白木香种子的超低温保存分析

【摘要】 目的】探讨白木香种子长期保存的方法。【方法】将不同含水量的白木香种子放置在液氮罐（-196℃)中保存55d后取出，测定其发芽率，并考察冷冻方法对其发芽率的影响。【结果】含水量为１６.３０％的种子发芽率完全丧失；含水量为１３.０２％、９.３４％的种子发芽率大大降低；而含水量为７.３５％的种子仍能保持较高的发芽率。速冷的白木香种子比缓冻的发芽率高。【结论】含水量为７.３５％的白木香种子置于液氮中保存为一种安全、有效的长期保存方法。
【关键词】 白木香 超低温保存 发芽率
　　白木香Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg.是我国特有的珍贵药用植物，其野生种质已遭到严重破坏，被列为国家二级重点保护野生植物［１］。白木香种子属顽拗性种子，正常含水量的种子常温条件下１个月后其发芽率下降至５０％以下，不利于保存。因此，探讨适合白木香种子长期保存的方法，对白木香种质资源的保护具有重要意义。国内学者对顽拗性种子的超低温保存已有报导［２-４］，前期研究结果也表明［５］，低温（４℃）有利于含水量为７.３５％的白木香种子的贮藏。本文对白木香种子进行超低温保存研究，以期寻找适合白木香种子长期保存的方法，现将结果报道如下。
　　1 材料与方法
　　1.1 材料
　　自白木香GAP基地（广东省电白县）采收果实，收集不同含水量的种子，密封，４℃冰箱放置20d后，分别测其含水量与发芽率。
　　1.2 仪器
　　Sartorius BP 110S 电子分析天平（德国）；电热恒温鼓风干燥箱GZX907OMBE（上海博讯实业有限公司医疗设备厂）；LRH250GS人工气候箱（广东省医疗器械厂）；不锈钢手提式压力蒸汽灭菌器（广州市华南医疗器械有限公司）；YJ875医用净化工作台（中国）；RO/DI50RE纯水机（中国）。
　　1.3 冷冻与解冻方法
　　将４种不同含水量的种子密封于冷冻管中，直接投入液氮中保存；另将含水量为７.３５％的种子密封于冷冻管中，先置4℃冰箱放置4h，再于-２０℃冰箱放置3h，最后投入液氮中保存。55d后取出，室温（３０℃）３３min解冻，分别测定其发芽率。
　　1.4 发芽率测定
　　在消毒过的培养皿上铺一层已消毒过的滤纸，加入少量纯净水，以滤纸湿润，加水量以倾斜时有少量水为宜。另将种子用蒸馏水反复冲洗多次，放置滤纸上，粒与粒间距不小于种子大?Ｊ匝橹肿臃殖桑醋椋孔椋玻傲！＝嘌蠓旁谌斯て蛳渲校ǎ玻浮妫刻旃鄄欤铀３质螅⒓锹挤⒀壳榭觯垂絧发芽/%＝（N发芽/N样本）×100%，计算发芽率。 2 结果
　　白木香种子于液氮中贮藏55d后，发芽率受含水量的影响较大，含水量为１６.３0％的种子发芽率完全丧失；含水量为１３.０２％、９.３４％的种子发芽率大大降低；含水量为７.３５％的种子仍能保持较高的发芽率（见表１）。冷冻方式研究结果表明，速冻的白木香种子比缓冻的发芽率要高。表1 超低温保存对白木香种子发芽率的影响统计方法：秩和检验；①：Ｐ＜０.０１，与超低温保存前比较；②：Ｐ＜０.０１，与前３种含水量比较；③：Ｐ＜０.０５，与缓冻比较
　　3 讨论
　　种子的超低温保存，含水量高低以及脱水方法是关键因素。含水量过高会造成保存材料在冷冻和解冻过程中受到冻害甚至死亡，过低又会造成脱水伤害影响活力。若能最大限度地减少脱水伤害和降低含水量，保存材料的活力就能得到最大限度的保持。本研究结果表明，含水量为７.３５％的白木香种子，超低温条件下保存55d后，较常温及低温（４℃)条件下保存３５d后，能保持较高的发芽率［5］，表明超低温（-１９６℃）利于白木香种子的长期保存，为白木香种质资源的长期保存提供了安全、有效的方法。

参考文献

［１］徐鸿华，蔡永光，徐祥浩．热带药用植物栽培［M］．广州：广东科技出版社，１９８６：１９２．

［２］李庆荣，郑郁善．顽拗性种子种质超低温保存研究进展［Ｊ］．江西农业大学学报，２００３，２５（４）：６０８．

［３］张治国，王君晖，刘 骅，等.铁皮石斛种子的超低温保存研究［Ｊ］．浙江省医学科学院学报，１９９６，７（２７）：７．

［４］张志娥，石思信，肖建平．野生人参种子超低温保存［Ｊ］．植物资源与环境，１９９８，７（４）：６１．

［５］刘军民，徐鸿华，徐梓勤，等．不同贮藏方法对白木香种子发芽率的影响［Ｊ］．广州中医药大学学报，２００６，２３（３）：２５３．