作者：行利，马静，王宗仁，杨喜忠，马世平，李萌萌，肖铁卉，李晶华，郑谨
【关键词】 芪丹通脉片
【Abstract】 AIM: To study the effects of Qidantongmai tablet (QDTMT) on acute myocardial ischemia in rats. METHODS: Acute myocardial ischemia was induced by subcutaneous injection of isoproterenol (ISP. 5 mg・kg-1) into SD rats. Activities of ATPase and content of Ca2+ were observed in myocardial tissue and mitochondria. The changes of myocardial ultrastructure were examined by transmission electron microscope. RESULTS: Compared with those of the controls， activities of ATPase in mitochondrion were strengthened in QDTMT group ［（40.9±8.1）vs（23.1±5.7），（40.4±4.4）vs（21.7±6.6），（94.7±8.6） vs （63.5±9.5）mmol・g-1，P&<0.05］ and the content of Ca2+ in mitochondrion was decreased ［（7.61±1.62）vs（12.94±1.28），（37.3±5.3）vs (73.2±8.9) mmol・mg-1， P&<0.01］ while the ultrastructure of myocardial damage was significantly reduced in QDTMT group (P&<0.01). CONCLUSION: QDTMT can reliecve calcium overload in cardiac mitochondrion and protect the integrity of the ultrastructure of cardiac mitochondrion， which may be in part responsible for the mechanism of QDTMT in ameliorating ischemia.
【Keywords】 Qidantongmaitablet; acute myocardial ischemia; mitochondrion; calcium
【摘要】 目的： 观测芪丹通脉片（QDTMT）急性心肌缺血损伤的影响. 方法： 用SD大鼠皮下注射异丙肾上腺素（Iso， 5 mg・kg-1）诱导心肌缺血模型，观测心肌线粒体（Mit）三磷酸腺苷酶（ATPase）活力、Ca2+含量；在电镜下，观察心肌线粒体超微结构的变化. 结果： QDTMT组Ca2+ATPase， Mg2+ATPase及Ca2+Mg2+ATPase活性显著高于模型组［（40.9±8.1）vs（23.1±5.7），（40.4±4.4）vs（21.7±6.6），（94.7±8.6） vs （63.5±9.5） mmol・g-1， P&<0.05］；QDTMT组与模型组相比Ca2+显著降低［（7.6±1.6）vs（12.9±1.3），（37.3±5.3）vs(73.2±8.9) mmol・mg-1， P&<0.01］. 同时，与对照组相比，心肌超微结构的损害明显减轻. 结论： QDTMT减轻钙超载和保护心肌细胞超微结构的作用，可能是其改善心肌缺血的作用机制之一.
【关键词】 芪丹通脉片；急性心肌缺血；线粒体；钙
0引言
随着人口平均寿命的逐渐延长，冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病CHD）已成为威胁人类健康的最常见的疾病之一［1，2］. 心肌缺血是冠心病基本的病理生理过程，所以，对心肌缺血机制及其防治的研究，是心血管疾病研究过程中的重要课题.
1材料和方法
1.1材料芪丹通脉片(Qidantongmai tablet， QDTMT)提取浸膏干粉（黄芪30 g、丹参30 g、当归15 g、桂枝10 g、红花30 g，此制剂1 g干粉相当于生药2.86 g），西京医院提供；恬尔心（Diltiazem），浙江亚太制药厂. SD大鼠32只，雌雄兼用，体质量250～280 g（第四军医大学实验动物中心）. 铜、铁、锌、镁、钙、钾单元素空心阴极灯（河北衡水宁强光源厂），GL20A全自动高速冷冻离心机（湖南仪器仪表总厂离心机厂生产），JEM2000EX透射电镜（日本电子光学有限公司）.
1.2方法将32只SD大鼠完全随机等分为4组：正常对照组（Control），模型组（Model），芪丹通脉片组（QDTMT），阳性对照组（Diltiazem）. 参照文献［3］制备动物模型，并且提取线粒体，根据南京建成生物研究所提供的蛋白测定试剂盒测定线粒体中的蛋白含量. 心肌线粒体中ATPase测定：根据南京建成生物研究所提供的ATPase测定试剂盒测定. 心肌组织及线粒体中Ca2+和 Mg2+含量测定：将心肌匀浆液及线粒体溶液按1∶100用去离子水稀释. 用WFXIF原子吸收分光度计，测定心肌组织及线粒体中Ca2+和Mg2+含量. 心肌线粒体的超微结构观察：开胸取出心脏，在左室近心尖处取1 mm×1 mm的组织块，常规制作电镜标本. 每组每只动物随机取1个包埋块，取2网超薄片，电镜下选用反差良好的1个同网进行观察，以细胞质为主随机在不同部位拍照3~5张，观察心肌细胞超微结构的变化（×30 000）.
统计学处理： 实验数据用x±s表示，采用方差分析以及最小显著差数法进行组间比较，对线粒体Ca2+采用Kruskalwallis秩和检验进行组间比较.
2结果
2.1QDTMT对心肌线粒体中ATPase活力及Ca2+和Mg2+含量的影响与Control相比，Model线粒体中Ca2+ATPase、Mg2+ATPase及Ca2+Mg2+ATPase活性降低（P&<0.05）；QDTMT及Dilitiazem组与Model相比较Ca2+ATPase、Mg2+ATPase及Ca2+Mg2+ATPase活性显著增高（P&<0.05），且前两者相比无明显差异（P&>0.05）. 与Control相比，Model心肌组织及线粒体中的Ca2+含量升高（P&<0.01）；QDTMT及Dilitiazem与Model相比Ca2+显著降低（P&<0.01）；Model心肌组织中Mg2+含量显著升高（P&<0.05），但线粒体中Mg2+含量无明显变化（P&>0.05， Tab 1）.
Tab 1Effect of QDTMT on ATPase activities and the content of Ca2+ and Mg2+ in mitochondria (略)
2.2QDTMT对心肌的保护作用Control心肌超微结构肌节清晰，肌原纤维粗、细肌丝肌节和原纤维间线粒体均排列规则有序，线粒体膜完整，嵴密集 (Fig 1)；Model心肌纤维排列紊乱，部分肌丝断裂，溶解，Z线不清或消失. 线粒体肿胀，嵴数目明显减少，部分嵴消失或空泡化(Fig 2)；QDTMT心肌纤维肌节清晰，排列较整齐，肌丝完整，Ⅰ带明显加宽. 线粒体较丰富， 嵴结构清晰，部分嵴模糊，排列尚规则，线粒体肿胀减轻， (Fig 3). Dilitiazem心肌纤维肌节基本清晰，肌丝略扭曲，线粒体轻度肿胀，嵴结构尚清晰，排列欠规则 (Fig 4).
图1对照组心肌组织电镜观察（略）
Fig 1Transmission electron microscope observation of control of myocardium×150（略）
图2模型组心肌组织电镜观察（略）
Fig 2Transmission electron microscope observation of model of myocardium×150（略）
图3QDTMT心肌组织电镜观察（略）
Fig 3Transmission electron microscope observation of QDTMT of myocardium×150（略）
图4阳性对照组心肌组织电镜观察（略）
Fig 4Transmission electron microscope observation of Diltiazem of myocardium×150（略）
3讨论
心肌细胞富含线粒体. 线粒体是心肌细胞Ca2+平衡过程的重要机构之一［3］，它通过摄取和释放Ca2+，参与胞质Ca2+浓度的调节［4］. 这种作用主要是通过Ca2+泵，消耗ATP主动转运来实现的. 细胞内Ca2+ 作为细胞内的第二信使，因此对细胞内Ca2+ 的测定，即能反映细胞活动是否正常，也能反映药物对Ca2+内流是否有抑制作用［5］. 心肌缺血、缺氧时，线粒体肿胀，即线粒体体积增大，嵴减少和基质密度降低［6］.
QDTMT是在祖国医学气血相关理论的指导下，结合临床实践及现代科学理论研制的纯中药复方制剂. 该制剂由黄芪、丹参、当归、红花、桂枝等中药组成，具有益气活血、通脉止痛. 实验结果显示，QDTMT可通过增加Ca2+ATPase， Mg2+ATPase， Ca2+Mg2+ATPase活性，抑制Ca2+内流，降低心肌细胞及其线粒体中Ca2+含量，减轻钙超载，同时也可以保护心肌细胞超微结构，以达到防止心肌缺血的目的.
参考文献
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