作者：劳宁，熊利泽，路志红，刘艳红，郑玉，巩固
【关键词】 百会穴
【Abstract】 AIM: To investigate the acupoint specificity of brain ischemic tolerance induced by preconditioning with repeated electroacupuncture at “Baihui” acupoint in rats with transient focal cerebral ischemia. METHODS: 40 SD male rats were randomly pided into 4 groups (n=10 each): Animals in control group received no pretreatment， animals in PB group were intraperitoneally injected with pentobarbital sodium 40 mg/kg a day for 5 days， animals in EA1 group received electroacupuncture at the “Baihui” acupiont 30 min a day for 5 days under pentobarbital sodium anesthesia and animals in EA2 group received electroacupuncture at the point 1.0 cm right from "Baihui" acupoint 30 min a day for 5 days under pentobarbital sodium anesthesia. 24h after the last treatment， the right middle cerebral artery occlusion model (MCAO) was induced for 120 min in all animals. The neurological deficit scores (NDS) were evaluated at 24h after reperfusion and then rats were sacrificed under deep anesthesia. The brain was cut into 6 2 mm-thick coronal sections and infarct volumes were determined by TTC staining. RESULTS: ① EA1 group showed lower NDS than that in control and PB groups (P&<0.05). There was no significant difference of NDS among the other groups. ② The infarct volume of EA1 group was smaller than that in any other groups (P&<0.01). The infarct volume of EA2 group was smaller compared with that in control or PB groups (P&<0.01). No significant difference was observed between control and PB groups (P&>0.05). CONCLUSION: The ischemic tolerance induced by preconditioning with repeated electroacupuncture at preconditioning in rats with focal cerebral ischemia has acupoint specificity.
【Keywords】 “Baihu” acupoint; electroacupuncture; MCAO
【摘要】 目的： 观察电针刺激对大鼠局灶性缺血/再灌注损伤的预处理效应的穴位特异性. 方法： SD雄性大鼠40只随机分为4组(n=10)，即空白对照组(Control)、戊巴比妥对照组(PB)、针刺百会穴组(EA1)和针刺穴位旁开组(EA2). Control组未行任何处理；PB组腹腔注射戊巴比妥钠40 mg・kg-1・d-1，连续5 d；针刺EA1组和EA2组在戊巴比妥钠麻醉下分别用重复电针刺激(30 min・d-1×5 d)百会穴和百会穴右旁开1.0 cm处. 最后一次处理的24 h后，所有动物在异氟醚麻醉下用颈内动脉线栓法致右侧大脑中动脉栓塞120 min. 再灌注24 h后，行神经功能障碍评分，并取大脑行TTC染色以测量脑梗死容积. 结果： ① 神经功能障碍评分 EA1组的评分优于Control组和PB组(P&<0.05)，与EA2组比较无差异. EA2组、Control组和PB组的评分无显著差异；② 脑梗死容积 EA1组的脑梗死容积较其他3组显著减少(P&<0.01). EA2组的梗死容积较Control组和PB组显著减小(P&<0.01). Control和PB组间的梗死容积无差异(P&>0.05). 结论： 重复电针刺激预处理对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的预处理效应有穴位特异性.
【关键词】 百会穴；电针；脑动脉栓塞
0引言
发现脑缺血耐受现象后，人们一直在寻找理想的预处理方法来减少由于手术、创伤等因素引起的继发性脑缺血损伤. 我们用重复电针刺激百会穴对大鼠行预处理，发现对大脑缺血再灌注损伤有明显的保护效应［1］，相同条件刺激远侧肢体的非穴位处则无上述效应［2］. 为证实这种预处理保护作用的穴位特异性，我们用重复电针刺激分别刺激百会穴和百会穴旁开1.0 cm非穴位处作为预处理方法，观察它们对其后发生的脑缺血/再灌注损伤的影响.
1材料和方法
1.1材料SD健康雄性大鼠40只，体质量280~320 g.（第四军医大学实验动物中心提供），随机分为4组（每组n=10）：空白对照组（Control），戊巴比妥组（PB），电针刺激百会穴组（EA1），旁开穴位电针刺激组（EA2）.
1.2方法
1.2.1预处理空白对照组未进行任何处理. 戊巴比妥组腹腔注射戊巴比妥钠（40 mg・kg-1），每日1次，连续5 d. 电针预处理EA1组参照全国针灸学会实验针灸研究会制定的“实验动物针灸穴位图谱”，在顶骨正中选取百会穴，30号0.5寸毫针刺入，接电针仪（与百会穴形成环路的另外一电极包湿纱布，固定于动物同侧后肢），在腹腔注射戊巴比妥钠40 mg・kg-1麻醉下，采用频率为2/15 Hz的疏密波，电流强度1 mA ，刺激百会穴. 每次30 min，每日1次，持续5 d. 电针预处理EA2组则将毫针于百会穴旁开1.0 cm处即右侧耳廓根部刺入，刺激频率和方式均与EA1组相同.
1.2.2大脑中动脉阻闭（MCAO）模型术前禁食12 h，不禁水. 动物用40 mL・L-1异氟醚（Baxter， USA）诱导麻醉，20 mL・L-1异氟醚吸入维持麻醉深度，保留自主呼吸. 术中体温由肛温探头连接多功能监测仪（Spacelab， USA）监测，并用烤灯维持在37.0~37.5℃. 大脑中动脉阻闭（MCAO）模型采用右侧颈内动脉尼龙线线栓法，即动物麻醉后取颈正中切口，暴露右侧颈总动脉、颈外动脉，于颈总动脉分叉下方剪一切口，将一预先用乙醇灯烧成圆头的尼龙线（30，ETHICON，JP）置入颈内动脉约17.5 mm，直到有轻微阻力感为止. PB组、EA1和EA2组在最后一次处理24 h后和空白对照组的动物一起即刻采取右侧MACO，阻闭120 min后抽出尼龙线，恢复再灌注.
麻醉苏醒后，将动物放回鼠笼，自由饮食. 在恢复灌注24 h后，由一位不了解分组情况的观察者按Longa等［4］的六级评分法（0级，无功能障碍；I级，不能伸展左前肢；Ⅱ级，向左侧旋转；Ⅲ级，向左侧倾倒；IV级，无自主活动伴意识抑制；V级，死亡）评估记录神经功能障碍评分. 24 h神经功能障碍评分后即刻在腹腔注射戊巴比妥钠深麻醉后迅速处死动物，取脑，置于冰盐水中10 min，取冠状面均匀切成2 mm厚的脑片，迅速放入20 g・L-1 TTC（Sigma，USA）溶液（37℃）中染色30 min，然后用40 g・L-1甲醛缓冲液固定，24 h后用数码相机（KODAK DC240，USA）拍照，输入计算机，用图像软件（ADOBE，PHOTOSHOP 5.0）计算梗死面积（粉红色区为正常脑组织，白色区为梗死区），各脑片梗死面积之和乘以厚度（2 mm）为总的梗死容积.
统计学处理：体质量、肛温、手术时间、梗死容积用数值x±s表示，用SPSS10.0 软件进行单因素方差分析（ANOVA）和LSD检验；神经功能障碍评分用中位数（范围）表示，用SPLM软件进行(Kruskalwallis)和Nemenyi方法检验. P&<0.05为有显著性差异.
2结果
术后动物都存活，4组SD大鼠之间的体质量、手术时间以及术中肛温无明显差异（P&>0.05，Tab 1）. 再灌注24 h后，EA1组的神经功能障碍评分优于Control和PB组（P&<0.05）. EA2组、戊巴比妥组和对照组3组之间的神经功能障碍评分在统计学上无差异(P&>0.05， Tab 2).
Tab 1Body mass， rectal temperature of SD rats and operation time（略）
表2缺血再灌注24 h后四组SD大鼠的神经损害评分（略）
Tab 2Neurological Deficit scores at 24 h after reperfusion（略）
缺血/再灌注24 h后，EA1组梗死容积最小(0.383mm3)，与其他3组比较均有显著差别(P&<0.01)；EA2组的梗死容积小于PB和Control组(1.094 vs 1.842， 2.205 mm3) (P&<0.01)；PB与Control组的梗死容积相似(P&>0.05， Fig 1).
3讨论
我们的研究表明，重复电针刺激百会穴组和刺激百会穴旁开组对于脑缺血/再灌注损伤保护效应相比较，前者的脑梗死容积明显小于后者，说明电针刺激的预处理效应具有穴位特异性. 这与我们实验室以前的结论基本一致［2］. 我们设计了重复电针刺激百会穴与百会穴旁开1.0 cm非穴位处的对照实验. 根据中医相关理论：督脉总督一身之阳脉，为“阳脉之海”，其起于胞中，下出会阴，沿脊上行至项进入脑内，属脑，故和脑有密切的关系. 针刺百会穴对神经元损伤保护作用的可能机制有：① 减轻脑水肿，改善缺血后血脑屏障的功能，增加脑血流量［3］；② 增强缺血区超氧化物歧化酶（S0D）活性，减轻氧自由基介导的脂质过氧化连锁反应引起的脑损害［4］；③ 纠正脑缺血后神经递质的代谢紊乱：降低缺血区兴奋性氨基酸和一氧化氮（NO）浓度，使抑制性氨基酸、多巴胺和5HT上升至正常水平，改善迟发性神经元损伤［5，6］；④上调大鼠病灶侧大脑的神经细胞cFos， BDNF， Bcl2等保护性基因的蛋白表达［7］. 所以，我们选择刺激百会穴.
bP&<0.01 vs control or PB， dP&<0.01 vs EA2. PB， EA1， EA2: Same as Tab 1.
图1缺血/再灌注24 h后各组大鼠脑梗死容积（略）
Fig 1In faretion volume of brain tissue at 24 h after ischemia reperfaston（略）
实验结果提示，EA2组的预处理作用不及EA1组，但其梗死容积明显小于PB和Control组. 产生这种结果可能是针刺的位置距离百会穴较近，有部分电流通过百会穴而引起. 有报道经皮下电刺激治疗脑梗死，初步试用结果提示具有一定的疗效，并认为此种效应与刺激了小脑顶核有关［8］. EA2组的预处理效应是否与其有关，尚需进一步研究. EA1组的神经功能障碍评分与EA2没有统计学差异，说明该指标敏感性较差.
清醒状态下对大鼠行电刺激比较困难，我们选择戊巴比妥钠作为背景麻醉. 为避免可能发生的麻醉药物的干扰，在预处理阶段，PB组与EA1和EA2组同一时间给予同等剂量40 mg・kg-1的戊巴比妥钠. 制作大脑中动脉阻闭模型时，所有动物都用相同浓度的异氟醚麻醉诱导和维持，并保证手术时间在各组之间无显著差异. 结果显示，EA1和EA2组脑梗死容积均明显小于Control和PB组，神经功能也有明显改善，排除了单纯麻醉诱导缺血耐受的可能.
【
参考文献
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