关于淮南地区人芽囊原虫感染的流行病学调查

【关键词】 芽囊原虫
　　关健词: 芽囊原虫，人;流行病学;寄生虫病;腹泻
　　摘 要:目的 探讨淮南境内居民是否存在人芽囊原虫感染. 方法 用一次性粪盒收集受检者（幼儿园幼儿、在校小学生、中学生和腹泻患者）当日新鲜大便，用生理盐水直接涂片镜检初筛后，将疑似阳性的标本制片，分别采用碘液染色法和苏木素染色法染色，高倍镜下观察形态并测量大小.用BSA系统检测患者细胞免疫功能. 结果 共检查幼儿园幼儿、在校小学生、中学生各100份和腹泻患者粪便403份，人芽囊原虫检出率分别为1.0%（1/100），1.0%（1/100），0（0/100）和5.96%（24/403）.腹泻患者人芽囊原虫检出率与正常对照相比差异显著（P&<0.01）.其中轻度、中度、重度及顽固性腹泻患者人芽囊原虫检出率分别为6.03%（14/232），2.25%（2/89），0（0/17）和12.31%（8/65）.男女腹泻患者人芽囊原虫阳检率分别为7.52%（17/226）和3.95%（7/177）;城乡腹泻患者人芽囊原虫阳检率分别为4.56%（11/241）和8.02%（13/162），两者相比差异均无显著性（P&>0.05）.人芽囊原虫阳性者CD3+ ，CD4+ ，CD8+ 阳性百分数及CD4+ /CD8+ 分别为0.64±0.06，0.44±0.06，0.28±0.04及1.53±0.34，人芽囊原虫阴性分别为0.60±0.05，0.40±0.05，0.30±0.05及1.27±0.22，两组间差异显著（P&<0.05，P&<0.01）. 结论 淮南境内居民存在人芽囊原虫感染，感染度与机体的细胞免疫功能有关.人芽囊原虫感染后可引起腹泻，慢性和顽固性.
　　
　　Keywords:Blastocystis hominis;epidemiology;parasitic dis-eases;diarrhea
　　
　　Abstract:AIM To investigate whether there exists the in-fectio of Blastocystis hominis（B.h）in Huainan，Anhui Province.METHODS The fresh faeces taken from children（100），pupils（100），middle students（100）and the patients with diarrhea（403）were smeared by iodine stain and HE stain for the detection of B.h.After preliminary direct mi-croscopy，the shape and size of B.h were detected by high power lens.The cellular immune function of the patients was detected by Biotin-streptavidin（BSA）.RESULTS The pos-itive rates of B.h in fresh feces taken from the children，pupils，middle school students and the patients with diar-rhea，were1.0%（1/100），1.0%（1/100），0（0/100）and5.96%（24/403）respectively.The positive rate of B.h was higher in patients with diarrhea than that in normal controls（P&<0.01）.Among them，the positive rates of the patients with mild diarrhea，woderate diarrhea，severe diarrhea and obstinate diarrhea were6.03%（14/232），2.25%（2/89），0（0/17）and12.31%（8/65）respectively.The positive rates of B.h in fresh faeces of male and female were7.52%（17/226），3.95%（7/177），and the positive rates of B.h in urban and rural areas were4.56%（11/241），8.02%（13/162）respec-tively，there being significant difference between them（P&>0.05）.The positive rates of CD3+ ，CD4+ ，CD8+ ，CD4+ /CD8+ in blood of the people with positive B.h and negative B.h were0.64±0.06，0.44±0.06，0.28±0.04，1.53±0.34and0.60±0.05，0.40±0.05，0.30±0.05，1.27±0.22respectively，there being significant difference between the two groups（P&<0.05，P&<0.01）.CONCLUSION B.h is a new pathogen of diarrhea in feces of patients in Huainan.It is more commonly seen in the people with chronic diarrhea and obstinate diarrhea，and is associated with the cellular im-mune function.The main thereunder for identified diagnosis of the disease depends on the detection of B.h in fresh feces.
　　
　　0 引言
　　
　　人芽囊原虫病（blastocystosis hominis）是由人芽囊原虫（blastocystis hominis，B.h）寄生于高等灵长类和人类肠道内所引起的一种人兽共患寄生虫病［1，2］ .为查明引起淮南境内不明原因腹泻的病原体，2001-07/08我们对淮南地区人芽囊原虫感染情况进行了初步调查，现报告如下.
　　1 对象和方法
　　
　　1.1 对象 均为淮南境内的居民，包括对在校中小学生的普查和肠道门诊就诊患者的粪检.因不明原因腹泻在肠道门诊就诊的患者403（男226，女177）例，年龄6～52岁.幼儿园幼儿和在校中小学生共300（男156，女144）例，年龄1.5～15岁.以上受检者中，尤以患顽固性腹泻者为重点检查对象.
　　
　　1.2 方法 询问腹泻病史包括现病史、既往病史、个人卫生习惯及生活环境卫生状况等.粪检用一次性粪盒收集幼儿园幼儿、在校小学生、中学生的当日新鲜粪便和患者新鲜腹泻粪便（稀便、粘液脓血便及水样便）2～3g，取少许在洁净玻片上涂制成直径为1.5cm×1.5cm半透明粪膜，先直接镜检生理盐水涂片中B.h，疑似阳性的标本再分别采用碘液染色和苏木素染色，高倍镜下观察形态特征并测量大小.对人芽囊原虫阳性检出者进行细胞免疫功能检查，采用生物素-链霉亲和素（biotin-streptavidin，BSA）系统检测患者外周血CD3+ ，CD4+ ，CD8+ 阳性百分数和CD4+ /CD8+ 比值.取晨起外周静脉血用肝素抗凝，以无Ca2+ ，Mg2+ 液等量稀释后，以淋巴细胞分离液常规分离外周血单个核细胞，洗涤并调整细胞数为（1～3）×109 L-1 细胞悬液.取10μL均匀涂布于印有防酸漆圈内，自然干燥后分别加入抗-CD3+ ，抗-CD4+ ，抗-CD8+ 的mAb及羊抗鼠IgG，SA-HRP，经DAB染色后镜检，细胞膜棕色为阳性，不着色为阴性.共计数200个细胞，分别统计阳性细胞百分数.
　　
　　统计学分析:采用χ2 和t检验.
　　
　　2 结果
　　
　　共采集粪便703份，检出人芽囊原虫者26份，检出率为3.70%.其中健康人粪便300份，检出B.h3份;检出率为0.67%;幼儿园幼儿和在校中、小学生粪便各100份，发现人芽囊虫者分别为1份，1份和0份，检出率依次为1.00%，1.00%和0;轻度、中度、重度和顽固性腹泻者人芽囊原虫检出率依次为6.03%（14/232），2.25%（2/89），12.31%（8/65）和0，差异有显著性（a P&<0.05，χ2 =7.9475;b P&<0.01，χ2 =13.5181vs abnormal and different diarrhea）.
　　
　　2.1 腹泻类型 感染状况:正常人粪便中仅检出2例人芽囊原虫隐性感染者，检出率为0.67%（2/300），腹泻者粪便403份，检出B.h34份，检出率为5.96%（24/403），其中稀便、水样便、粘液脓血便中人芽囊原虫检出率依次为3.70%（21/305），4.23%（3/81）和0（0/17），相互比较无显著性差异（P&>0.05，χ2 =2.2767vs different diarrhea）.腹泻患者中男、女人 芽囊原虫检出率分别为4.56%（11/241）和8.02%（13/162），差异无显著性（P&>0.05）.城乡腹泻患者人芽囊原虫检出率分别为4.56%（11/241）和8.02%（13/162），差异无显著性（P&>0.05）.
　　
　　2.2 细胞免疫功能 人芽囊原虫阳性者CD3+ ，CD4+ 表达水平偏低，CD4+ /CD8+ 比值降低，但CD8+ 表达水平正常（Tab1）.
　　
　　表1 粪检圆孢子虫阳性患者T细胞亚群　略
　　
　　3 讨论
　　
　　人芽囊原虫为一种肠道寄生原虫，是引起腹泻等消化道症状的病原之一.国内外学者对人芽囊原虫感染的流行情况进行调查，发现西安、广州、福州、江西（崇义县）、尼泊尔、温哥华、纽约检出率分别为11.25%，16.02%，8.50%，2.39%，17.02%，3.20%和11.05%，B.h呈全球性分布，各地感染率随受检人群的年龄、职业构成，当地气候、地理环境和卫生条件、饮食习惯、营养状况以及检验季节、方法的不同而有所差异.本结果显示，健康人群人芽囊原虫隐性感染率仅为0.67%，而腹泻患者人芽囊原虫阳检率达5.96%，与健康人群相比，差异显著（P&<0.01），与以往文献报道类似［3，4］ ，说明本地腹泻患者中确有B.h感染存在，且并非罕见，只是由于其感染早期无症状或症状轻微，患者疏于就诊;同时由于B.h感染后缺乏特异的临床症状，易与肠道一般感染相混淆，导致漏诊或误诊.B.h感染与腹泻的发生有密切关系，但是否表现出临床症状取决于虫体感染数量（感染度或虫荷）和是否合并其它细菌性感染.对不同程度腹泻患者人芽囊原虫感染情况进行对比观察，发现顽固性腹泻和轻、中度腹泻患者人芽囊原虫的检出率较高，而重度腹泻患者未检出人芽囊原虫，提示在有条件的医院对一些久治难愈的腹泻患者，应进行粪检，以排除或确定人芽囊原虫的感染.人芽囊原虫是以粪-口途径为主要传播方式的肠道寄生虫病，对不同性别、城乡患者分类对比观察，发现男女、城乡腹泻患者人芽囊原虫的检出率相近，差别无显著性（P&>0.05），说明该病的发生与性别和居住地点无关，而与个人的生活习惯有关，当误食人芽囊原虫污染的食物，易致人芽囊原虫感染［5-7］ . 　本次检查用碘液和苏木素染色后，发现腹泻粪便中的B.h大部分为空泡型，与国内外其他调查者的观察结果相一致［8-11］ .说明空泡型是人芽囊原虫引起腹泻的常见类型，与腹泻的发生关系密切.B.h和铁苏木素有很强的亲和力.因碘液染色中除空泡型外，其他型不易与较小型的阿米巴原虫区别，采用苏木素染色法可克服因碘液染色不易与较小型的阿米巴原虫区别的缺点，能清晰显示虫体的壁、核和拟染色体等结构，较好地将空泡型、颗粒型、变形型与其他肠道非致病阿米巴区分开［12，13］ .对粪检人芽囊原虫阳性患者进行细胞免疫功能检查，发现其CD3
+ ，CD4+ 含量降低，CD4+ /CD8+ 比值下降，CD8+ 含量相对稳定，与人芽囊原虫阴性者相比，差异有显著性（P&<0.05），提示人芽囊原虫感染与机体的细胞免疫功能有关，主要表现以CD3+ ，CD4+ 含量降低为主的免疫防御、免疫清除功能的下降，机体对侵入的人芽囊原虫缺乏足够的免疫反应.CD4+ /CD8+ 是免疫调节网络的枢纽，人芽囊原虫阳性者CD4+ 含量降低，表明辅助性T细胞参与腹泻的致病过程，它既限制了机体对人芽囊原虫抗原的体液应答，也限制了机体对人芽囊原虫感染的细胞免疫应答，使腹泻患者久治难愈.
　　
　　致 谢 朱玉霞、许礼发、唐小龙、蔡茹、钱中清、杨庆贵、贺骥、张秀云、周慧生、陆军和医检专业部分学生参加本实验研究.
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