【关键词】 趋化因子
关键词: 趋化因子，融合蛋白;胃癌
0 引言
趋化因子在人类肿瘤的发生及其生物学行为中所起的作用越来越为人们重视.利用原核表达载体pGEX-4T-1在大肠杆菌中重组表达人单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1），并在体外和体内实验中对其生物学活性进行了初步的研究.
1 材料和方法
1.1 材料 原核表达载体pGEX-4T-1及大肠杆菌菌株JM109由本校分子生物学研究所提供.Balb/c nu/nu小鼠，6～8wk龄，雌性，体质量14～16g，由上海肿瘤研究所提供.胃癌SGC7901细胞系由西京医院消化病研究所提供.
1.2 方法
1.2.1 融合蛋白GST-MCP-1的表达 将人MCP-1基因cD-NA插入质粒pGEX-4T-1中GST基因的3’端多克隆位点，所构建的载体用来转化大肠杆菌JM109，扩增后IPTG诱导表达，收集菌体，产物经120g L-1 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测表达情况［1］ .
1.2.2 GST-MCP-1体外活性的测定 将可表达GST-MCP-1的宿主菌扩增集菌后行裂菌处理，上清离心后过GST亲和层析柱，纯化产物用48孔微型趋化装置行体外趋化活性测定［2］ .
1.2.3 GST-MCP-1在荷瘤裸鼠模型上趋化活性的测定 胃癌SGC7901细胞系体外扩增，以2×106 /只接种于裸鼠皮下.成瘤后随机分组，分别在瘤周注射GST-MCP-1和GST生理盐水溶液，2次 wk-1 ，5wk后拉颈处死小鼠，采取肿瘤及周边组织，固定后切片行HE染色镜下观察趋化现象［3］ . 2 结果
诱导后菌体表达一条Mr30浓染带.含有GST-MCP-1的裂菌后上清经GST亲和层析柱纯化后的产物经趋化活性测定，证实具有明确的单核细胞趋化活性.胃癌SGC7901细胞接种裸鼠成瘤后，瘤周注射GST-MCP-1，5wk后取瘤体做石蜡切片，HE染色后镜下观察，可见瘤周基质内有明确的单核细胞浸润（图1）.
图1 略
3 讨论
利用融合蛋白表达载体来表达重组产物GST-MCP-1，不但保持了较满意的产量，而且GST的存在为利用其配体行亲和层析，进一步纯化表达产物创造了有利条件，并不影响重组产物的活性.MCP-1主要对单核细胞具有趋化作用，并通过这一作用参与人类炎症和肿瘤等疾病的发生和发展过程［4］ .我们所获取的重组蛋白产物不仅在体外实验中证实了其趋化活性的存在，而且在胃癌荷瘤裸鼠模型上局部注射亦具有明确的单核细胞趋化活性，但并未表现出抑瘤活性.这一结果可能与产物的纯度，给药方式和注射量等有关.如能进一步严格控制诸项条件，将有助于更好地评价重组产物的价值，并为临床应用提供更多的依据.
参考文献
［1］Falk W，Goodwin RH，Leonard EJ.A48-well micro chemotaxis assembly for rapid and accurate measurement of leukocyte mi-gration ［J］.J Immunol Methods，1980;33（8）:239-242.
［2］Smith DB&&Johnson KS.Single-step purification of polypeptides expressed in E.coli as fusions with glutathione S-transferase ［J］.Gene，1988;67（5）:31-40.
［3］张新海，趋化因子超家族的研究进展［J］.国外医学免疫学分册，1995;15（2）:35-39.
［4］Hoshino Y，Hatake K，Kasahara T.MCP-1stimulates tumor necrosis and recruitment of macrophages into tumors in tumor-bearing nude mice ［J］.Exp Hematol，1995;23（2）:1035-1039.转贴于