【摘要】 【目的】观察扶正愈瘤饮的抗肿瘤作用。【方法】取昆明种小鼠右腋皮下注射S180瘤株复制移植性实体瘤模型后，将荷瘤鼠随机分为6组，即模型组，扶正愈瘤饮低、高剂量组（中药低、高剂量组，剂量分别为2.4、12.4 g/kg），顺铂组（剂量为8μg/d），顺珀+低、高剂量中药组，连续给药10d;观察各组抑瘤率及生命延长率。取培养的卵巢癌细胞株SKOV3随机分为4组，即模型组，中药高、低剂量组及顺铂组，加药培养48h后，采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测各组细胞凋亡情况。【结果】各给药组均可不同程度抑制荷瘤鼠的肿瘤生长，其中顺珀组与顺珀+中药组均可显著性降低瘤体质量（P＜0.05或P＜0.01），各中药组及中药与顺铂合用组均可显著性增加体质量（P＜0.05或P＜0.01）。中药与顺铂合用组均可增加荷瘤鼠存活时间（P＜0.05），提高生命延长率。低、高剂量中药组均可诱导SKOV3细胞凋亡（P＜0.05）。【结论】扶正愈瘤饮的抗肿瘤作用可能与其能诱导肿瘤细胞凋亡有关，与化疗药顺珀合用具有一定的协同增效作用。
【关键词】 扶正愈瘤饮/药理学； 卵巢肿瘤/中药疗法； 细胞凋亡； 细胞培养； 疾病模型，动物； 小鼠
近年来，卵巢癌的治疗效果有了明显提高，肿瘤治疗观念也在变化。不仅注重致病因素，更注重机体的反应性。这种新的治疗观念为中医药抗瘤研究提供了机遇。扶正愈瘤饮是临床经验用方，辅助恶性肿瘤手术、放化疗，使病人治疗期间的耐受性提高，生活质量明显改善。本实验通过动物模型观察扶正愈瘤饮的抗肿瘤作用。现报道如下。
1 材料和方法
1.1 动物和分组 雌性昆明种小鼠153只，体质量（21±2）g，鼠龄8周。全部实验室饲养24h后，以S180瘤株0.2mL小鼠右腋皮下注射，复制移植性实体瘤的荷瘤鼠。第1部分45只，随机分为6组；第2部分108只，随机分为6组，每组18只。两部分均设模型组，扶正愈瘤饮低、高剂量组（中药低、高剂量组），顺铂组，顺铂+低剂量中药组，顺铂+高剂量中药组，除顺铂腹腔给药外，其他均灌胃给药，连续10d。第1部分灌胃10d结束后处死取材进行抗肿瘤实验；第2部分灌胃10d结束后不处死，继续饲养用于生命延长试验。
1.2 扶正愈瘤饮的制备 扶正愈瘤饮由海马、蛤蚧、生水蛭、熟地、紫河车、何首乌、制半夏、黄芪等10多种药物组成。按处方比例称取中药材，由黑龙江中医药大学第一附属医院制剂室煎制，按人鼠体质量比换算后，低剂量、高剂量扶正愈瘤饮分别以2.4、12.4g/kg剂量灌胃。
1.3 主要试剂 RPMI-1640培养液、四甲基偶氮唑盐（MTT）试剂盒、刀豆素A（ConA）、脂多糖（LPS）均为Sigma公司产品；酶联免疫吸附（ELISA）法试剂盒为Lifekey公司产品。
1.4 检测指标
1.4.1 瘤质量及抑瘤率 将第1部分小鼠处死后剥离瘤组织称质量，计算各组瘤质量均值，按下列公式计算抑瘤率［1］：p抑瘤=［（m模型组-m给药组）/m给药组］×100%
1.4.2 生命延长率 第2部分给药结束后常规饲养，观察小鼠一般情况和存活时间，按以下公式计算生命延长率［2］：p生命延长=［t存活，给药组-t存活，模型组）/t存活，给药组］×100%
1.4.3 细胞凋亡检测 取出培养的卵巢癌细胞株SKOV3（购于中国科学院上海细胞生物所细胞库），以2.0×105个/mL的密度接种于96个孔板，每孔1.0mL，随机分为4组：模型组、中药高剂量组、中药低剂量组、顺铂组，顺铂的浓度为20μg/mL，培养24h后更换含各组药物的培养基，培养48h后采用ELISA法测定450nm处的吸光度（D）值，凋亡细胞越多，D值越高。细胞凋亡情况用富集系数（enrichment factor，IEF）表示：IEF=（D实验组-D本底）/D阴性对照组。其中本底指细胞裂解液，配制方法见
参考文献
［3］，阴性对照由试剂盒提供。将培养细胞制成单细胞悬液，取100μL细胞悬液，加入4.0μL染液，轻轻打匀后，取细胞悬液1滴滴在洁净的玻片上，加盖玻片后立即置荧光显微镜下观察。计数200个细胞，计算细胞凋亡率：p凋亡=（n凋亡细胞/n总细胞）×100%1.5 统计学处理 采用SPSS 11.0软件包进行。
2 结果
2.1 中药对S180实体瘤荷瘤小鼠的抑瘤作用 表1结果表明，各给药组均可不同程度抑制荷瘤鼠的肿瘤生长，其中顺铂组、顺铂+低、高剂量中药组的瘤体质量与模型组比较具有显著性差异（P＜0.05或P＜0.01）；各给药组与单用顺铂组比较，给药后体质量均增加（P＜0.05或P＜0.01），表明扶正愈瘤饮除具抑瘤作用外，还可增加荷瘤鼠体质量。
2.2 中药对S180实体瘤荷瘤鼠的生命延长作用 表2结果显示，顺铂+低、高剂量中药组小鼠平均存活时间显著性高于模型组（P＜0.05），而与单用顺铂组比较无显著性差异（P＞0.05）。
2.3 中药诱导的细胞凋亡 表3结果显示，各给药组均可不同程度地诱导SKOV3细胞凋亡（P＜0.05或P＜0.01），其中以顺铂组作用更显著。
表1 中药对S180实体瘤荷瘤鼠肿瘤生长的抑制作用（略）
Table 1 Effect of FYT on tumor growth in S180-implanted mice
统计方法：单因素方差分析；①P＜0.05，②P＜0.01，与模型组比较；③P＜0.05，④P＜0.01，与顺铂组比较
表2 中药对S180荷瘤鼠的生命延长作用（略）
Table 2 Effect of FYT on life span of S180-implanted mice
统计方法：单因素方差分析；①P＜0.05，与模型组比较
表3 各组诱导SKOV3细胞凋亡情况比较（略）
Table 3 Comparison of SKOV3 apoptosis in various groups
统计方法：方差分析；①P＜0.05，②P＜0.01，与模型组比较
3 讨论
目前，有效的西医抗肿瘤药物已达几十种，尤其在妇科肿瘤治疗中作用越来越大。但由于药物的副作用大、并发症多、病人难以耐受等缺点，其应用受到限制。诸多研究表明中医药也有确切的抗肿瘤活性，与抗肿瘤药物配伍，可使病人耐受性提高，康复时间缩短，生存质量提高［4-6］。用扶正愈瘤饮作为生物应答调节剂（BRM）治疗S180荷瘤鼠，结果表明实体瘤生长明显延缓，且此作用有随药物剂量增加而增强的趋势。
扶正愈瘤饮各成分都具有抗肿瘤、免疫调节及补血滋阴、益气养血、补益升阳等作用。其中黄芪为临床上最常用的补气药，不但可提高机体免疫力，减轻放化疗后造血功能的抑制和造血微环境的破坏，同时还可以增强环磷酰胺的抗肿瘤活性。动物实验证明黄芪加环磷酰胺合用组与单用环磷酰胺组比，其荷瘤小鼠的平均生存时间明显延长，平均瘤质量明显降低［7］。黄芪多糖（APS）对小鼠S180、h32移植瘤裸小鼠、人的ANIP973、人HC腹水型移植瘤均有明显的抑制作用，对小鼠实体瘤B16、Lewis肺癌有效，且发现APS无毒性、无副作用，并且不使荷瘤小鼠体质量、脾质量减轻［8］。动物实验显示［9-11］：蛤蚧提取物在抗应激、免疫调节、抗肿瘤作用等方面有较明显的功效。研究表明［12］水蛭具有一定抑瘤作用。
本文结果显示，顺铂+中药低、高剂量组抑瘤率高于单用顺铂组，但无显著性差异（P＞0.05）。提示扶正愈瘤饮具有一定的抑瘤作用，且此作用有随药物剂量增加而增强的趋势，与顺铂合用可达到增效作用。 转贴于 凋亡与肿瘤发生有着密切关系，促进凋亡是一种新的肿瘤治疗方法［13］。本实验结果显示卵巢癌细胞株SKOV3可由扶正愈瘤饮、顺铂诱导后产生凋亡，不同剂量的扶正愈瘤饮诱导的卵巢癌细胞凋亡率与模型组比较均有显著性差异（P＜0.05），且呈剂量依赖性。
灌胃给药后，单用顺铂组小鼠受化疗药的毒副作用影响，体质量下降，体毛蓬松稀疏无光泽，行动迟缓，呼吸急促，是顺铂导致小鼠消耗的结果（瘤质量增加小于体质量消耗）。其他组均表现为不同程度的体质量增加，体毛顺滑有光泽，同时，也改善了身体的一般状况。而且扶正愈瘤饮+顺铂各组小鼠平均存活时间显著性高于模型组（P＜0.05），与顺铂组比较无显著性差异（P＞0.05）。
综上所述，本研究结果表明扶正愈瘤饮具有一定的抗肿瘤作用，可用于临床细胞毒药物化疗的辅助用药，协同发挥杀伤癌细胞的作用。
【参考文献】
［1］曹舫，赵宝华，廖子君，等.脑瘤清胶囊对S180荷肉瘤小鼠的抗肿瘤作用［J］.陕西肿瘤医学，2002，10（1）：6.
［2］Anthony V C，Minglin L，Ezhou L，et al.Concurrent pregnancy retards mammary involution:effects on apoptosis and proliferation of the mammary epithelium after forced weaning of mice［J］.Anal Bioanal Chem，2002，66:1471.
［3］温进坤，韩梅.医学分子生物学原理与实验技术［M］.上海：上海科学普及出版社，1999：238.
［4］单保恩，李巧霞，梁文杰，等.中药五加皮抗肿瘤作用体内外实验研究［J］.中国中西医结合杂志，2004，24（1）：55.
［5］贺兴东，钟赣生.临床中药手册［M］.北京：人民卫生出版社，1998：109.
［6］郭兰忠.现代实用中药学［M］.北京：人民卫生出版社，1999：301.
［7］全宏勋.黄芪水煎液对环磷酰胺抗肿瘤活性与毒性的影响［J］.中药材，1995，18（7）：356.
［8］张占好，张春艳，刘旭.黄芪多糖对小鼠体内六种细胞系瘤株抑瘤作用的实验研究［J］.中医药学习，1996（4）：55.
［9］林启云，王建如，廖瑜修，等.蛤蚧对动物免疫功能、血糖、耐缺氧的影响［J］.广西中医药，2000，7（5）：48.
［10］王珍.蛤蚧平喘胶囊的平喘作用及其作用机制的研究［J］. Clin Healthcare，2001，4（4）：250.
［11］邹杰明，潘佐静，李美珠，等.蛤蚧定喘胶囊药理学及毒理学研究［J］.中草药，2003，34（4）：343.
［12］余昭群，熊良钟，吴祖泽.水蛭中氨基酸成分与人白介素-6伍用对60Co-γ照射小白鼠造血功能的影响［J］.中成药，1999，21（4）：189.
［13］李元青.扶正抑瘤颗粒含药血清对小鼠肝癌细胞h32凋亡及细胞内Ca2+浓度的影响［J］.山东中医药杂志，2005，24（6）：361.