作者：王宝燕，张建耕，刘淑会，朱红梅，王保平，魏省禄
【关键词】 淋巴细胞
【Abstract】 AIM: To explore the effects of ultraviolet irradiation on the function of lymphocytes in banked blood. METHODS: Changes of lymphocyte subgroups， lymphocyte activity， lymphocyte transformation， interleukin2 and its receptor were tested before and after ultraviolet irradiation， and after storage for 72 h separately. RESULTS: Ultraviolet irradiation inhibited the lymphocyte activity. As compared with that of the control group， the content of interleukin2 decreased significantly with prolonged storage time（P&<0.05）. Ultraviolet irradiation markedly inhibited the lymphocytes transformation（P&<0.01）. CD3+， CD4+ and CD8+ lymphocyte subgroups in banked blood decreased as compared with those of prestorage in the two groups，but there was no significant difference between the two groups. CONCLUSION: Ultraviolet irradiation can inhibit lymphocytes activity and lymphocytes transformation and reduce the accumulation of cytokine in banked blood.
【Keywords】 ultraviolet rays; blood preservation; lymphocytes
【摘要】 目的： 研究紫外线照射对储存血中淋巴细胞功能的影响. 方法： 在血标本经紫外线照射前后及储存72 h后测定淋巴细胞亚群及活性、细胞因子. 结果： 紫外线照射储存血可抑制淋巴细胞的活性. 照射后随储存时间的延长，血液中IL2水平与对照组相比明显降低（P&<0.05）；经紫外线照射后淋巴细胞转化率较对照组明显降低（P&<0.01）；对照组与照射组血液在放置72 h后CD3+，CD4+，CD8+细胞亚群均有明显下降，但无显著差异. 结论： 紫外线照射储存血可抑制淋巴细胞的活性，对淋巴细胞的增殖能力有明显抑制作用；可减少细胞因子的产生和积累.
【关键词】 紫外线；血液保存；淋巴细胞
0引言
输入含有免疫活性淋巴细胞的血液成分是导致输血相关性移植物抗宿主病（TAGVHD）、血小板输注无效及非溶血性发热输血反应（NHFTR）的主要原因［1-3］. 如何提高输血质量，减少输血不良反应，保证输血安全是当今研究热点问题之一. 采用60Co和137Cs两种r射线源辐照血液是较为有效的方法，但价格昂贵，国内未能普及. 有报道［1-4］紫外线照射血液具有调节机体免疫功能的作用，可增加受血者免疫耐受性；紫外线照射可抑制淋巴细胞的增殖能力及对抗原刺激的敏感性，从而避免了白细胞污染所出现的副作用. 我们通过对储存血进行紫外线照射并观察血液中淋巴细胞亚群及其细胞因子的变化，进一步探讨紫外线照射血液在预防同种免疫、减少TAGVHD发生的安全可行性.
1材料和方法
1.1材料
DLX3254电脑全波紫外线血液辐射治疗仪（长春亚星光电科技公司）；一次性透紫外线血袋（长春亚星光电科技公司，透光率&>80%）；DG3022A型酶标仪；Olympus生物显微镜；淋巴细胞亚群检测试剂盒(福建三明日通生命科技公司)；人IL2及sIL2R定量检测试剂盒(比利时Biosource公司)；PHA（上海伊华临床医学科技公司）；RPMI1640培养粉（美国Tife Technologies公司）；特级小牛血清（杭州四季青生物科技公司）.
1.2方法
1.2.1分组取4℃冰箱保存的当日CPDA（枸橼酸盐磷酸盐葡萄糖腺嘌呤）抗凝全血32单位（1单位=200 mL），每单位全血等分为2份，分别作为照射组和对照组.
1.2.2紫外线照射取4℃冰箱保存当日的抗凝全血，在超净工作台内无菌操作导入一次性可透过紫外线的专用血袋内，在DLX3254电脑全波紫外线血液辐射治疗仪内照射8 min，紫外线波长范围为250 nm~365 nm，平均照射剂量为1.68 J/cm2. 照射完成后再导入原来的血袋内.
1.2.3淋巴细胞功能测定照射组血液标本于照射前、照射后当日及照射后72 h取样，并分别取对照组血样. 采用SP一步染色法检测淋巴细胞亚群，参照文献［5］的方法检测淋巴细胞活性，采用文献［6］的方法测定淋巴细胞转化率，ELISA法测定IL2及sIL2R的含量.
统计学处理： 数据以x±s表示，组间比较采用重复测量方差分析，转化率组间比较采用单因素方差分析.
2结果
2.1紫外线照射储存血前后对IL2及sIL2R的影响经紫外线照射后，血液中IL2和sIL2R水平与对照组相比明显降低（P&<0.05， Tab 1）.表1紫外线照射对储存血IL2及sIL2R的影响（略）
2.2紫外线照射对淋巴细胞存活率和转化率的影响紫外线照射后照射组血液中淋巴细胞转化率较对照组明显降低（P&<0.01， Tab 2）；两组间存活率的变化趋势相似(P&>0.05），血液在放置72 h后，血液中淋巴细胞存活率均较保存前下降6%~7%（P&<0.05）.表2紫外线照射对淋巴细胞存活率和转化率的影响（略）
2.3紫外线照射对储存血中淋巴细胞亚群的影响两组间CD3+，CD4+和CD8+的变化趋势相似(P&>0.05），在放置72 h后CD3+，CD4+和CD8+均有下降（P&<0.05）.表3紫外线照射对淋巴细胞亚群的影响（略）
输注的血液成分中，含有CD4+辅助性T淋巴细胞，因识别宿主表达的异源性主次要组织相容性抗原（MHC）而激活，进而分泌可溶性细胞因子如IL2，促使宿主抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞活化增殖，形成效应细胞，诱导GVHD的发生［7］. 紫外线照射可抑制T淋巴细胞、NK及LAK细胞的活性，减少细胞因子如IL2，IL6，TNF的产生和积累，从而有效地预防因T淋巴细胞分泌的细胞因子诱导的TAGVHD，非溶血性输血反应及血小板输注无效的发生［8， 9］. 我们的实验结果显示，对照组全血中IL2和sIL2R随保存时间延长在血液中含量增加， 紫外线照射后血液中IL2和sIL2R水平与对照组相比明显降低. 证明储存血在保存过程中细胞因子IL1，IL2，IL8不断产生和积累，而紫外线照射能有效减少其产生和积累，达到降低输血不良反应的目的.
紫外线照射引起细胞增殖反应受抑制，不是由于致死性损伤所致. 用台盼蓝拒染法检测淋巴细胞存活率表明，紫外线照射后细胞死亡无明显增加［1］. 我们的结果显示对照组和照射组间无差异，但放置72 h后，两组血液中淋巴细胞存活率均下降6%~7%，提示紫外线照射不会使淋巴细胞的死亡加速. 紫外线照射后淋巴细胞对PHA诱导的细胞增殖反应明显受抑制，表明淋巴细胞对PHA刺激引起的反应降低［1，4］. 我们的观察结果表明，紫外线照射后淋巴细胞转化率较对照组明显降低（P&<0.01），但照射后仍有部分淋巴细胞增殖，是否存在对紫外线不敏感细胞或紫外线剂量不足等原因有待进一步研究. 紫外线照射可通过干扰细胞表面配体的功能表达阻止正常细胞的活性，细胞表面分子表达研究证明，紫外线照射超过一定的阈值，人类HLADR表达衰退［1］，实验结果显示：两组血液保存后，CD3+，CD4+，CD8+T细胞均有明显下降，但两组间下降幅度无显著差异. 有文献［7，10］报道紫外线照射可促进T细胞的凋亡，减少T细胞亚型的抗原表达数量，通过对紫外线照射后24 h CD16+，CD56+细胞表面抗原表达数量的测定，显示明显减少，并证明淋巴细胞对紫外线的剂量是依赖的，同时对NK细胞有明显的抑制作用，但本研究结果与此稍有差别.
【
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