研究结果表明，用薄层扫描法对虎杖中的大黄素进行含量测定，该方法简单快速，结果可靠，可作为该制剂的质量控制.
【
参考文献
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