作者：刘煜 李柱一 刘绪宏 唐丽君 游国雄
【关键词】 重症肌无力
关键词: 重症肌无力;受体，胆碱能;抗体;体感诱发电位，躯体感觉
摘 要:目的 本研究旨在进一步探索重症肌无力（MG）患者的乙酰胆碱受体抗体（AChRab）是否对大鼠中枢神经系统（CNS）躯体感觉传导通路产生影响. 方法 从AChRab阳性的全身型MG患者血清中提取IgG，将其注入大鼠侧脑室，观察其对下肢体感诱发电位（SEP）的影响. 结果 注入大鼠侧脑室内的AChRab可致大鼠本体觉传导障碍，引起SEP异常，表现为N20 波消失或潜伏期延长. 结论 MG患者的AChRab不仅可以作用于NMJ处的AChR，而且还可以作用于CNS并引起本体觉传导障碍，进一步证明了AChRab在CNS中的病理作用.
Keywords:myasthenia gravis;receptors，cholinergic;anti-bodies;evoked potentials，somatosensory
Abstract:AIM To explore if circulating acetylcholine recep-tor antibodies（AChRab）presented in myasthenia gravis（MG）sera can cause dysfunction of somatosensory transmis-sion in CNS of rats.METHODS Before and after applica-tion of somatosensory evoked potential（SEP）test，AChRab purified from MG sera was injected into the lateral cere-broventricular system.RESULTS Intracerebroventricular administration of MG patient AChRab，but not normal IgG resulted in losing of N20 wave or a prolongation of the latency of SEP.MG AChRab vs normal IgG，（23.1±0.7）ms vs（19.7±0.4）ms，P&<0.01.Results also showed that the la-tency of N20 wave between the rats without any treatment and those treated with normal IgG was not significantly different，non-treatment vs normal IgG treatment，（19.7±0.6）ms vs（19.7±0.4）ms，P&>0.05.CONCLUSION AChRab inject-ed into cerebroventricular system from MG sera may cause dysfunction of somatosensory transmission in rats and play a pathological role in the neuromuscular junction and CNS.
0 引言
重症肌无力（MG）是一种常见的自身免疫性疾病，乙酰胆碱受体抗体（AChRab）与神经肌接头（NMJ）处乙酰胆碱受体（AChR）结合，引起NMJ处乙酰胆碱（ACh）传递障碍是公认的致病机制［1］ .然而近年来研究发现MG患者伴有多种中枢神经系统（CNS）损害的症状和神经电生理检查异常.Fotiou等［2］ 发现MG患者视觉诱发电位P100 波幅降低且潜伏期明显延长;本实验室近年来利用脑干听觉诱发电位研究MG患者中枢神经系统功能，结果提示部分MG患者存在脑干功能异常［3］ ，正中神经体感诱发电位N20 -P22 波幅降低和（或）潜伏期延长
［4］ ;此外，Sa-phier等［5］ 发现MG动物模型（EAMG）和尾壳核内注射MG患者血清的实验动物均有相似的异常脑电图表现;Lefvert等［6］ 研究结果表明MG患者脑脊液中存在AChRab;Brenner等［7］ 将从MG患者血清中提取的IgG注入大鼠侧脑室，结果发现不仅影响下丘脑―垂体―肾上腺轴的功能，而且出现MG模型样症状.上述研究提示CNS胆碱能系统功能障碍亦可能与MG模型样症状有关，但机制不明.作者为进一步探讨MG的CNS受损机制，从MG患者血清中分离出AChRab，然后再注入大鼠脑室系统，由此方法首先建立了MG中枢损害模型，用此模型研究MG患者AChRab引起CNS损害的机制，结果发现模型组与对照组比较，脑干听觉传递功能明显受损;用MG患者AChRab进行免疫组化染色发现AChRab可与中枢神经系统AChR免疫交叉结合［8］ .本实验在利用该模型的基础上，观察大鼠侧脑室内注入AChRab前、后大鼠下肢坐骨神经体感诱发电位（SEP）的改变，以进一步寻求MG的CNS受损机制.
1 材料和方法
1.1 提取IgG 选择具有典型临床症状，抗胆碱酯酶药物试验阳性，血清AChRab滴度阳性，确诊为全身性MG的患者为研究对象.取患者血清10mL，用硫酸铵盐析法提取IgG，透析后分装冻存备用.另取健康人血清10mL，方法同上.
1.2 大鼠脑室内注射IgG 选择成年SD大鼠50只，雄性，体质量200～300g.随机分成对照组16只，实验组34只.戊巴比妥钠30mg kg-1 ，经腹腔麻醉，置于立体定向仪上，剪开头皮，暴露颅骨.选自Brega-ma点向后1.3mm，向左旁开1.3mm处为穿刺点，钻颅，然后自脑表面进针4.0mm，进入脑室，将提取的25μL IgG缓慢注入，隔日一次，共3次.对照组注射从正常人血清中提取的IgG，方法同上.
1.3 SEP测定 两组大鼠在脑室内注射IgG1wk后分别测定下肢SEP.方法:戊巴比妥钠40mg kg-1 ，腹腔麻醉，置于检查台上，剥离双侧坐骨神经.刺激电极置于坐骨神经主干，记录针电极置于Bregama氏点，参考电极置于同侧耳尖，对侧耳尖接地.用NDI-500神经电检诊仪（上海海军医学研究所生产）给予2.00mA刺激，3次/S，叠加500次.记录结果，输出打印.注射前随机选取18只SD大鼠做正常对照.
2 结果
2.1 正常SEP 正常大鼠SEP于潜伏期18.35～20.94ms（19.7±0.6）ms处恒出现一个波峰向上的负波，命名为N20 （Fig1）.
2.2 对照组SEP 对照组16只大鼠，N20 波潜伏期为18.94～20.94（19.7±0.4）ms，与实验组比较差异显著（P&<0.01），与正常组比较无明显差异（团体t检验:P&>0.05，Fig2）.
2.3 实验组SEP 实验组34只大鼠SEP出现不同程度的异常，其中8只N20 波完全消失，26例N20 波潜伏期21.14～24.63（23.1±0.7）ms，与正常组比较明显延长（团体t检验:P&<0.01，Fig3）.
图1 －图3 略
3 讨论
MG是一种主要累及神经肌肉接头（NMJ）处突触后膜上的肌-乙酰胆碱受体（肌-AChR）的自身免疫性疾病.目前MG的研究大多集中在AChRab的产生以及AChRab对神经肌接头处AChR的病理作用机制等.研究发现肌-AChR是由四种亚单位（2α，β，γ，δ）构成，而神经-AChR是由α，β两种亚单位构成，后者的亚单位亚型α2-9 和β2-4 广泛分布于脊椎动物皮层、基底节、丘脑、下丘脑、脑干、小脑和脊髓等许多部位［9-12］ .肌-AChR和神经-AChR同属于ACh-门控-离子通道超基因家族，两者的亚单位氨基酸序列具有高度同源性［9］ .分子克隆显示人与大鼠的α3 ，α5 ，β2 ，β3 ，β4 之间也具有很高的同源性，其中β3 的同源性高达89%［13］ .近年来，我们利用大鼠脑室内注入MG患者AChRab的方法建立了MG中枢受损模型，并研究MG患者中枢神经系统（CNS）损害机制.结果表明:MG患者AChRab可与大鼠CNS神经-AChR免疫交叉结合，神经-AChR样免疫阳性反应广泛分布于大鼠CNS许多部位，如大脑皮层、脑干各颅神经运动核团、脊髓运动神经元等;注入脑室内的AChRab可致大鼠脑干功能异常和引起MG模型样症状，于是提出MG患者肌无力应是AChRab致NMJ处肌-AChR受损引起的肌无力和CNS神经-AChR受损引起的肌无力的总和［8］ .在本实验研究过程中也发现，大鼠侧脑室内注入MG患者AChRab后1～2wk，大鼠出现MG模型（EAMG）样的表现，如摄食量减少、体质量减轻、行走不稳、倦怠、运动减少、对外界刺激反应迟缓等症状，而对照组不仅未观察到上述症状，反而发现大鼠体质量不同程度的增加，而且实验组大鼠症状的轻重程度与SEP异常有一定相关性.N20 波完全消失的实验组大鼠8例，上述症状较重，在两周内死亡.
本实验结果表明，MG患者AChRab和SD大鼠CNS神经-nAChR结合，可致大鼠本体觉传导通路突触间传递障碍，引起SEP异常.本项实验研究，进一步证实AChRab可与中枢神经AChR结合，引起多种中枢神经系统功能异常.
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