【关键词】 肌凝蛋白轻链
【Abstract】 AIM: To study the influential factors of uptake of Technetium99m labeled anticardic myosin light chain monoclonal antibody (99TcmAMLCA) in infarcted myocardium in rats. METHODS: The ratio was calculated between infarcted and normal myocardium after injecting certian dose of 99TcmAMLCA in the experimental myocardial infarction in rats and the relationship was observed between the radioactivity uptake in infarcted myocardium and injection time， infarction time and zone region of infracted myocardium. RESULTS: The infarcted myocardium uptook 99TcmAMLCA rapidly at the first 2 h， increased towards steady at 4～8 h and reached the peak at 24 h after injection. Compared with the ratios of 99TcmNIgG in the infarcted with normal myocardium， the ratios of 99TcmAMLCA were significantly higher at the same time after injection (P&<0.01). There were a greater uptake of 99TcmAMLCA in the infarcted myocardium during the phase of acute myocardium infarction (AMI).The uptake of 99TcmAMLCA in the infarcted myocardium in the endiocardial layers at the infarct center was greater than other zone regions of infracted myocardium. CONCLUSION: The uptake of 99TcmAMLCA is specific， rapid and long lasting in the infarcted myocardium and is hardly affected by infarct time. This may probably become a new approach to myocardial infarct imaging.
【Keywords】 myosin light chain; monoclonal antibody; myocardial infarction; technetium99m; rats
【摘要】 目的：探讨注射锝标抗心肌肌凝蛋白轻链单克隆抗体(99TcmAMLCA)后不同时间，梗死时间和梗死区域对大鼠梗死心肌摄取99TcmAMLCA的影响. 方法： 大鼠静脉注射99TcmAMLCA 7.4 MBq，观察不同注射时间(2， 4， 8， 24 h)，不同梗死时间(心梗后6， 12 h， 1~14 d)和不同梗死区域(梗死中央、周边的内层心肌和外层心肌)对梗死心肌/正常心肌发射性比的影响. 结果： 注射后2 h梗死心肌开始摄取99TcmAMLCA，梗死心肌/正常心肌发射性比是1.67±0.96， 4～8 h摄取逐渐增加，24 h达到高峰，梗死心肌/正常心肌发射性比是4.38±0.80. 心肌梗死后6 h～14 d，梗死心肌均有很强的99TcmAMLCA摄取，心梗后5 d摄取最强，梗死心肌/正常心肌发射性比是3.82±0.67；梗死中央区内层心肌的放射性摄取比值是4.52±0.60，外层心肌是3.32±0.58两者具有统计学显著意义（P&<0.01）. 结论： 急性心肌梗死大鼠梗死心肌特异性地摄取99TcmAMLCA迅速持久，不受心梗时间影响，梗死中央区内层心肌摄取最强，为99TcmAMLCA亲梗死心肌显像临床应用提供了实验依据.
【关键词】 肌凝蛋白轻链；单克隆抗体；心肌梗死；锝；大鼠
0引言
抗肌凝蛋及其轻链单克隆抗体(antimyosin antibody， AMA; anticardiac myosin light chain1 nntibody， AMLCA)的开发，推动了放射性标记mAb亲梗死心肌放免显像的应用. 目前国外 111InAMA， 99TcmAMA在体亲梗死心肌显像已经运用急性心肌梗死(AMI)，心肌炎，心肌病的临床诊断)［1］. 已经证实梗死心肌能够特异性地摄取锝标抗心肌肌凝蛋白轻链mAb (99TcmAMLCA)［2，3］ . 2001/2002年给AMI大鼠静脉注射99TcmAMLCA，观察注射时间，梗死时间和梗死区域对梗死心肌摄取99TcmAMLCA的影响，探讨大鼠梗死心肌摄取99TcmAMLCA的影响因素和特点，为99TcmAMLCA在体亲梗死心肌放射免疫显像的进一步研究提供实验依据.
1材料和方法
1．1材料Wistar大鼠，雌雄不拘，250～300 g. 乙醚浅麻醉后，胸骨左侧第4或5肋间切开皮肤约2 cm，钝性分离肌层，剪开心包，挤出心脏；结扎左冠状动脉后防会，缝合胸壁. 经心电图，心肌酶证实有AMI形成者选用. 心梗大鼠分组如下：1组，AMI 24 h，30只；2组，AMI 24 h，20只；3组，54只按AMI时间分成2， 8和18 h以及2， 3， 5， 7， 10和14 d分成9个亚组，每亚组6只. AMLCA由中日友好医院临床研究所生化室制，NIgG为正常鼠IgG，购于解放军军事医学科学院. 采用直接法:AMLCA (5 g・L-1) 1 mg，经PBS稀释，加入2巯基乙醇(2ME)，30 min后过SephadexG50柱；加入Sn2+次甲醛二磷酸盐(MDP)40 μg，收集蛋白峰，再加入99Tcm O4+-(高锝酸根离子)74 MBq， 30 min后Whatoran NO1纸层析，标记率大于95%. 99Tcm标记NIgG方法相同.
1．2方法1组：每只大鼠尾静脉注入99TcmAMLCA 0.2 mL (7.4 MBq)后2， 4， 6， 8和24 h分5批，每批6只，断头处死； 2组：每只大鼠尾静脉注入99TcmNIgG 0.2 mL(7.4 MBq)后2， 4， 8和24 h分4批，每批6只，断头处死； 3组：每只大鼠尾静脉注入99TcmAMLCA 0.2 mL(7.4 MBq)后4 h断头处死. 心梗大鼠处死后，心脏用TTC(氯化三苯四唑)染色后显示出心肌梗死区域，分别切取梗死中央区，梗死周围区，梗死和正常心肌交界区及左心室后壁等处心肌，于心内膜和心外膜中间切开，收集内层和外层心肌标本. 梗死心肌包括梗死中央区，周边区的内层和外层4部分组成. 所有上述组织称质量，用γ计数仪进行放射性测量，计算出每克组织放射性占总注入量的百分比［ID(injection dose)%・g-1］，以及不同区域梗死心肌与正常心肌放射性比值.
统计学处理:所测得的参数以x±s表示，组内的前后对比用配对t检验，组间比较用方差分析.
2结果
2．1注射时间梗死心肌包括梗死中央区和周围区的内层和外层4部分心肌，其放射性摄取与注射时间的关系. 梗死心肌与正常心肌99Tcm AMLCA放射性比在注射2 h是1.67±0.96，注射后4～8 h，渐趋平衡，放射比分别为2.49±0.87，2.97±0.77，注射后24 h达到高峰，高达4.38±0.80. 梗死心肌与正常心肌99TcmNIgG放射性比在注射后2， 4，8和24h均在较低水平，无吸收高峰，差异不明显，无统计学显著意义（P&>0.05）；相同注射时间梗死心肌与正常心肌放射比，99TcmAMLCA明显大于99TcmNIgG，具有统计学意义(P&<0.01).
2．2梗死时间急性心肌梗死6 h及12 h梗死心肌即有较强的99TcmAMLCA摄取， 梗死心肌与正常心肌放射性比分别是3.32±0.75， 3.67±0.25， 1 d～7 d放射性摄取持续在较高水平，5 d梗死心肌与正常心肌放射性比最高3.82±0.60， 7 d以后略有下降，但直到14 d仍较高达2.11±0.35. 经方差分析，不同心梗时间，梗死心肌与正常心肌放射性比之间差异无显著性（P&>0.05）.
2．3梗死区域心梗24 h大鼠处死后测量心脏梗死中央区、周边区，交界区不和正常心肌等不同区域内层心肌和外层心肌放射性摄取比值. 梗死中央区内层心肌的放射性摄取比值是4.52±0.60，外层心肌是3.32±0.58，两者明显大于正常心肌放射性摄取比值，具有统计学显著意义（P&<0.01）.梗死周边区的内层心肌放射性摄取比值是3.1±0.45，外层心肌是2.20±0.25，两者较梗死中央区内层和外层心肌的摄取比值明显下降，仍大于正常心肌放射性比值，即有显著统计学意义（P&<0.01）.无论梗死中央区还是梗死周边区，内层心肌的99TcmAMLCA放射性摄取比值明显高于外层心肌，具有统计学显著意义（P&<0.01）.
生物化学研究表明AMLCA与梗死心肌结合具有很强的的敏感性和特异性［4-6 ］，梗死心肌能够特异性地摄取99TcmAMLCA［1，2 ］. 注射后2 h，梗死心肌即开始摄取，4～8 h逐渐增加，24 h达到放射性摄取高峰. 注射24 h内各个时间点梗死心肌极少摄取99TcmNIgG，说明梗死心肌摄取99TcmAMLCA基础是特异性抗原抗体交叉反应，而不是由组织非特异性炎症所致. 心梗后6 h梗死心肌便摄取99TcmAMLCA，此时恰是大量坏死心肌细胞膜发生崩解破裂之时，99TcmAMLCA可由血中逆行直接进入细胞内与CMLC结合. 我们未能检测早期心梗(&<6 h)即早期缺血心肌对99TcmAMLCA的摄取，估计在心肌缺血期，心肌细胞膜的通透性增加，很可能有少量99TcmAMLCA逆向渗入到心肌细胞内. 梗死心肌对99TcmAMLCA有持续时间较长“高摄取期”（心梗后1～5 d），此期间99TcmAMLCA通过坏死心肌破裂的细胞膜直接进入细胞内；AMI急性期14 d后仍摄取99TcmAMLCA，可能与CMLC持续暴露和（或）抗体在炎性水肿组织中的非特异性蓄积有关.
梗死中央区明显大于周边区，内层心肌明显大于外层心肌. 心肌放射性摄取可能与局部血流呈显著负相关，正常和交界区缺血心肌局部血流大，所以心肌摄取99TcmAMLCA最少，梗死中央区局部血流最小（相当于非缺血正常心肌血流的2%），其放射性摄取最大，梗死周边区血流略多于中央区但明显低于交界区和正常心肌，所以其放射性摄取略弱于梗死中央区，但是明显高于交界区缺血和正常心肌. 心肌梗死时内层心肌缺血坏死重于外层心肌，因此不同区域的内层心肌发射性摄取明显高于外层心肌. 由上可见大鼠梗死心肌特异性的摄取99TcmAMLCA，并受注射时间，梗死时间及梗死区域影响.注射2 h梗死心肌开始放射性摄取，4～8 h逐渐增加，24 h达到高峰；心肌梗死后6 h～14 d，梗死心肌持续摄取，其中心梗后1～5 d摄取最强. 为99TcmAMLCA在体亲梗死心肌显像提供了试验依据.
参考文献
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