关键词: 吸烟;免疫系统;T细胞
摘 要:目的 探讨长期吸烟对免疫系统影响的机制. 方法 分别于3mo和9mo对吸烟组及对照组大鼠行抗体形成细胞（AFC）试验和抗CD3 抗体诱导的T细胞增殖试验以测定其体液和细胞免疫. 结果 9mo后，吸烟组大鼠对绵羊红细胞的抗体形成细胞反应及抗CD3 抗体诱导的增殖反应均较对照组显著降低，而3mo时无显著差异. 结论 长期吸烟所引起的免疫抑制是与抗原刺激T细胞后，T细胞不能有效地活化、增殖和分化有关，T细胞自身的细胞免疫受到损伤，也使得它不能有效地辅助B细胞进行增殖及产生抗体，从而使体液免疫也变得无能.
Keywords:smoking;immunization system;T cells
Abstract:AIM To investigate the mechanism of how cigarette smoke affects the immunization system.METHODS Antibody-forming cell response and assay for anti-CD3 -in-duced proliferation were performed to determine the cellular and humoral immunity after3and9months’smoking.RESULTS Compared to those of the control group，the an-tibody-forming cell response and anti-CD3 -induced prolifera-tion of smoking group reduced significantly after9months，while there was no significant difference between the two groups after3months.CONCLUSION Immunosuppression caused by chronic exposure to cigarette smoke is related with the impairment of antigen mediated signaling in T cells.The impairment leads to the significant reduction of activation and proliferation of T cells，which in turn causes the impairment of the cellular immunity and thereby the disability to help the B cells to produce antibodies.Therefore，the humoral immu-nity is anergy as a result.
0 引言
吸烟是影响身体健康的一个重要因素，可以显著升高心脏病、肿瘤、急慢性呼吸道感染的发病率.有人认为就是因为吸烟所引起的免疫系统的损害才导致了人体对这些疾病的易感性［1］ .吸烟可影响广泛的包括体液的和细胞介导的免疫反应功能［2］ .尽管人们了解到长期吸烟会影响兔子、猴和人类的T细胞反应，但其确切的分子机制却尚未阐明.大鼠若长期暴露于烟草的主要毒性成分尼古丁，抗体形成细胞的反应就会受到影响.其原因可能是T细胞的反应性增殖降低，也可能是T细胞依赖的抗体反应降低.然而，吸烟对T细胞功能影响的机制人们尚未清楚，这种免疫抑制有可能与T细胞内抗原介导的信号转导受损有关［3］ .除尼古丁之外，烟草中含有成千上万种其他毒性物质.为研究吸烟引起的免疫抑制的分子机制，我们给SD大鼠每日持续吸烟数小时，持续9mo，然后观察其免疫功能的改变.
1 材料和方法
1.1 材料 ①动物:4～5wk龄的SD雄性大鼠共50只购自本校实验动物中心，到6wk龄时按质量随机分为对照组和吸烟组，3，9mo时分别处死10，15只.②抗CD3 抗体购自北京中山公司.
1.2 方法 ①烟卷点燃后通过与饲养笼相通的进气管吹入，吸烟组每日暴露6h，对照组暴露于正常饲养环境.②免疫:大鼠在处死之前4d给予iv5×108 绵羊红细胞.③淋巴细胞的准备:取大鼠脾脏后将之研碎，经不锈钢滤网过滤后用NH4 Cl溶液将红细胞溶解，将脾细胞过nylon wool柱，不结合nylon wool柱的细胞为T淋巴细胞，从而将T淋巴细胞分离出来，然后再用流式细胞仪分析;经不锈钢滤网过滤的脾细胞用小鼠抗大鼠CD3 单克隆抗体，再在用抗小鼠IgG抗体包被的板上孵育，CD3+ 的细胞被除去，非结合细胞为B淋巴细胞，用流式细胞仪分析.④抗体形成细胞（AFC）试验［4］ :不同浓度的脾细胞与20μmol・mL-1 的绵羊红细胞、25μL豚鼠补体混合，再用含100μmol・mL-1 胎牛血清的RPMI1640将液体总量加到150μL，37℃培养45min，然后记数抗体形成细胞.⑤抗CD3 抗体诱导的T细胞的增殖试验:在96孔板中加入含2×105 个细胞的培养液0.2mL，一组加入5μg・mL
-1 的抗CD3 抗体，另一组不加，37℃培养3d后掺入3 H（0.5μCi/孔），测定.
2 结果
2.1 长期吸烟对抗体形成细胞反应的影响 3，9mo后，与对照组相比，吸烟大鼠脾细胞的T，B淋巴细胞所占比例无明显差异.经绵羊红细胞免疫4d后，对两组大鼠的抗体形成细胞反应进行了测定，结果表明9mo时吸烟组大鼠对绵羊红细胞的抗体形成细胞反应较对照组显著降低（P&<0.05），而3mo时两组之间无显著性差异（Fig1）.这表明，长期吸烟可以抑制抗体形成细胞的反应而且不会发生淋巴细胞亚群的改变，而短期则无明显影响. 图1 略
2.2 吸烟对TCR介导的T细胞增殖的影响 有研究表明，长期吸烟可以减低T细胞对其有丝分裂原的反应［5］ .我们用抗CD3 抗体直接连接TCR，诱导T细胞的增殖，结果发现，吸烟9mo时的大鼠对抗CD3 抗体诱导的增殖反应较对照组显著性降低（P&<0.05），而3mo时吸烟组则无明显改变（Fig2）.与对照组相比，实验组动物临床表现基本正常，但大部分质量减轻，皮毛光泽变暗;病理检查发现，只有少数动物发现有肺部肿瘤的发生，未发生肿瘤的动物的病理改变主要表现为巨噬细胞浸润和局灶性炎症.
图2 略
3 讨论
有报道表明，长期吸烟可以降低机体的免疫力，而且很可能是同时抑制了体液和细胞免疫反应［6］ .作为烟草中的主要毒性成分，尼古丁可以导致T细胞的反应无能，而且很可能是与抗原介导的信号转导系统的损伤及细胞内Ca2+ 反应抑制相关［3］ .
从本研究结果看，吸烟早期（3mo）并不引起显著的免疫力降低，而长期吸烟不仅会导致体液的，而且会导致细胞免疫的损伤，说明免疫力的降低是一个损伤逐渐积累的过程.吸烟若能在早期及时戒烟，对机体免疫力的损伤是不会很大的.长期吸烟并不引起淋巴细胞数量和比例的改变，这说明吸烟引起的免疫抑制并不是由于淋巴细胞数量和比例的改变引起的，而是T、B淋巴细胞的功能障碍.长期吸烟者的T细胞在接受了外源性抗原刺激后，并不能够被有效激活、增殖和分化，细胞免疫受到损伤，也使得它不能有效地辅助B细胞进行增殖和分化，这很可能是体液免疫降低的一个重要原因.作为烟草中的主要毒性成分，尼古丁可以导致T细胞的反应无能，而且很可能是与抗原介导的信号转导系统的损伤及细胞内Ca2+ 反应抑制相关［3］ .
蛋白磷酸化是细胞调节过程中一个主要的作用方式.抗原刺激T细胞后，蛋白酪氨酸激酶被活化，这就会通过酪氨酸依赖的机制激活磷脂酶C-γ1（PLC-γ1）及产生IP3［7］ .而IP3是人们所熟知的引起细胞内Ca2+ 迅速、持久上升的重要介质.IP3的产生和细胞内Ca2+ 的蓄积是T细胞发挥其功能的基本条件，因而，长期吸烟所引起的T细胞的功能障碍很可能是由IP3产生或Ca2+ 蓄积障碍所引起的信号转导途径受损引起的.
参考文献
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