冠心七味片的质量标准分析

作者：黄鸣清 李卓明 吴燕红 顾铠　周长凤　赵学军 苏子仁

【关键词】 冠心七味片
　　 摘要：【目的】建立冠心七味片的质量标准。【方法】采用薄层色谱法（TLC）对冠心七味片中的丹参、降香、山柰、广枣进行鉴别；采用高效液相色谱法（HPLC）测定丹参酮ⅡA含量。【结果】TLC法可检出丹参、降香、山柰、广枣，斑点清晰，阴性对照无干扰。HPLC法测定丹参酮ⅡA含量，在?0022～0154?μg?范围内线性良好，加样回收率为9790%， SR为122%。【结论】本质控方法操作简单，可以用来评价冠心七味片质量。
关键词：冠心七味片/化学； 中药制药工艺； 色谱法，薄层； 色谱法，高压液相
　 冠心七味片为著名蒙药，由丹参、降香、山柰、广枣、肉豆蔻、檀香、沙棘七味中药组成，具有活血化瘀，强心止痛之功效。为了提高该成药的质量检测标准，我们采用薄层色谱法(TLC)对丹参、降香、山柰、广枣进行了定性鉴别；采用高效液相色谱法(HPLC)对方中丹参的有效成分丹参酮ⅡA进行了含量测定。现报道如下。
１ 材料
１１ 仪器 Dionex Summit高效液相色谱仪(P680 HPLC Pump， ASI100 Automated Sampled Injector， UVD170U，STH585 Column Oven)；Chromeleon数据处理系统；SB5200超声波清洗机（宁波新芝科器研究所）；实验室专用超纯水机(重庆利迪现代水技术设备有限公司)。
１２ 药物与试剂 冠心七味片（内蒙古乌兰浩特中蒙制药有限公司提供，批号分别为20030801、20030802、20030803）；丹参（批号9239905）、降香（批号0952200204）、广枣（批号121334200401）等对照药材，丹参酮ⅡA（批号7669002）、对甲氧基肉桂酸乙酯（批号08359601）等对照品，均购自中国药品生物制品检定所；硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂）；乙腈为色谱纯（Merck公司），其他试剂和试药均为分析纯。
２ 方法和结果
２１ 薄层鉴别
211 丹参、降香的薄层鉴别 取本品10片，研细，加甲醇?5?mL，密塞，超声提取?15?min，滤过，滤液作为供试品溶液；同法分别制备丹参对照药材溶液、降香对照药材溶液、缺丹参样品溶液、缺降香样品溶液；另取丹参酮ⅡA，加甲醇制成?1?mg/mL?对照品溶液。吸取上述溶液各?5?μL，分别点于硅胶G薄层板上，以石油醚（60℃～90℃）―醋酸乙酯（体积比为8∶3）为展开剂展开，取出晾干。供试品色谱中，在与丹参对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；缺丹参样品溶液未见上述斑点。喷以香草醛硫酸试液，加热至斑点显色清晰，在与降香对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，缺降香样品溶液未见上述斑点。结果见图1-a和图1-b。
212 山柰的薄层鉴别 按211所述方法分别制备供试品溶液、山柰对照药材溶液、缺山柰样品溶液；另取对甲氧基肉桂酸乙酯，加甲醇制成?1?mg/mL?对照品溶液。吸取上述溶液各?5? μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以正已烷―醋酸乙酯（体积比为9∶1）为展开剂展开，取出晾干，置紫外灯（?254?nm ）下检视。供试品色谱中，在与对照品和对照药材相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，缺山柰样品溶液未见上述斑点。结果见图1-c。
213 广枣的薄层鉴别 取本品10片，研细，加体积分数为70%乙醇?20?mL，加热回流? 30?min?后滤过，滤液蒸干，加水 ?5?mL?使溶解，滤过，滤液用乙醚 ?15?mL?提取2次，合并乙醚液，蒸干，残渣加醋酸乙酯?1?mL?使溶解，作为供试品溶液；同法分别制备广枣对照药材、缺广枣样品溶液。吸取上述溶液各 ?5?μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿―丙酮―甲酸（体积比为7∶2∶1）为展开剂展开，取出晾干，置氨蒸气中薰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；缺广枣样品溶液未见上述斑点。结果见图1-d。 转贴于 22 含量测定
221 色谱条件 色谱柱为Kromasil C18(46?mm×250?mm，5?μm)；流动相为V乙腈∶V水=75∶25；检测波长为270?nm；流速为10?mL/min；柱温为25℃。
222 对照品溶液的制备 精密称取丹参酮ⅡA对照品?11?mg，置?5?mL?棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取?05?mL，置?10?mL?棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀即得（每?1?mL?中含丹参酮ⅡA?11?μg）。
223 供试品溶液的制备 取本品10片，除去薄膜衣，研细，精密称取1?g，置50?mL锥形瓶中，精密加入甲醇25?mL，称定质量，超声提取15?min，取出放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液过045?μm微孔滤膜，即得样品供试液。
224 专属性试验 按照本品的处方、制法制备缺丹参的模拟样品，按供试品溶液制备方法制成丹参阴性对照溶液，将丹参酮ⅡA对照品溶液、供试品溶液和丹参阴性对照溶液，分别注入液相色谱仪中，结果见图2。图2结果显示，供试品在与丹参酮ⅡA相应位置有对应的峰，而阴性对照则无对应的峰，说明其他药味不干扰丹参酮ⅡA的检测。
225 标准曲线的制备 分别精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10、12 μL进行色谱测定，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积（Y）对进样量（X）进行线性回归，得标准曲线。研究结果显示，进样量在0022～0154?μg范围呈线性关系，回归方程为Y=4?2344X-4081?2，其相关系数为r=0999 98。
　２　26 稳定性试验 取同一对照品溶液5?μL，按上述色谱条件于0、2、4、8、12、24、36?h分别测定，测得峰面积平均值为233596，SR=043%。结果显示丹参酮ⅡA在36?h内稳定。
227 精密度试验 精密吸取对照品溶液5?μL，重复进样6次，测得峰面积平均值为232571，SR=047%。
228 重复性试验 按拟定的含量测定方法，以同一批样品（20040801）制备供试液，平行做6份，测得峰面积并计算含量，结果含量平均值为0519?mg/g，SR=077%。
229 加样回收率试验 精密称取已知含量的同一批样品（20040801）05?g，分别精密加入一定量的丹参酮ⅡA，按供试品溶液制备项下操作，平行操作6份，按色谱条件测定含量，计算回收率，结果见表1。
2210 样品测定 按供试品溶液制备方法和色谱条件对3批样品进行了分析，结果见表2。表1 丹参酮ⅡA回收率测定结果表2 冠心七味片中丹参酮ⅡA的含量测定结果（N=3）
　３ 讨论
丹参薄层色谱鉴别曾采用《中国药典》2000年版一部丹参项下方法，但斑点Rf值偏小，有拖尾现象，结果见图1-e。改用本文方法后，斑点清晰，专属性强，易于重复，并且简化了药典繁琐的样品处理过程。
广枣薄层色谱鉴别曾按药典选用没食子酸对照品，但方中沙棘含有没食子酸等成分，缺样对照在没食子酸相同Rf值的位置上有干扰斑点。采用广枣对照药材进行对照，特征斑点增多，排除了阴性干扰，提高该鉴别方法的可靠性。
含量测定供试品处理曾考察超声提取、水浴回流、浸渍等不同提取方法对含量测定的影响。结果显示，以水浴回流和超声提取所测得的丹参酮ⅡA含量较高，而超声提取的杂质峰干扰较小，且节省时间，故选择甲醇超声提取。
参考文献：
［１］国家药典委员会.中华人民共和国药典2000年版（一部）［S］. 北京：化学工业出版社，2000.