作者：孙绪德 柴伟 马加海 徐礼鲜 杜洪印 杨永慧 赵晖
【关键词】 高氧液
关键词: 高氧液;再灌注损伤;丙二醛;超氧化物岐化酶;内皮素;一氧化氮
摘 要:目的 观察高氧液对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用. 方法 家兔36只随机分为非缺血对照组12只（A组），缺血再灌注常规治疗组12只（B组）及缺血再灌注高氧平衡盐液治疗组12只（C组）. 结果 与B组比较，C组心肌组织MDA含量、ET水平明显下降（P&<0.01），心肌组织内T-SOD活性及血清NO水平显著提高（P&<0.01），心肌组织超微结构损伤程度明显减轻. 结论 高氧平衡盐液可明显减轻家兔在体心肌缺血再灌注损伤.
Keywords:hyperoxic liquid;reperfusion injury;malondi-aldyde;superoxide dismutase;endothelin;nitric oxide
Abstract:AIM To observe the protective effects of hyper-oxic liquid on myocardial ischemia-reperfusion injury in rab┐bits.METHODS Thirty-six rabbits were randomly pidedinto three groups:group A undergoing all procedures except ischemia-reperfusion and treatment，group B receiving the routine treatment after ischemia-reperfusion，and group C re-ceiving the routine treatment infusion of hyperoxic liquid10mL・kg-1 after ischemia-reperfusion.RESULTS Group C showed a significant reduction in myocardial MDA contents and plasma ET level（P&<0.01），but an increase in myocar-dial T-SOD activity and serum NO level（P&<0.01），and a significant mitigation in myocardial ultrastructural injury in comparision with group B.CONCLUSION Hyperoxic liquid can reduce myocardial ischemia and reperfusion injury in rab-bits.
0 引言
心肌缺血性疾病是常见病、多发病，是威胁人类健康的主要疾病之一.近年来研究表明，钙超载和自由基是心肌缺血再灌注损伤的重要机制［1-4］ ，因此针对性地对Ca2+ 拮抗剂和自由基清除剂进行了多方面的研究，取得了一定的效果.但引起心肌早期损害的直接因素是缺氧，如通过液体途径给缺血心肌供氧，可能减轻缺血心肌的坏死程度，延长心肌的生存能力而产生一定的治疗作用.用家兔心肌缺血再灌注模型，观察最新研制的高氧液体对心肌的保护作用，并探讨与自由基的关系，为临床应用提供理论依据.
1 材料和方法
1.1 材料 家兔由本校实验动物中心提供，高氧液用西安高氧医疗设备有限公司研制的“高氧医用液体治疗仪”制备，用量子化溶氧机制以临床常用液体（50g・L-1 葡萄糖，生理盐水或平衡盐液等）为载体，溶O2 后可使PO2 由150mmHg上升到750～975mmHg和含O3 （10～20mg・L-1 ）的高氧液体.超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒购自北京北方生物技术研究所;丙二醛（MDA）试剂盒购自南京建成生物工程研究所;内皮素（ET）放免盒购自中国人民解放军总医院，一氧化氮（NO）试剂盒购自军事医学科学院.
1.2 实验方法 健康家兔36只，雌雄不拘，体质量2.0～3.5kg，实验前禁食12h，30g・L-1 的戊巴比妥钠30mg・kg-1 耳静脉麻醉，气管切开并插管.以家兔开胸冠状动脉左室支结扎/放开为制造心肌缺血再灌注模型
［5］ .将实验动物随机分为3组:（A组）非缺血对照组:完成全部操作，只穿线不结扎冠状动脉，观察90min;（B组）缺血再灌注常规治疗组:缺血60min，再灌注90min，用生理盐水10mL・kg-1 静脉滴注，于左室支动脉结扎前10min静滴1/3量，再灌注时静滴2/3量;（C组）高氧液治疗组:按B的方法将生理盐水改为高氧液.
1.3 观察指标和测定方法 实验结束时取冠状窦血4mL，2mL血立即分离血清，置-30℃保存以备集中检测NO，另2mL血加入含EDTA和抑肽酶的试管中，尽快在4℃3000r・min-1 离心10min，取血浆置-30℃冰箱保存待测ET，具体测定步骤按放免试剂盒说明操作;实验结束后立即取左室壁心肌组织用4℃冷生理盐水洗去血迹，制成2mm×2mm×5mm的心肌组织块，用25mg・L-1 戊二醛固定作电镜标本，用透射电镜观察心肌细胞结构;余下心肌置液氮中保存待测MDA及T-SOD，其测定步骤按试剂盒说明书进行.
统计学处理:实验结果用x ±s表示，组间均数比较用t检验，多个样本均数比较用单因素方差分析，均数间两两比较用t检验.
2 结果
2.1 三组心肌组织MDA含量及T┐SOD活性的变化 由Tab1可见，B组MDA含量明显高于A组（P&<0.01），T-SOD活性明显低于A组（P&<0.05），C组与A组比较，各指标无显著性差异，与B组比较，C组MDA含量明显下降（P&<0.01），SOD活性明显增加（P&<0.01）.
表1 高氧液对缺血再灌注心肌MDA，SOD，ET，NO的影响 略
2.3 三组动物心肌组织超微结构的变化 A组:心肌细胞超微结构正常（Fig1A，B）.B组:心肌细胞坏死，胶原纤维增生，肌纤维断裂、坏死、溶解，肌浆网扩张，线粒体肿胀、嵴排列紊乱（Fig2A），细胞核溶解，染色质部分降解、消失，核膜大部分溶解消失（Fig2B），C组:肌丝排列基本整齐、规则，线粒体基本完整、嵴清晰，少数线粒体肿胀，基质透亮（Fig3A），部分肌膜下水肿，肌丝轻度溶解（Fig3B）.
3 讨论
目前已知自由基介导的脂质过氧化反应是心肌缺血再灌注损伤的重要环节［1］ .心肌缺血再灌注后，尤其是再灌注期，机体通过多种途径产生多种自由基［5］ ，自由基对细胞的损害在于攻击细胞膜脂质产生过氧化反应，因此测定心肌内MDA含量，可反映脂质过氧化程度;体内自由基的清除依靠SOD等抗氧化酶系统，因此测定SOD活性可反映心肌内抗脂质过氧化能力.本实验结果显示，心肌缺血再灌注后MDA含量明显增加，SOD活性明显降低，心肌超微结构损伤明显，说明兔心肌缺血再灌注后，脂质过氧化反应增强，自身抗氧化能力减弱.应用高氧液治疗后，MDA含量明显下降，SOD活性显著增加，心肌超微结构损伤明显减轻，提示高氧液能抑制脂质过氧化反应，保护抗氧化酶活力，保护线粒体结构，减轻心肌缺血再灌注损伤.
ET是由内皮细胞产生的一种作用强烈而持久的血管收缩肽，其过量释放可引起心肌挛缩、冠脉痉挛、心肌缺血坏死，加重心肌缺血再灌注损伤［6］ .本研究证实缺血缺氧是ET大量释放的最主要因素之一［7］ .NO是由内皮细胞释放的一种舒血管因子，持续基础的NO释放对维持心血管系统稳定的舒张状态、调节冠脉基础张力、保持心肌血流灌注等有重要作用［8］ .本实验观察到心肌缺血再灌注后，血浆ET水平明显升高，血清NO水平显著下降，用高氧液治疗后可降低兔心肌缺血再灌注时血浆ET水平，提高血清NO水平，从而减轻ET对血管和心肌组织的损伤作用，保护心肌免受缺血再灌注损伤.
图1 － 图3 略
其机制可能与应用高氧液能给缺血心肌提供较充分的O2 及高氧中O3 能降低血液粘度，提高红细胞变形能力，在单位时间里给缺血心肌提供更多的氧，使心肌缺血细胞损伤减轻，从而产生明显的保护作用，在临床上具有广泛的应用前景.
参考文献
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