针刺治疗痛经的免疫机制分析

　　　　　　 作者：王黎 鞠琰莉 邝枣园 唐纯志

【摘要】 【目的】观察针刺对实验性痛经大鼠胸腺、脾脏和T淋巴细胞亚群CD3、CD4、CD8的影响。【方法】SD大鼠30只，随机分为正常对照组、模型组和电针组，除正常对照组外，其他组均采用己烯雌酚和催产素复制痛经模型，电针组同时予以电针双侧三阴交、关元穴治疗，10?d后观察各组大鼠的扭体反应情况和免疫器官胸腺、脾脏的病理变化，检测大鼠全血CD3、CD4、CD8水平。【结果】模型大鼠的扭体发生率为100%，胸腺和脾脏均发生了明显的病理变化，CD3、CD4水平与正常对照组比较具有显著性差异（P＜001），存在明显的免疫功能低下。电针组的扭体发生率为80%，与模型组比较有显著性差异（P＜001），胸腺和脾脏的病理变化较模型组有一定的改善，CD3、CD4水平与模型组比较有显著性差异（P＜001）。【结论】电针治疗原发性痛经的疗效，除直接止痛或缓解疼痛外，还与其一定程度上拮抗原发性痛经的免疫功能低下有关。
【关键词】 痛经/针刺疗法；痛经/免疫学；痛经/病理学；疾病模型，动物；大鼠
　　
　　【Objective】To observe the effect of acupuncture on immune organs (thymus and spleen) and T lymphocyte subtypes of CD3， CD4 and CD8 in rats with dysmenorrhea
　　【Methods】Thirty SD rats were randomized into normal control group， model group and electroacupunture (EA) group. Except the normal control group， rats in other groups received intraperitoneal injection of diethylstilbestrol and oxytocin to induce dysmenorrhea. EA group received EA on bilateral acupoints of Sanyinjiao and Guanyuan additionally. After 10day treatment， bodystretching rate， the pathological changes of thymus and spleen， and blood CD3， CD4 and CD8 levels in the three groups were observed.
　　
　　【Results】In the model group， bodystretching rate was 100%， the pathological changes of thymus and spleen were obvious， and blood CD3 and CD4 levels were decreased as compared with the normal control group (Ｐ＜001)， indicating the immunosuppression in the model group. In EA group， bodystretching rate was 80%， the pathological changes of thymus and spleen were improved， and blood CD3 and CD4 levels were increased as compared with the model group (Ｐ＜001).
　　
　　【Conclusion】The mechanism of EA for primary dysmenorrhea is probably also related to the counteraction of immunosuppression besides its analgesic effect.
　　Key words：DYSMENORRHEA/acupuncture therapy;DYSMENORRHEA/immunology;DYSMENORRHEA/pathology;DISEASE MODELS， ANIMAL;RATS
　　针灸治疗痛经是一种非常有效的治疗方法，特别是治疗原发性痛经的效果明显优于继发性痛经［1］。目前对原发性痛经（primary dysmenorrhea，PD）的发病主要认为与前列腺素、催产素有关［2］。而针刺在治疗慢性炎症痛、癌症痛或手术创伤痛时，不仅表现出明显的镇痛作用，而且可同时改善机体的免疫功能紊乱状态［３］。本研究采用己烯雌酚和催产素复制PD模型，观察痛经大鼠的扭体反应情况，并观察了胸腺、脾脏和大鼠T细胞亚群水平的变化，以及针刺对痛经大鼠免疫功能的影响，现报道如下。
　　1材料与方法
　　11动物健康成年雌性清洁级SpragueDawleg(SD)大鼠（2～3月龄，体质量200～250?g）30只，由广州中医药大学实验动物中心提供（合格证号：0009119）。本实验于广州中医药大学动物实验中心清洁级动物实验室完成。
　　12试剂与仪器己烯雌酚注射液为上海通用药业有限公司产品，批号050101；催产素为上海禾丰制药有限公司产品，批号：H31020850；流式细胞仪检测CD3（MR5104）、CD4（MR5206）、CD8（MR5301）单克隆抗体和溶血素均为Caltang Laboratories产品；G6805型电针治疗仪（上海）；针具为“华佗牌”一次性针灸针，26号1寸针。
　　13造模及分组模型复制参照文献方法并加以改进［4］。将30只大鼠按体质量随机分为正常对照组、模型组、电针组，每组10只。模型组和电针组大鼠于股部皮下注射己烯雌酚连续10?d，1次/d，第1天08?mg/只，第2～9天04?mg/只，第10天08?mg/只；第11天腹腔注射催产素2?U/只。正常对照组大鼠于股部皮下注射生理盐水连续10?d，1次/d，第1天08?mL/只，第2～9天04?mL/只，第10天08?mL/只；第11天腹腔注射生理盐水02?mL/只。
　　14治疗电针组大鼠从造模第1天开始，同时予以针刺治疗，1次/d，连续10?d。每次电针双侧三阴交、关元穴，并用电针治疗仪施以密波，频率为50?次/s，刺激强度以穴位局部肌肉轻微抽搐而大鼠安静为宜，留针20?min。正常对照组和模型组不给予任何治疗。
　　15观察指标
　　151大鼠扭体反应第11天观察记录30?min内大鼠扭体反应发生的次数。
　　152大鼠全血CD3、CD4、CD8表达检测从大鼠眼球迅速取血，乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝，取抗凝血50?μL分别加入10?μL?CD3、CD4、CD8单克隆抗体，暗箱孵育20?min，取2?mL溶血素加入上述各管，作用10?min后，以磷酸盐缓冲液（PBS）洗细胞1次，PBS重悬细胞后采用流式细胞仪检测荧光百分比。
广州中医药大学学报2007年第24卷第3期王黎，等.针刺治疗痛经的免疫机制研究153病理检查取胸腺、脾脏置于体积分数为10%福尔马林中浸泡，常规病理观察。
　　16统计学分析数据以SPSS?115统计软件分析，采用One Way ANOV分析继以StudentNewmankeuls检验，方差齐性检验水平α1=005，显著性检验水平α2=005。

　　2结果
　　21针刺对痛经模型大鼠子宫收缩的影响用药后30?min内，针刺组大鼠每分钟扭体反应次数较模型组显著性下降（P＜001），正常对照组大鼠未出现扭体反应。结果见表1。
　　21针刺对痛经模型大鼠全血CD3、CD4、CD8表达的影响表2结果显示，模型组大鼠全血CD3、CD4水平显著性下降（P＜001)，而针刺治疗可显著性升高CD3、CD4水平（P＜001），两组CD8水平与正常对照组比较无显著性差异（P＞005）。
　　23针刺对痛经大鼠胸腺、脾脏病理变化的影响
　　231大体观察模型组和针刺组的胸腺、脾脏的体积均明显小于正常对照组，其中以模型组更显著。
　　表1针刺对痛经模型大鼠扭体反应的影响　略
　　表2针刺对痛经大鼠全血CD3、CD4、CD8表达的影响　略
　　图1各组大鼠胸腺、脾脏病理学检查结果比较(略)
　　3讨论
　　已有的研究成果主要从内分泌、机械、精神等角度，特别是内分泌角度阐述原发性痛经发病机制［5-6］，而近年来内分泌免疫调节系统的影响颇受研究者的注目，如通过对原发性痛经患者外周血T淋巴细胞亚群的研究发现原发性痛经患者存在免疫功能低下［3］；神经内分泌系统和免疫系统之间有相互关联，雌激素影响免疫器官和细胞［7-8］。本实验中，模型大鼠的扭体发生率为100%，其在30?min内的每分钟扭体次数与正常对照组比较有显著性差异（P＜001）；免疫器官胸腺和脾脏发生了明显的病理变化，T淋巴细胞亚群CD3、CD4水平与正常对照组比较也有显著性差异（P＜001），表明己烯雌酚和催产素复制的痛经模型大鼠存在明显的免疫功能变化。电针组的扭体发生率为80%，其在30?min内的每分钟扭体次数与模型组比较有显著性差异（P＜001），电针组扭体发生的次数明显少于模型组；CD3、CD4水平与模型组比较也有显著性差异（P＜001），胸腺和脾脏的病理变化较模型组有一定的改善。表明针刺治疗原发性痛经的疗效，除了直接止痛或缓解疼痛外，还与它对免疫功能具有一定的调节作用有关，其确切机制有待进一步探讨。

参考文献

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　　［2］曹云霞．原发性痛经的发病机制及防治［Ｊ］．中国实用妇科与产科杂志，2001，17（4）：205．

　　［3］王瑞霞，俞超芹．原发性痛经患者外周血T淋巴细胞亚群的研究［Ｊ］．实用妇产科杂志，2004，7（24）：229．

　　［4］苗明三．实验动物和动物实验技术［M］．北京：中国医药出版社，1996：254．

　　［5］Dingfelder J R．Primary dysmenorrheal treatment with prostaglandin inhibitors：a review［J］．Am J Obstet Gynecol，1981，140（8）：874．

　　［6］Anne Rachel Davis M D，Carolyn L，Westhoff M D．Primary dysmenorrhea in adolescent girls and treatment with oral contraceptives［J］．J Pediatr Adolesc Gynecol，2000，14：3．

　　［7］Daynes R A，Arameo B A，Hennebold，et al．Steroids && regulators of the mammalian immune response［J］．J Invest Permatol，1995，105（1）：14．

　　［8］田野苹，于传霖．现代医学免疫学［M］．上海:上海医科大学出版社，1998：380．