作者：郭英 黄高升日 闫庆国 王哲 张永清
【关键词】 霍奇金病
关键词: 霍奇金病;淋巴细胞;增生
摘 要:目的 认识霍奇金病（Hodgkin’s Disease，HD）组织中的淋巴细胞的增生性质. 方法 应用PCNA免疫组化方法测定经石蜡包埋40g・L-1 甲醛固定的10例HD和10例反应性增生淋巴结标本的增生活性. 结果 10例HD病的背景淋巴细胞平均增生分数为（17.92±7.1）%，10例反应性增生淋巴结淋巴细胞平均增生分数为（11.14±8.6）%，统计学分析表明两者的增生分数有非常显著的差异（χ2 =75.6，P&<0.001）. 结论 霍奇金病中淋巴细胞较反应性增生淋巴结淋巴细胞的增生分数显著升高，表明它们可能不是反应性淋巴细胞.
Keywords:Hodgkin’s disease;lymphoid cell;hyperplasia
Abstract:AIM To find out the nature of lymphoid cells in the tissue of Hodgkin’s disease，based on estimating prolifer-ative activity.METHODS By using an antibody to prolifer-ating cell nuclear antigen（PCNA），proliferative activity of background lymphoid cells of10cases of Hodgkin disease in-cluding7cases of mixed cellularity type，3cases of nodular sclerosing type were estimated and10cases of lymphadenitis used as control group.RESULTS The mean growth fraction of background lymphoid cells was significantly higher than that of reactive group.CONCLUSION The lymphoid cells in the tissue of Hodgkin’s disease might probably not be reac-tive.
0 引言
霍奇金病（Hodgkin’s Disease，HD）是淋巴造血系统的恶性肿瘤.HD病组织中细胞成分复杂［1，2］ .其中公认的肿瘤细胞为RS细胞、霍奇金细胞（总称HRS细胞）及其变体细胞.淋巴细胞在该病组织中占据很大组分，它在该病中是单纯的反应性增生的淋巴细胞，还是参与组成恶性成分，这个问题是关系到霍奇金病肿瘤细胞起源的关键问题.我们应用PC-NA单抗免疫组织化学染色方法检测了10例霍奇金病及10例反应性增生的淋巴结中淋巴细胞的增生活性，以认识霍奇金病组织中淋巴细胞的增生性质.
1 材料和方法
1.1 材料 HD石蜡包埋标本10例（混合细胞型7例，结节硬化型3例）及反应性增生淋巴结石蜡包埋标本10例均取自本校西京医院病理科.其中反应性增生淋巴结的诊断标准依据Krishnan等［3］ 的论著所述.上述标本用切片机制成5μm厚石蜡切片行PC-NA单抗免疫组化染色.
1.2 方法 PCNA单抗购自博士得公司，Envision购自Dako公司，用Envision两步法行免疫组化染色，DAB呈色，苏木精衬染.设PBS及正常鼠血清替代一抗作为阴性对照.用目镜中放置方格测微器观察，在病变组织内随机分别记数10个高倍视野中固定方格内总数1000个PCNA染色阳性及阴性淋巴细胞，计算每例HD及反应性增生淋巴结中淋巴细胞的增生分数.即:淋巴细胞增生分数=PCNA阳性淋巴细胞PCNA阳性淋巴细胞+PCNA阴性淋巴细胞×100%统计学处理:用χ2 连续校正检验.以P&<0.05为有显著性差异.
2 结果
PCNA阳性细胞胞核呈棕黄色反应，有的细胞胞核呈极浅的棕黄色，未算在阳性细胞之列（Fig1，2）.两种阴性对照均未见胞核呈阳性反应.HD组织背景淋巴细胞的平均增生分数为（17.92±7.1）%，反应性增生淋巴结组织中淋巴细胞的平均增生分数为（11.14±8.6）%.经χ2 检验连续性校正，HD中背景淋巴细胞的增生分数显著高于反应性增生淋巴结中淋巴细胞的增生分数（χ2 =75.6，P&<0.001）.
3 讨论
HD病是人类常见的淋巴造血组织恶性肿瘤.其肿瘤组织中细胞成分混杂，现公认其中HRS细胞及其变体细胞为该病的肿瘤细胞.现今对HD病因之研究热点仍集中于这类细胞［1，2］ ，而认为HD病肿瘤组织中的淋巴细胞是反应性的［1，2］ ，很少引起关注.然而HD病的特点在于少量的肿瘤细胞与大量增生的淋巴细胞及其他细胞相混杂，其中的淋巴细胞是否真是普通的反应性增生的淋巴细胞是关系到霍奇金病肿瘤细胞起源的关键问题.Ohshima等［4］ 用单细胞分析及原位杂交证实HRS细胞是非克隆性的，最近有人用原位研究发现HD组织中的淋巴细胞的染色体异常［5］ .这些均对HRS细胞的肿瘤性质及背景淋巴细胞的本质提出质疑.我们利用Ki67标记指数法证实HD病中背景淋巴细胞较普通淋巴组织增生之淋巴细胞的增生活性有显著升高［6］ .另有人用PC-NA免疫组化染色证实各型HD病中背景T淋巴细胞增生活性较高［7］ ，但未对HD组织中背景淋巴细胞与普通淋巴组织增生之淋巴细胞的增生活性做出比较，因而不能提示它们是否具有瘤性增生的活性.现在我们用PCNA抗体将HD病与反应性增生淋巴结同时染色，发现HD病背景淋巴细胞较反应性增生淋巴结之淋巴细胞的增生活性有显著升高.PCNA是细胞周期中DNA聚合酶-δ的辅助蛋白［8，9］ ，它的水 平在G1 与S的交界处增多，这时用免疫组化方法可以检测到PCNA，PCNA在S期的后期水平达到最高［10］ ，所以PCNA是反映细胞增生的可靠指标之一.而且PCNA抗体可以用于检测甲醛固定石蜡包埋的组织，应用较为便利.我们分别用PCNA及Ki67标记指数法均发现HD病组织中之淋巴细胞的增生活性明显高于普通反应性增生的淋巴细胞的增生活性，而且用PCNA免疫组化法所测得的HD病中淋巴细胞的增生活性与低度恶性非霍奇金淋巴瘤接近［11］ ，表明其可能具有瘤性增生活性，可能参与HD病中恶性细胞的组成成分.
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