高血压血瘀证血管紧张素转换酶基因插入或缺失的多态性浅析

　　　　　　作者：骆杰伟 陈慧 吴小盈 林慧中 陈燕 李德育 沈晓丽 伍严安

【摘要】 【目的】探讨血管紧张素转换酶（ACE）基因插入或缺失（I/D)的多态性与原发性高血压血瘀证的关系。【方法】选择原发性高血压(EH) 血瘀证组100例、非血瘀证组120例和正常对照组100例，采用聚合酶链反应(PCR) 方法检测ACE基因I/D多态性。【结果】高血压血瘀证组的DD基因型及D等位基因频率(分别为0410和0590)高于高血压非血瘀证组(分别为0250和0467)和正常对照组(分别为0220和0455)(Ｐ＜００５或Ｐ＜００1)，高血压非血瘀证组与正常对照组比较无显著性差异(Ｐ＞００５)。【结论】ACE基因插入或缺失(I/D)多态性与血瘀证具有相关性，D等位基因可能是血瘀证的易感基因之一。
【关键词】 高血压/遗传学；血管紧张素转换酶；基因；血瘀/遗传学

　　
　　【Methods】The ACE gene type in 100 EH patients with BSS，120 EH patients with nonBSS and 100 healthy volunteers (control) was determined by polymerase chain reaction (PCR) assay.【Results】Incidences of DD genotype and D allele genotype of ACE gene were higher (0410 and 0590 respectively) in patients with BSS than those in patients with nonBSS (0250 and 0467) and those in the controls (0220 and 0455)，the difference being significant (P＜005 or P＜001).However，the differences between nonBSS group and the control were not significant (P＞005).
　　
　　【Conclusion】The I/D polymorphism of ACE gene has a relationship with BSS in EH patients，and D allele genotype of ACE gene may be the susceptible gene of EH patients with BSS.
　　Key words：HYPERTENSION/genetics；ANGIOTENSIN CONVERTING ENZYME;GENE；
　　肾素—血管紧张素系统(RAS)在原发性高血压(EH)发病中起着重要作用，而人类血管紧张素转换酶(ACE)基因定位于17q23，第16内含子中存在一段287?bp碱基对的Alu插入片段(insertion，I)和缺失片段(deletion，D)多态，其插入或缺失(I/D)多态性与EH间关系的结果尚不一致， 但这一多态性与EH并发症如脑梗死、冠心病等的相关研究近年颇受关注［１］。中医认为，久病入络，血瘀证的形成是EH发展中一种较重状态，本研究旨在探讨EH血瘀证的形成与ACE基因I/D多态性的关系。
　　1临床资料
　　11诊断标准（1）西医诊断标准［２］：按照2004年修订的中国高血压防治指南诊断标准，根据患者的病史、家族史、体格检查及实验室检查做诊断性评估，并排除继发性高血压。（2）中医证候学诊断［３］：参照《血瘀证诊断标准》（第二届全国活血化瘀研究学术会议1986年11月修订，广州）制订。此判断标准是以舌质紫暗，舌体瘀斑或瘀点，舌下脉络曲张瘀血，脉涩，脉结、代或无脉，固定性疼痛或绞痛，血管异常，血栓形成等8项为主要依据；以肢体麻木或偏瘫、精神狂躁等4项为其他依据；以血流动力学障碍、特异性新技术显示血管阻塞等7项为实验室依据来进行辨证诊断。
　　12一般资料(1)EH血瘀证组100例，其中男69例，女31例；年龄(599±832)岁；吸烟者31例，体质量指数（BMI）为2472±247；收缩压(165±1455)mmHg，舒张压(99±733)mmHg。(2)EH非血瘀证组120例，其中男78例，女42例；年龄(582±1026)岁。吸烟者26例，BMI为2399±368；收缩压(162±1565)mmHg，舒张压(98±960)mmHg。(3)正常对照组100例，男66例，女34例；年龄(568±1082)岁；吸烟者21例，BMI为2392±379；收缩压(122±1672)mmHg，舒张压(73±595)mmHg。家族中一级亲属无EH病史， 并排除糖尿病及其他心脑血管疾病。以上EH?2组均来源于2004年9月至2006年9月的门诊、住院患者，正常对照组来源于同期该院体检中心，受试人群均为福建籍汉族人。经统计学齐同性检验，各组的年龄、性别、吸烟人数、体质量指数、血脂、血糖等一般情况差异均无显著性意义，具有可比性。
　　2方法
　　21血压和血糖、血脂的检测所有受试对象均停服5个半衰期降压药(首次病例者除外)，于清晨卧位连续3?d测右上肢血压，取均值为该病人血压值，并检测血糖、血脂。
　　22ACE基因型检测取静脉血2?mL抽提DNA， DNA抽提试剂盒系基因公司的QIAGEN DNA全血抽提试剂盒。采用聚合酶链反应(PCR)方法。引物设计为：上游5CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT3，下游5GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT3［4］。引物合成由上海博亚生物工程有限公司完成。反应总体积为25?μL，EXTaq DNA聚合酶购自大连宝生物公司。采用eppendorf PCR仪进行扩增，设置预变性温度95?℃、5?min；95?℃、30?s；58?℃、30?s；72?℃、50?s；共30个循环，最后72?℃延伸5 min，反应产物在25?g/L的琼脂糖凝胶中电泳，DNA在溴化乙锭(EB)染色紫外灯下观察拍照。DNA对照品(marker)购自大连宝生物公司。
　　23统计学处理采用SPSS?120统计软件进行数据的统计分析。
　　3结果
　　31ACE基因型PCR扩增结果位于ACE基因第16内含子的I/D多态性，可扩增出两种长度片段，即490?bp的为插入(I)片段，190?bp的为缺失(D)片段。仅有490?bp为II型，仅有190?bp为DD型，两种均有的为ID型(见图１)。
　　323组间ACE基因及等位基因的频率分布比较从表1可见，高血压血瘀证组的DD基因型及D等位基因频率(分别为0410和0590)显著性高于高血压非血瘀证组(0250和0467)和正常对照组(0220和0455)(Ｐ＜００５或Ｐ＜００1)，高血压非血瘀证组DD基因型及D等位基因频率与正常对照组均无显著性差异(Ｐ＞００５)。M.Marker；3、7.ACE基因DD型(DD genotype)；4、6、8.ACE基因II型(II genotype)；1、2、5、9.ACE基因ID型(ID genotype)

　　图1ACE基因型PCR扩增电泳图　略
　　表1各组ACE基因型及等位基因频率比较　略
　　4讨论
　　ACE是RAS酶(或底物)级联关键酶之一，其ACE基因I/D多态性在心血管病等方面的研究受到普遍关注，目前大多学者研究认为EH与ACE基因I/D 多态性无关，从本研究结果看，非血瘀证高血压组的DD基因型及D等位基因频率与正常对照组间无显著性差异，也提示二者关系不密切。但结果同时显示，高血压血瘀证组的DD基因型和等位基因频率均显著性高于高血压非血瘀证组和正常对照组，说明ACE基因I/D多态性与血瘀证相关，并提示D等位基因可能是血瘀证的易感基因，这一结果与毛以林等［5］在冠心病患者中发现DD型ACE基因可能为冠心病血瘀证发病的易感基因的结果相似。在典型的血瘀证中，如高血压病的并发症心肌梗死、脑梗死等与ACE基因I/D 多态性研究较多，从Cambien等［6］最早认为ACE的DD 型基因是心肌梗死的潜在危险因素，随后有研究表明该基因多态性与冠心病、左室肥厚等有相关性［7－8］。Kario等［9］发现ACE的D等位基因频率在伴有脑梗死的高血压患者中明显高于对照组，本实验室［10］早期研究也发现有脑梗死EH患者的D等位基因频率（064）显著性高于无脑梗死的EH组(042)和对照组（045）。这提示ACE基因I/D 多态性可能参与EH并发脑梗死的发生发展过程。ACE基因多态性影响高血压血瘀证患者的机理可能是通过影响循环和局部 RAS系统的ACE活性来实现的。人体ACE不同的基因型与体内循环中ACE血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的水平有关。II型纯合子、ID型杂合子、DD型纯合子平均血浆ACE水平分别为299、393、494?μg/L(P＜001)［11］，进一步推测D等位基因的ACE 活性增高可促进AngⅡ的形成，缓激肽失活，促进血管收缩，刺激平滑肌细胞增生和细胞外基质增加，最后导致血栓形成。ACE基因多态性可能与EH血瘀证的形成有关，D等位基因可能为EH血瘀证的易感基因。
【参考文献】
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　　［2］中国高血压防治指南修订委员会.2004年中国高血压防治指南(实用本)［S］．中华心血管病杂志，2004，32(12)：1060.

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　　［11］Rigat B， Hubert C， AlhencGelas F，et al.An insertion/ deletion polymorphism in angiotensin converting enzyme gene accounting for half the variance of serum enzyme levels［J］.J Clin Invest，1990，86(4):1343.