关于益胃冲剂对胃癌前病变大鼠粘膜上皮细胞DNA量及AgNOR数的影响

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　　　　　　 作者：王文，夏天，张仲海，王宗仁，张金洲，李锋，李军昌，行利

【关键词】 益胃冲剂
　　【Abstract】 AIM: To study the curative effects and the mechanism of YiWeiChongJi. METHODS: 50 rats were pided randomly and evenly into 5 groups: Normal group， Model group， Therapy group with high dosage of YiWeiChongJi， Therapy group with low dosage of YiWeiChongJi and Control group with WeiMeiSu. The pathological changes， AgNOR counting， DNA relative content and U levels of epithelial cells of gastric mucosa in each group were examined. RESULTS: In Model group， mucosa got thin and gland got atrophied in 87.5% of the rats， infiltration of inflammation cells presented in 100%. Intestinal metaplasia was seen in 66.5% of the rats and atypical hyperplasia in 37.5%. The AgNOR counting， DNA content and U level of epithelial cells increased markedly. However， in the Therapy group with low or high dosage of YiWeiChongJi， pathological changes ameliorated significantly (P&<0.01). Compared with those of the Model group， the AgNOR counting and DNA content， U level of epithelial cells declined markedly， which were statistically different from those of the Control group (P&<0.05). CONCLUSION: YiWeiChongJi can effectively reverse the precancerous lesions in gastric carcinoma and its mechanism of reversion probably relates to the reduction of DNA content and restraint of abnormal active hyperplasia.
　　【Keywords】 yiweichongji; precancerous lesion of gastric carcinoma; DNA; AgNOR
　　【摘要】 目的：从实验角度对益胃冲剂的药效进行观察，并对其逆转机制加以探讨. 方法： 50只SD大鼠随机分为正常组、模型组、益胃冲剂高、低剂量治疗组、维酶素对照组，分别对各组病理变化，胃粘膜上皮细胞AgNOR计数，DNA相对含量及DNA相对倍体值进行观察. 结果： 模型组大鼠87.5%出现粘膜变薄，腺体萎缩，100%出现炎细胞浸润，66.5%出现肠上皮化生，37.5%出现异型增生，其粘膜上皮细胞AgNOR计数，DNA相对含量及DNA相对倍体值明显增高，而治疗组粘膜变薄、腺体萎缩，炎细胞侵润，肠上皮化生，不典型增生的发生率分别为高剂量组：11.1%， 11.1%， 11.1%， 0， 0和低剂量组：22.5%， 11.1%， 22.2%， 11.1%， 0较模型组的87.5%， 87.5%， 100%， 62.5%， 37.5%明显改善(P&<0.01). AgNOR计数、DNA相对含量及相对倍体值较模型组明显降低，与维酶素对照组存在显著差异(P&<0.05). 结论： 益胃冲剂能有效地逆转胃粘膜癌前病变，其逆转机制可能与其降低病变细胞DNA相对含量、抑制其异常活跃的增生状态有关.

　　【关键词】 益胃冲剂；胃癌前病变；DNA；AgNOR
　　0引言
　　以中医辨证论治为基础，以益气、健脾、养阴药为主的有效方剂益胃冲剂对胃粘膜癌前病变具有明显的逆转作用，临床应用已获得确切疗效，我们复制了大鼠胃癌前病变模型，对其胃粘膜上皮细胞DNA含量及AgNOR计数，益胃冲剂的药效进行观察，探讨其逆转机制.
　　1材料和方法
　　1.1材料雄性SD大鼠，质量（180 ± 20） g，益胃冲剂（黄芪15 g，党参15 g，生地12 g，麦冬12 g，白芍15 g）水煎浓缩液，含生药3 kg・L-1，由西京医院临床药理基地提供；维酶素系河南省新星制药厂生产(批号 911118)，0.2 g/片，研碎用清水配成混悬液，去氧胆酸钠，SERVA 进口分装(批号 920815)，完全弗氏佐剂（Freund 佐剂）由第四军医大学病理学教研室提供，Shiff液由西京医院病理科提供.

转贴于 　1.2方法大鼠慢性萎缩性胃炎(CAG)模型的复制参照赵敏等(Zhongxiyi Jiehe Piwei Zazhi， 1996; 4:225) 方法：实验分为5组，每组10只，正常组（N组）不造模，灌服生理盐水12.5 mL・kg-1;模型组（M组）造模90 d后，每日每只大鼠灌服生理盐水2 mL，共50 d;益胃冲剂高剂量治疗组（YH组）造模90 d后，每日每只大鼠灌服益胃冲剂水煎液20 g・kg-1，共50 d;益胃冲剂低剂量治疗组（YL组）造模90 d后，每日每只大鼠灌服益胃冲剂水煎液10 g・kg-1，共50 d;维酶素治疗组（W组）造模90 d后，每日每只大鼠灌服维酶素水溶液1 g・kg-1，共50 d. 胃组织病理标本固定后分别从胃窦部及胃体部取材，石蜡切片后， 作HE，AB/pAS， Ploton及Feulgen染色.

　　经Ploton染色后，在×100油镜下观察，随机选择100个细胞，计数镜下可辨别清楚的黑点，再换算成每个细胞平均AgNOR点数. 经Feulgen染色后，利用Ⅰ型真彩色图像分析仪，选择适当灰度阈值将细胞核与背景分开，每例随意测量病变细胞核10个，间质正常淋巴细胞50个，测量A值（积分吸光度值）即DNA 相对含量，将每例正常淋巴细胞DNA含量中间值的1.25倍作为该例二倍体（2C）细胞的上限值，并推算2C， 3~4C，5C及大于5C的细胞所占百分比. 将DNA大于5C的细胞算作非整倍体细胞，并计算出DNA含量的相对倍体值，即U值. U值=病变细胞DNA含量/淋巴细胞核DNA含量均值.
　　统计处理：计量资料采用方差分析及多重比较，或方差不齐时采用非参数秩和检验.
　　2结果
　　模型组有2只大鼠分别在第8、第11 wk死亡，其余3个治疗组各有1只大鼠在造模过程中死亡. 各组大鼠胃粘膜病理改变，上皮细胞AgNOR计数，DNA含量及细胞频率分布有差异（Tab 1，2）.

　　表1CAG大鼠胃粘膜病理改变及AgNOR计数（略）
　　Tab 1Mucosal pathology and AgNOR count in CAG rats（略）
　　表2CAG大鼠胃粘膜上皮细胞DNA含量及细胞频率分布（略）
　　Tab 2DNA content and U degree in CAG rats（略）
　　3讨论
　　CAG伴肠上皮化生及异型增生已被公认为胃癌前病变(precancerous lesions)，属中医“胃痞”范畴［1］. 益胃冲剂就是针对CAG脾胃虚弱的病机及胃阴不足的症候群而组成的以益气、健脾、养阴的有效方剂. 核仁形成区(nucleolar organizer region， NOR)数目增多，表明细胞增殖越活跃［2］，同时胃癌前病变细胞处于活跃增殖状态. DNA合成加快，导致DNA含量增加，并出现各倍体和非整倍体细胞［3］.
　　
　　本结果表明，模型组大鼠出现胃粘膜变薄，腺体萎缩、炎细胞浸润，肠上皮化生及异型增生，粘膜上皮细胞AgNOR计数增加，大小不一，形状与分布均具有异型，DNA含量明显增高(P&<0.01)，3~4C(P&<0.01)及5C细胞增多(P&<0.05)并出现4.25%的非整倍体细胞，而益胃冲剂治疗组胃粘膜变薄，腺体萎缩、炎细胞浸润，肠上皮化生及异型增生的发生率较模型组明显降低(P&<0.01)，胃粘膜病理损伤得以修复;胃粘膜细胞核内AgNOR颗粒明显减少，形态和分布趋向正常，DNA含量明显降低(P&<0.01)，以2C细胞为主，非整倍体消失. 与对照组存在显著差异. 说明益胃冲剂对大鼠胃粘膜癌前病变有逆转作用，能稳定rDNA转录活性，抑制细胞异常活跃的增殖状态，降低细胞DNA含量，减少多倍体细胞，消除非整倍体细胞.
　　【

参考文献

】
　　［1］ Shi XY， Zhao FZ， Dai X， Ma Ls， Dong XY， Fang J. Effect of jianpiyiwei capsule on gastric precancerous lesions in rats ［J］ .World J Gastroenterol， 2002;8(4):608-612.
　　［2］ Irazusta SP， Vassallo J， Magna LA， Metze K， Trevisan M. The value of PCNA and AgNOR staining in endoscopic biopsies of gastric mucosa ［J］. Pathol Res Pract， 1998;194(1):33-39.
　　［3］ Attallah AM， AbdelWahab M， Elshal MF， Zalata KR， Ibrahi NM， Ezzat F. Apoptosis in chronic gastritis: Evaluation of the gastric mucosa by DNA flow cytometry and the expression of the high molecular weight cytokeratin ［J］. Hepatogastroenterology， 1996 ;43(11):1305-1312.