【关键词】 瘢痕
关键词: 血管形成抑制剂;成纤维细胞;内皮细胞;超微结构;瘢痕
摘 要:目的 为探讨血管形成抑制剂反应停对增生性瘢痕的治疗机制提供形态学依据. 方法 通过建立兔耳增生性瘢痕模型，观察血管形成抑制剂反应停对增生性瘢痕超微结构的影响. 结果 血管形成抑制剂反应停作用后增生性瘢痕组织中的毛细血管基膜不完整，内皮细胞变性，血管形成过程受损，成纤维细胞发生变性，内质网等细胞器减少，细胞外基质也相应减少. 结论 反应停可能是通过影响血管形成而致增生性瘢痕组织中的成纤维细胞变性.因而血管抑制剂可抑制瘢痕增生.
Keywords:angiogenesis inhibitor;fibroblast;endothelial cell;ultrastructure;scar
Abstract:AIM To investigate the mechanism of the effect of thalidomide on hypertrophic scar.METHODS By estab-lishing rabbit hypertrophic scar model，we observed the ef-fect of thalidomide on the ultrastructure of hypertrophic scar.RESULTS Treated with angiogenesis inhibitor thalidomide，the basement membrane of capillary became unintegrated，the endothelial cells degenerated，and the procedure of angio-genesis was damaged.The fibroblasts of hypertrophic sar be-came degenerated，the endoplasmic reticulum small and re-duced，and the extra cellular matrix also reduced.CONCLUSION The degeneration of hypertrophic scar fi-broblasts and endothelial cells may be caused by the inhibito-ry effect of thalidomide on angiogenesis.So the angiogenesis inhibitor can inhibit the formation of hypertrophic scar.
0 引言
增生性瘢痕是一种常见的临床疾病，目前尚缺乏有效的药物治疗.近年发现血管形成可能在增生性瘢痕的形成过程中也起到非常重要的作用.我们通过对建立兔耳增生性瘢痕模型，观察了血管形成抑制剂反应停对增生性瘢痕组织细胞超微结构的影响，为进一步证实血管形成抑制剂对增生性瘢痕形成的抑制作用提供形态学依据.
1 材料和方法
1.1 材料 新西兰兔16只（第四军医大学实验动物中心提供），随机分为2组，每组8只.30g・L-1 戊巴比妥麻醉，在兔耳腹侧面形成2cm×2cm方形皮肤全层缺损，深达软骨.待创面愈合后可逐渐增生形成增生性瘢痕
［1］ .美国Serra公司产锇酸及Epon-812，常州制药厂产thalidomide（反应停）.
1.2 方法 本实验分为两组，实验组于创面愈合后开始给药，反应停200mg・kg-1 ，1次・d-1 ，对照组不给药.持续给药30d后，于无菌条件下切取兔耳腹侧增生性瘢痕组织，制作透射电镜标本.将实验组与对照组兔耳增生性瘢痕组织切成1mm×1mm×2mm大小，迅速置于30g・L-1 戊二醛固定液中30min，0.1mol・L-1 磷酸缓冲液浸洗，再用10g・L-1 四氧化锇固定30min，去离子水漂洗，300～1000mL・L-1 乙醇脱水，Epon-812包埋，LKB超薄切片机切片，硝酸铅、醋酸铅、枸橼酸铅染色，JEM2000-EX型透射电子显微镜下观察细胞结构.
2 结果
透射电镜下可见对照组增生性瘢痕成纤维呈长梭形，细胞突起较多，细胞核较大，核仁明显，以常染色质为主，细胞质中可见大量扩张之粗面内质网和许多分泌颗粒，功能状态良好（Fig1A）.成纤维细胞与细胞外基质结合紧密，可见大量胶原交织在一起（Fig1B）.增生性瘢痕组织中毛细血管较丰富，血管基膜非常完整，内皮细胞呈立方形，可见部分周细胞（Fig1C）.反应停作用后增生性瘢痕组织中成纤维细胞呈长梭形但突起较少，细胞出现部分空泡化，核仁不明显，染色质边集、浓缩，胞质中细胞器较少，细胞功能不活跃（Fig2A）.有部分成纤维细胞周围出现水肿，胶原纤维较稀疏（Fig2B）.血管内皮细胞出现变性、坏死，血管基膜不完整，并可见间隙形成（Fig2C）. 转贴于 图1 对照组增生性瘢痕 略
图2 实验组增生性瘢痕 略
3 讨论
压迫疗法是防治瘢痕最有效的方法之一，压迫后血管闭合可使增生性瘢痕组织缺氧，从而使增生性瘢痕的成熟程度加速.近年研究显示，增生性瘢痕中血管密度及血管内皮细胞数量高于正常瘢痕及正常真皮，且血管中的内皮细胞处于激活状态2，3］ .进一步研究表明，缺氧只能引起成纤维细胞瞬时的胶原合成增多，此后即表现为对胶原合成的明显抑制，缺氧本身并不能长期促进胶原合成，而是通过启动血管形成过程，改善血、氧供应而使胶原合成增多［4］ .此外，在增生性瘢痕中，胶原的大量合成受多种生长因子调控，而增生性瘢痕中激活的内皮细胞可产生多种生长因子，如PDGF，TGF-β1 ，bFGF，EGF，VEGF等，这些生长因子在增生性瘢痕的形成中均起到重要的促进作用［5］ .采用血管抑制疗法就可通过抑制血管内皮细胞的增殖及迁移［6］ ，抑制新生血管的形成来加重增生性瘢痕的缺氧程度并减少增生性瘢痕组织中的生长因子及成纤维细胞的来源，从而起到对增生性瘢痕的防治作用.血管抑制疗法目前已处于III期临床实验阶段［7］ .本结果显示，血管形成抑制剂反应停作用后，增生性瘢痕组织中血管内皮细胞变性、坏死，毛细血管发育不良，这必然会加重增生性瘢痕组织的缺血缺氧程度，从而对增生性瘢痕组织成纤维细胞的功能状态起到抑制作用.血管抑制剂反应停作用后增生性瘢痕成纤维细胞的细胞核明显变小，核仁不明显.细胞的DNA复制、RNA合成及核糖体前体的合成可能受到抑制.增生性成纤维细胞胞质中包括粗面内质网在内的细胞器减少.而粗面内质网是包括前胶原蛋白分子在内的多种蛋白质合成的场所，前胶原的羟化及糖基化均在此进行.这与本实验所观察到的用药组增生性瘢痕组织细胞外基质减少相一致.我们还观察到部分成纤维细胞出现了变性坏死或凋亡，这都可能与反应停的血管抑制作用有关.
参考文献
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