作者： 张晓华，魏晓丽，惠起源，高子芬
【关键词】 ，，NK/T细胞淋巴瘤
【关键词】 NK/T细胞淋巴瘤;诊断;分类;免疫表型
1对象和方法
1.1对象
型NK/T细胞淋巴瘤石蜡组织20例选自延安大学医学院和北京医科大学病理学系的外检档案及会诊材料，所有标本经40 g/L甲醛固定，石蜡包埋，HE染色及免疫组织化学染色，结合临床表现及组织病理形态特征，诊断为鼻型NK/T细胞淋巴瘤.
1.2方法
1.2.1免疫组织化学染色方法采用链霉素生物素过氧化物酶连接法（streptavidian biotin complex method， SABC法），在石蜡包埋组织4 μm切片上，检测肿瘤细胞CD20， CD3ε， CD45RO和CD56，确定其免疫表型；检测TIA1和GranzymeB，确定细胞毒颗粒相关蛋白的表达. 抗体的浓度及抗原修复方法略. 阳性对照为已经确定的阳性病例，阴性对照为以TBS缓冲液取代一抗.
1.2.2原位杂交方法用质粒RA386制作出EB病毒编码的小核RNA（EBER）寡核苷酸探针，得出最适RNA探针浓度为1∶100，后在石蜡切片上做原位杂交，用桥接碱性磷酸酶（AP）标记的抗体（1∶500，Boeh公司），最后以五溴四氯三吲哚磷酸脂/硝基四氮唑蓝（BCIP/NBT）为底物避光显色，光镜观察结果. 阳性对照为以前的阳性病例，阴性对照不加探针.
1.2.3结果判定免疫组织化学阳性信号为肿瘤细胞的胞质/胞膜内有棕黄色的颗粒；原位杂交的阳性信号为细胞核内呈现蓝色的细颗粒.
2结果
2.1免疫表型检测结果20例鼻型NK/TCL病例中，T细胞标记物CD45RO染色为位于细胞膜上的棕黄色颗粒，阳性率为90%；B细胞标记物CD20均为阴性；大部分病例为胞质CD3（CD3ε）阳性，棕黄色颗粒位于细胞质内，阳性率为17/20（85%）；部分病例为NK细胞标记物CD56阳性，棕黄色颗粒位于细胞膜上，阳性率为13/20（65%）； 细胞毒性标记物TIA和GranzymeB阳性均为棕黄色颗粒，位于细胞质内，阳性率分别为17/20（85%）、14/20（70%），TIA的阳性率高于GranzymeB.
3讨论
鼻型NK/T细胞淋巴瘤（NK/TCL）不典型的临床症状及复杂的组织细胞形态给临床病理诊断带来了一定的困难，但现代分子生物学技术发展弥补了临床病理诊断的不足［1，2］. 本研究用多种抗体检测病理切片，CD3ε，CD45RO，CD56，TIA1和GranzymeB较高的阳性率给NK/TCL的确诊提供了依据. EBER作为一个高度敏感的EBV标记物［3］，在遇到疑难病例时很有帮助. 但在诊断中需要注意CD56阳性的意义，簇状CD56阳性表达提示NK/TCL［4］，正常或反映性病变中不会出现簇状CD56阳性表达. 而且CD56抗体在实践操作中的阳性率并不是很高，本次实验病例的阳性率仅为65%. 同时发现其他抗体如CD3ε，CD45RO，TIA1和GranzymeB在实际操作中常与理论结果有一些误差，因此在日常病理诊断中选择上述一组抗体作为诊断参数是非常重要的.
参考文献
［1］ Chan JKC，Jaffe ES，Ralfkiaer E. Extranodal NK/T cell lymphoma， nasal type［A］. In: Jaffe ES， Vardiman JW. Pathology and genetics of tumors of haematopoietic and lymphoid tissues［M］. Lyon: International Agency for Research on Cancer (IARC) Press， 2001; pp:204-407.
［2］ Chan AB， Chan WY， Chow JH. Cytologic features of NK/Tcell lymphoma［J］. Acta Cytol， 2003;47(4):595-601.
［3］ Peh SC， Quen QW. Nasal and nasaltype natural killer (NK)/Tcell lymphoma: Immunophenotype and EpsteinBarr virus (EBV) association［J］. Med J Malaysia， 2003;58(2):196-204.
［4］ Bekkenk MW， Jansen PM， Meijer CJ， et al. CD56+ hematological neoplasms presenting in the skin: A retrospective analysis of 23 new cases and 130 cases from the literature［J］. Ann Oncol， 2004;15(7):1097-1108.