作者：段国荣 周永兴 聂青和 贾战生 冯志华 谢玉梅
【关键词】 肝炎
关键词: 肝炎，乙型;肝炎，丙型;细胞活素类;Th1/Th3
摘 要:目的 研究Th1/Th3变化在慢性丙型肝炎发病机制中的作用. 方法 采用双抗体酶联分析法检测了20例正常人，35例慢性丙型肝炎，30例慢性乙型肝炎患者血清中的IFN-，IL-2，IL-4和IL-6的水平. 结果 慢性丙型肝炎组Th3类细胞因子（IL-4，IL-6）水平明显高于正常对照组（P&<0.05），Th1类细胞因子水平IL-2也增高（P&<0.05），然而，Th1类细胞因子IFN-水平有增加趋势，但无统计学差异（P&>0.05）.Th3类细胞因子水平比Th1类细胞因子水平高. 结论 Th3类细胞因子水平增高以及由此引起的Th1/Th3比值下降可能与慢性丙型肝炎的病程持续有关.
Keywords:hepatitis B;hepatitis C;cytokines;Th1/Th3
Abstract:AIM To study the roles of Th1and Th3cy-tokines in chronics HCV infection.METHODS Serum levels of Th1cytoines，interferon gamma（IFN-gammn）and inter-leukin（IL）-2，and Th3cytokines，IL-4and IL-6，were mea-sured by using enzyme-linked immunosorbent assay.Thirty-five inpiduals with chronic HCV infection，20healthy sub-jects as normal controls and30chronic HBV infected patients as disease controls were observed.RESULTS Th3cytokines（IL-4and IL-6）significantly increased in chronic HCV infect-ed patients compared with normal controls（P&<0.05）.Simi-larly，the levels of Th1cytokine（IL-2）also rose in inpidu-als with chronic HCV infection as compared with normal con-trols（P&<0.05）.However，Th1cytokine IFN-gamma level slightly increased，but there was no difference between chronic HCV infection and normal controls（P&>0.05）.CONCLUSION Levels of Th3cytokines are higher than Th1cytokine in HCV infection.This suggests that there might exist a low ratio of Th1/Th3in chronic HCV infected patients and an enhanced Th3responses during HCV infec-tion，which may partly be responsible for the persistence of HCV infection.
0 引言
研究表明，感染性疾病、自身免疫性疾病、过敏性疾病及移植排斥反应等与Th1/Th3失衡有关［1］ .近年来有关细胞因子在肝炎病毒免疫中的作用研究较多，但仍存在一些问题.Woitas等［2］ 研究了10例健康者和10例HCV患者，用C区抗原和C区的5个多肽刺激外周血单个核细胞（PBMC），前者主要产生Th1类细胞因子，后者主要产生Th3类细胞因子，表明HCV感染慢性化的原因与缺乏Th1类细胞因子有关.然而，Ferrari等［3］ 的研究结果则发现，慢性丙肝患者外周血很容易得到HCV特异性CD4 ，CD8 反应，并且Th1类细胞因子占优势.由此可见，HCV感染中细胞因子的作用还有待证实.我们通过检测血清中的IFN-，IL-2，IL-4和IL-6的表达水平，观察Th1/Th3变化，探讨其在慢性丙型肝炎发病中的作用，为今后寻找调节和平衡Th1/Th3的措施，指导临床治疗提供实验的证据.现将结果报告如下.
1 对象和方法
1.1 对象 健康献血员20（男15，女5）例，为正常对照（对照血清标本来自本校唐都医院献血科，肝功正常，肝炎病毒标志物阴性），平均年龄30（25～35）岁.慢性乙型肝炎（中度）30（男15，女15）例作为疾病对照，平均年龄32.5（24～41）岁.慢性丙型肝炎（中度）35（男20，女15）例，平均年龄31（23～39）岁.65例肝炎血清标本来自本校唐都医院感染病科门诊及住院患者，诊断符合1995年（北京）第五次全国传染病与寄生虫病学术会议修定的诊断标准.
1.2 方法 试剂:IFN-检测试剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司，批号991225;IL-2，IL-4和IL-6检测试剂盒购自上海森雄实业有限公司，批号0009089.方法:IFN-，IL-2，IL-4和IL-6检测采用双抗体夹心酶联分析法.从已平衡至室温的密封袋中取出所需板条，分别将标本及不同浓度标准品（100μL/孔）加入相应孔中，然后再加入生物素化抗体工作液（50μL/孔）和酶结合物（20～25℃）共同孵育120min.洗板3次.先后加入底物A，B各100μL/孔，避光置室温10～30min.加入终止液50μL/孔，混匀后即刻在ELISA读数仪上测量A450值，绘制标准曲线，并测定各血清标本中IFN-，IL-2，IL-4和IL-6的浓度（ng・L-1 ）.以IFN-浓度代表Th1，IL-4浓度代表Th3，从而计算Th1与Th3的比值.统计学处理:采用基于秩次的非参数检验等.
2 结果
2.1 正常对照组、乙肝组、丙肝组患者血清四种细胞因子的水平 见Tab1.
表1 正常对照组、乙肝组、丙肝组患者血清四种细胞因子的水平 略
2.2 对照组、乙肝组、丙肝组的Th1/Th3比值 见Fig1.
图1 略
3 讨论
HCV是一种RNA病毒，是导致输血后肝炎和非甲非乙型肝炎的主要病原，呈世界性流行.大约50%～90%的患者病程转为慢性，其中，分别有8%～46%和11%～19%发展为肝硬化和肝细胞肝癌［4］ .相比之下，约10%HBV感染者病程转为慢性.可见，慢性化率高是HCV感染的主要临床特征之一.有关丙型肝炎慢性化机制目前尚不明了.一般认为，HCV在体内的持续感染是由病毒和机体免疫状态两方面的因素决定的.就病毒因素而言，①典型的HCV感染为低滴度病毒血症，对机体的刺激性小，不足以引起机体的免疫应答［5］ ;②由HCV高度变异性所产生的大量准种可逃避宿主的免疫攻击［6］ ;③HCV不同基因型引起的免疫应答的强度不尽相同［7］ .HCV1b型虽有较强的复制能力，但其抗原表达能力差，所诱导产生的免疫反应较为低下，因而有利于HCV的持续感染.至于宿主的免疫应答，尽管HCV诱导产生了中和抗体，但是由于HCV的高度变异性，此抗体对HCV的清除作用不大［6，8］ .细胞免疫应答，尤其是Th1，Th3细胞免疫应答则影响着感染的结局.
辅助性T淋巴细胞根据其分泌细胞因子的不同，可将其分为Th1和Th3两个亚群［9］ .Th1亚群分泌IFN-，IL-2，LT-α等，主要参与细胞介导的免疫反应，有利于病毒清除.Th3亚群分泌IL-4，IL-5，IL-6等，主要促进体液免疫反应.
Kobayashi等［10］ 通过对慢性丙型肝炎（CHC）患者和健康对照组血循环中的CD4+ T淋巴细胞（产生IFN-或IL4）计数发现:在体外将CD4+ T淋巴细胞用抗CD3 抗体刺激后，CHC患者的Th1细胞数量明显低于对照组，而Th3细胞数量则明显高于对照组.提示CHC患者的Th3细胞占优势.Fan等［11］ 通过检测CHC患者血清Th1类、Th3类细胞因子水平，也提示CHC患者Th3细胞占优势.Eckels等［12］ 应用合成的非结构蛋白NS3研究CHC患者的Th反应，结果Th3类细胞占优势，Th1类细胞低下.Tsai等［13］ 分析了重组HCV抗原刺激对急性丙型肝炎患者外周血CD4 +T淋巴细胞增殖及分泌细胞因子的影响.提示Th3细胞介导的免疫反应在HCV感染慢性化中起着重要作用.
上述研究结果表明，Th1类和Th3类细胞因子失衡与CHC发病机制有关.因此，外源性调节Th1，Th3的比例可能有利于CHC感染者病情的恢复.问题是，根据Inchanspe等［14］ 的研究结果，既然所有HCV DNA免疫原诱发强的Th1反应，那麽，在CHC病程中，为何会出现Th3类细胞因子水平的增高?结合Shapiro等［15］ 的研究，是否与HCV感染PBMC时，对Th1，Th3细胞产生破坏作用，前者受破坏多，影响了细胞的免疫功能，使得HCV不能被清除，导致感染持续.
总之，深入探讨Th1/Th3在慢性丙型肝炎发病中的作用，为今后HCV感染免疫治疗提供一条新思路.
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