作者：江艳艳 王胜春 蒋永培 贺雪梅 刘明义
【关键词】 五灵胶囊
关键词: 五灵胶囊;肝纤维化;四氯化碳;大鼠
摘 要:目的 研究五灵胶囊对大鼠肝纤维化的作用. 方法 采用以四氯化碳为主的复合因素致大鼠肝纤维化，观察五灵胶囊对肝组织病理学、肝组织和血清中羟脯氨酸（HYP）、Ⅰ，Ⅲ型前胶原（PCⅠ，PCⅢ）含量的影响. 结果 病理学检查显示，模型组大鼠肝细胞损伤严重，胶原纤维大量增生，形成假小叶.五灵胶囊组大鼠肝细胞结构破坏不明显，肝纤维化程度轻，在3.0g・kg-1 时治疗效果最好.各治疗组的肝组织HYP含量均较模型组明显下降，尤以五灵胶囊组（3.0g・kg-1 ）下降幅度最大（P&<0.01）.各治疗组的血清PCⅢ及肝PCⅠ含量均较模型组明显下降（P&<0.01）.此外五灵胶囊组（3.0g・kg-1 ）还可显著降低血清PCⅠ含量（P&<0.01）. 结论 五灵胶囊可有效地治疗肝纤维化.
Keywords:wuling capsules;hepatic fibrosis;CCl4 ;rats
Abstract:AIM To study the efficaciousness of Wuling cap-sules for hepatic fibrosis in rats.METHODS Rat models with hepatic fibrosis were induced by CCl4 compound factors and then treated with Wuling capsules.Pathology of liver sections，hyaluronic acid and procollagen（PC）contents in rat liver and serum were examined respectively.RESULTS Pathological examinations showed that the liver cells of mod-el rats were injured seriously.Collagen fibers proliferated and dissected hepatic lobules in model rats.Wuling capsules could protect liver cells and reduce degrees of hepatic fibro-sis.The best effects were achieved at3.0g・kg-1 .Com-pared with the untreated group，there were remarkable de-creases of hepatic collagen contents，serum PCⅢcontents and hepatic PCⅠcontents in the drug-treated rats.And the effects were the most significant in the rats treated with Wul-ing capsules3.0g・kg-1 .CONCLUSION Wuling capsules are effective in treatment of hepatic fibrosis.
0 引言
五灵胶囊系五灵丸经剂型改造而成的四类新药.本品属经验方，由五味子、灵芝等数味中药配伍而成.临床用于治疗急慢性肝炎及迁延性肝炎，具有促进肝脏回缩，改善肝功之效［1］ .我们观察了五灵胶囊对以四氯化碳（CCl4 ）为主的复合因素诱发的大鼠肝纤维化模型的治疗作用，并与五灵丸、秋水仙碱进行对比，以期为临床治疗提供理论依据.
1 材料和方法
1.1 药品 五灵胶囊（Wuling capsules，WLC），取五味子、灵芝等，用750mL・L-1 乙醇回流提取，浓缩而得的稠膏再与少量柴胡混合，装胶囊.批号:981206，由本院药剂科中药室提供.取胶囊内容物（每克相当于原生药3.74g），加蒸馏水碾匀溶解，分别配成浓度为160g・L-1 和298g・L-1 的药液备用.五灵丸（Wuling pill，WLP）:批号990125，博爱制药有限公司提供.取五灵丸（每克相当于原生药2.34g），加蒸馏水碾匀溶解，配成浓度为720g・L-1 的药液备用.秋水仙碱（Colchicinum），批号:980443，昆明制药股份有限公司提供.用时加5g・L-1 羧甲基纤维素钠溶液碾匀成浓度为2g・L-1 的供试品液.PCⅠ及PCⅢ放免分析试剂盒:批号991130，由重庆肿瘤研究所提供.
1.2 动物 雄性SD大鼠，7～8wk龄，180～220g，由本校实验动物中心提供，陕医动证字08-014号. 1.3 肝纤维化动物模型的建立与药物治疗 实验动物均饲以高脂玉米粉饲料（790g・L-1 玉米粉+100g・L-1 猪油+10g・L-1 胆固醇），100mL・L-1 乙醇为饮料（自饮）.2wk后，各组大鼠皮下注射400g・L-1 CCl4 -香油溶液1mL・kg-1 ，以后每隔4d注射1次.造模42d后，将大鼠随机分组，每组10只.模型组:蒸馏水10mL・kg-1 ，ig，1次・d-1 ;五灵胶囊小剂量组:五灵胶囊1.6g・kg-1 （相当于生药6.0g・kg1 ），ig，1次・d-1 ;五灵胶囊大剂量组:五灵胶囊3.0g・kg-1 （相当于生药11.2g・kg-1 ），ig，1次・d-1 ;五灵丸组:五灵丸7.2g・kg-1 （相当于生药8.1g・kg-1 ），ig，1次・d-1 ;秋水仙碱组:秋水仙碱1mg・kg-1 ，ig，1次・d-1 .各实验组给药期间继续每隔4d注射1次CCl4 .给药1mo后，处死大鼠，取肝组织和血清分别测定羟脯氨酸（HYP），Ⅰ型前胶原（PCⅠ）及Ⅲ型前胶原（PCⅢ）的含量，另取肝组织作病理切片及电镜检查.
1.4 肝组织中HYP的测定 采用郑绍雄法［2］ 测定.
1.5 肝组织及血清中PCⅠ及PCⅢ含量的测定 放免法，按试剂盒要求操作.
1.6 肝组织病理学检查 ①取经100mL・L-1 中性缓冲福尔马林溶液固定的肝组织标本，石蜡包埋.切片厚5μm，分别作HE染色、胶原纤维染色（Van Gieson氏法），光镜下观察.②肝组织经40mL・L-1 戊二醛冷固定2h后，Epon812包埋，超薄切片，电镜下观察.
统计学处理:所有计量资料均以x ±s表示，用SPLM软件分析数据，进行两两均数的比较.
2 结果
2.1 五灵胶囊对大鼠肝组织中HYP含量的影响 各治疗组的肝组织HYP含量均较模型组明显下降，尤以五灵胶囊组（3.0g・kg-1 ）下降幅度最大（P&<0.01，Tab1）.
表1 五灵胶囊对大鼠肝组织中羟脯氨酸的影响 略
2.2 五灵胶囊对大鼠肝组织及血清中PCⅠ及PCⅢ 含量的影响 各治疗组的血清PCⅢ及肝PCⅠ含量均较模型组明显下降（P&<0.01）.此外，五灵胶囊（3.0g・kg-1 ）还可显著降低血清PCⅠ含量（P&<0.01，Tab2）.
表2 五灵胶囊对大鼠肝组织及血清中的Ⅰ，Ⅲ型前胶原的影响 略
2.3 病理组织学检查 ①HE染色显示:模型组大鼠肝细胞明显肿胀变性，核固缩或溃破，肝板断裂，肝索排列紊乱，损伤的肝细胞约占3/4.中央静脉周围有大量坏死的肝细胞，并伴有中性粒细胞、单核细胞等炎性细胞侵润.枯否细胞增生肥大，窦内皮细胞激活，成纤维细胞增多，胶原纤维大量增生，形成假小叶.五灵丸组大鼠损伤的肝细胞约占1/2，肝细胞以气球样变性为主，肝窦狭窄，仍有炎性细胞侵润.在中央静脉与大的汇管区处胶原纤维较多，形成菲薄的纤维隔，向四周伸出细小纤维.五灵胶囊大剂量组大鼠肝组织结构破坏不明显，肝细胞气球样变性程度显著减轻，在中央静脉与大的汇管区处有少量胶原纤维，但无纤维隔形成.秋水仙碱组大鼠肝细胞气球样变性较五灵胶囊组严重，损伤的肝细胞约占1/2，其他组织学特征与五灵丸组相似.胶原纤维VG染色显示:模型组大鼠肝脏内胶原纤维大量增生，并积聚成条索和间隔，从汇管区向肝小叶内延伸，形成假小叶.
图1 － 图2 略
3 讨论
肝纤维化是肝硬化的前期病变，其主要病理特征为肝细胞外基质（ECM）的过度增多和异常沉积.其中胶原蛋白是ECM的最主要成分，占正常肝脏总量的5%～10%，肝硬化时可达总量的50%，尤其以Ⅰ，Ⅲ型胶原增加为主
［3］ .PCⅠ，PCⅢ分别是Ⅰ，Ⅲ型胶原的前体.它们释放出羧基端和氨基端多肽后，即转化成原胶原分子，再通过交联分别形成Ⅰ，Ⅲ型胶原［4］ .研究证实，PCⅠ，PCⅢ的含量随着肝纤维化程度的加重而上升，且二者水平不相关.因此联合检测PCⅠ，PCⅢ可作为判断肝纤维化程度的指标［5］ .HYP是胶原蛋白中独有的氨基酸成分，测定其在肝脏中的含量，可反映肝脏胶原的总量［6］ .
本实验结果显示，五灵胶囊可显著降低血清PCⅢ及肝PCⅠ含量，当给药剂量为3.0g・kg-1 时，还可显著降低血清PCⅠ含量.各治疗组的肝匀浆HYP含量均较模型组明显下降，尤以五灵胶囊组（3.0g・kg-1 ）下降幅度最大.证明五灵胶囊能抑制CCl4 所诱导的胶原蛋白合成的增加，使肝脏总胶原及Ⅰ，Ⅲ型胶原均减少.此外，病理学检查显示，与模型组相比，各治疗组肝细胞结构破坏不明显，肝纤维化程度轻，其中五灵胶囊组（3.0g・kg
-1 ）的治疗效果最好.
五灵胶囊是由蜜丸改剂而成的硬胶囊，其制备工艺主要是用750mL・L-1 的乙醇回流提取，我们以往所做的正交实验表明，该工艺较制备五灵丸所采用的水提醇沉法更能有效地提取出处方中各生药的有效成分.本实验也从生化学及形态学两个方面证实，五灵胶囊治疗肝纤维化的作用优于五灵丸.
五灵胶囊的疗效优于原剂型，且服用方便、稳定性增强，因此具有较高的临床应用价值.
参考文献
［1］Zhou YX，Yan R，Kang WZ，Dan MT，Han J，Zhou RR，Liang GZ，Wang JJ.Therapeutic comparisons of wulingwan，schisan-dra fruit and biphenyl dimethyl dicarboxylate for chronic hepati-tis B ［J］.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），1991;12（6）:436-439.
［2］Zheng SX，Cai WY，Qiu MC，Zu XL.Improvement in method for determination of hydroxyproline in blood and Urine ［J］.Zhonghua Yixue Jianyan Zazhi（Chin J Med Lab Sci），1983;6（3）:133-136.
［3］Rojkind M，Giambrone MN，Biempica L.Collagen in normal and cirrhotic liver ［J］.Gastroenterology，1979;76（4）:710-719.
［4］Liu XM，Lin P，Li WD，Liu Y，Lin YM.Study on radioim-muno-assay of typeⅠprocollagen in human ［J］.Zhonghua Heyixue Zazhi（Chin J Nucl Med），1997;17（4）:247-248.
［5］Trinchet JC，Hartman DJ，Paterom D.Serum TypeⅠCollagen and N-terminal Peptide of TypeⅢProcollagen in Chronic Hep-atitis ［J］.J Hepatol，1992;12（1）:139-147.
［6］Xu LM，Liu P，Liu C，Xue HM，Zhu JL.The observation about the act on anti-fibrosis of liver with extractum semen per-sicae（ESP），The research by immunohistochemistry and colla-gen metabolism ［J］.Zhongyao Yaoli Yu Linchuang（Pharmacol Clin Chin Materia Med），1993;9（5）:14-16.转贴于