耳压及防石胶囊预防胆囊结石的实验分析

　　　　　　作者：杨卓欣 李健 张永斌 黄明河 张竞超 郭绍举

【摘要】 【目的】观察耳压及防石胶囊预防胆囊胆固醇和胆红素结石的作用。【方法】①预防胆固醇结石实验：将75只豚鼠随机分成5组，空白组每天只喂普通饲料，模型组每天喂胆固醇结石诱石饲料，熊去氧胆酸（UDCA）组喂胆固醇结石诱石饲料加UDCA(剂量为50?mg/kg)，防石组喂胆固醇结石诱石饲料加防石胶囊（剂量为1?g/kg），耳压组喂胆固醇结石诱石饲料并每天按压耳穴中胆俞、胆囊穴及日月等穴；②预防胆红素结石实验：将64只豚鼠随机分成4组，空白组每天只喂普通饲料，模型组每天喂胆红素结石诱石饲料，防石组喂胆红素诱石饲料加防石胶囊（剂量为1?g/kg），耳压组喂胆红素诱石饲料并每天按压耳穴（穴位同前）。【结果】2个月后检测结果显示：预防胆固醇结石实验中模型组胆囊结石发生率及胆汁中钙离子浓度显著性升高，防石胶囊及耳压法可显著性降低结石发生率及钙离子浓度；预防胆红素结石实验中模型组胆囊结石发生率及胆汁中胆红素含量显著性升高，防石胶囊及耳压法均可显著性降低结石发生率及胆红素含量（均P＜005或P＜001）。【结论】耳压及防石胶囊能预防胆囊胆固醇和胆红素结石的形成，其机制可能与它们能分别降低胆汁中钙离子浓度及降低胆红素含量有关。
【关键词】 胆结石/中药疗法；胆结石/穴位疗法；穴，胆俞；穴，胆囊；穴，日月；疾病模型，动物；豚鼠
　　
　　【Objective】To observe the preventive effect of Fangshi Capsule (FC， mainly composed of Herba Lysimachiae， Rhizoma Curcumae Longae， Radix Clematidis， Radix Paeoniae Rubra， Radix Codonopsis， Rhizoma Atractylodis Macrocephalae， Radix Glycyrrhizac， Rhizoma Curcumae，etc.) and auricularplaster (AP) therapy on guinea pig cholesterol gallstone and bilirubin gallstone.
　　
　　【Methods】(1) Experiment of prevention of cholesterol gallstone: Seventyfive guinea pigs were randomized into 5 groups of A，B，D and E. Except group A was fed with routine forage， the other four groups were fed with cholesterolgallstoneinduced forage. Meanwhile， group C received ursodesoxycholic acid (UDCA) in the dosage of 50?mg/kg， group D was treated with FC in the dosage of 1?g/kg， and group E with auricularplaster (AP) therapy on the acupoints of Danshu， Dannang and Riyue additionally. (2) Experiment of prevention of bilirubin stone: Sixtyfour guinea pigs were randomized into 4 groups of A，B，D and E. Except group A was fed with routine forage， the other three groups were fed with bilirubinstoneinduced forage. Meanwhile， groups D and E received the same additional treatment as that in experiment (1).
　　
　　【Results】After 2 months， gallstone incidence and Ca2+ concentration were increased in the cholesterolgallstone model group， and FC and AP therapy decreased gallstone incidence and Ca2+ concentration. Gallstone incidence and bilirubin content were also increased in the bilirubingallstone model group， and were decreased in groups D and E(P＜005 or P＜001).
　　
　　【Conclusion】AP therapy and FC can prevent the formation of cholesterolgallstone and bilirubingallstone， their mechanism may be related to the decrease of Ca2+ concentration and bilirubin content in the bile respectively.
　　Key words:GALLSTONE/TCD therapy;GALLSTONE/acupoint therapy;POINT BL19(DANSHU);POINT EXLE6(DANNANG);POINT GB24(RIYUE);DISEASE MODELS， ANIMAL;GUINEA PIGS
　　保胆治疗胆囊结石的优点是既去结石又保留胆囊，保留了胆道系统结构和功能的完整性，但其后续的临床课题是如何防止胆囊结石的复发［1］。为此，我们从动物实验入手，观察了耳压及口服防石胶囊预防胆囊结石复发的作用，报道如下。
　　1材料与方法
　　11动物豚鼠，雌性，体质量300～400?g，由广州中医药大学实验动物中心提供，合格证号：2003A002。
　　12药物及饲料胆固醇诱石饲料含全价豚鼠饲料9545?g/kg、酪蛋白10?g/kg、蔗糖15?g/kg、猪油10?g/kg、纤维素10?g/kg、胆固醇05?g/kg。胆红素诱石饲料含全价豚鼠饲料9543?g/kg、酪蛋白10?g/kg、蔗糖15?g/kg、猪油10?g/kg、纤维素10?g/kg、胆酸02?g/kg、胆固醇05?g/kg。其中酪蛋白由广东环凯微生物科技公司提供，批号 ：200302417；纤维素由广州器化医疗设备有限公司提供，批号：030402；胆固醇由广州器化医疗设备有限公司提供，批号：030708；胆酸由瑞士分装，批号：432182/110202。防石胶囊（由金钱草、姜黄、威灵仙、赤芍、党参、白术、甘草、莪术、山楂、枳实、决明子组成）由深圳市中医院制剂室提供，批号：020614；熊去氧胆酸（UDCA）由常州制药厂生产，批号：0302001。
　　13预防胆固醇结石的实验方法［2］豚鼠75只，随机分成5组，每组15只。除空白组喂养普通饲料40?g·d-1·只-1，其他组均饲喂胆固醇结石诱石饲料40?g·d-1·只-1只复制模型；同时UDCA组以UDCA溶液1～2?mL灌胃（UDCA剂量为50?mg/kg)，防石组以防石胶囊溶液1～2?mL灌胃（防石胶囊剂量为1?g/kg），耳压组每天按压耳穴（取豚鼠胆俞穴、胆囊穴和日月穴，采用王不留行籽）5?min，左右耳交替进行。2个月后，禁食24?h，豚鼠眼眶处注射空气致死，剖开腹腔，用血管钳阻断胆囊管，取下胆囊，抽取胆汁送检，测定胆固醇、胆汁酸及钙离子浓度，并剖开胆囊，计算每组的成石豚鼠数及成石率，结石送检定性。胆固醇测定采用酶比色法，钙测定采用偶氮伸Ⅲ法，胆汁酸测定采用循环酶法（第Ⅴ代）。结石定性分析：取10?mg结石粉末放入试管内加氯仿10?mL，充分混合约15?min后过滤3?mL，加醋酐1?mL及浓硫酸02?mL混合后，置暗处10?min，显蓝绿色者为胆固醇阳性结石。

　14预防胆红素结石的实验方法［3］豚鼠64只，随机分成4组，每组16只。除空白组喂养普通饲料40?g·d１·只１外，其他组均饲喂胆红素结石诱石饲料40?g·d１·只１复制模型；同时防石组以防石胶囊溶液1～2?mL灌胃（防石胶囊剂量为1?g/kg）；耳压组每天按压耳穴（取豚鼠胆俞穴、胆囊穴和日月穴）5?min，左右耳交替进行。2个月后，禁食24?h，豚鼠眼眶处注射空气致死，剖开腹腔，用血管钳阻断胆囊管，取下胆囊，用注射器抽出胆汁测定总胆红素、结合胆红素并计算出游离胆红素浓度，最后剖开胆囊，计算每组成石豚鼠数及成石率，结石送检定性。总胆红素、结石胆红素测定采用钒酸盐氧 化法；结石定性分析：取少许结石粉末放入试管内，加无水乙醇3?mL，溶解后加新鲜配制的重氮试剂1?mL，摇匀后出现红色为胆红素阳性。
　　2结果
　　21成石情况胆固醇结石模型组有4只动物死
　　表1各组豚鼠胆固醇结石发生情况比较　略
　　亡，存活的11只动物中有8只胆囊内形成胆固醇结石，结石发生率为727%，高于空白组的77%，表明本实验模型是成功的；UDCA、耳压治疗和口服防石胶囊治疗均使结石发生率下降，与模型组比较均有显著性差异，表明耳压治疗和口服防石胶囊均有预防胆固醇结石形成的作用，与UDCA疗效相仿。大部分模型动物胆囊内均发现肉眼可见的结石，呈黄褐色，多形，大小约为05?cm×01?cm，结石定性分析为胆固醇阳性。结果见表1。胆红素结石模型组有3只死亡，存活13只，其中有11只胆囊内形成胆红素结石，结石发生率为846%，显著高于空白组的214%，表明本胆红素结石模型是成功的；耳压治疗和口服防石胶囊治疗均使胆囊胆红素结石发生率下降，与模型组比较均有显著性差异，可见这两种疗法均有预防胆红素结石形成的作用。大部分模型动物胆管及胆囊内均发现肉眼可见的结石，呈棕黑色，多形，大小约为005?cm×01?cm，结石定性为胆红素阳性。结果见表2。

　　表2各组豚鼠胆红素结石发生情况比较　略
　　表3预防胆固醇结石实验中各组胆汁生化数据比较(略)
　　表4预防胆红素结石实验中各组胆汁生化数据比较(略)
　　22各组胆汁中各有关成分分析表3结果显示胆固醇结石模型组胆汁中钙离子及胆固醇浓度显著性高于空白组，UDCA组、防石组、耳压组与模型组比较钙离子浓度显著性下降，提示各治疗组可能通过降低胆汁中钙离子浓度而预防胆固醇结石的形成。表4结果显示，胆红素结石模型组胆汁中胆红素（包括结合型及游离型）显著性高于空白组，而防石组及耳压组与模型组比较，胆红素浓度显著性下降，提示两个治疗组预防胆囊胆红素结石的形成可能是通过降低胆汁中胆红素含量来实现的。
　　3讨论
　　胆囊是重要的消化器官，也是一个免疫器官。胆囊切除后可出现腹泻等消化不良症状，胆汁的持续性排放可导致胆汁向胃返流，产生顽固性的胆汁返流性胃炎，胆道内压增高可致胆总管代偿性扩张，从而使胆管结石易于形成，大量的稀胆汁（肝细胞分泌的胆汁）再也不经胆囊粘膜的吸收浓缩储存，而是直接经十二指肠乳头排入十二指肠，使乳头超负荷工作，易致乳头括约肌痉挛及乳头炎，产生难以诊断的右上腹痛，有学者称之为胆囊切除后综合征。此外，胆囊切除后患者结肠癌发病率比正常人高出45倍［4］。因此，保留胆囊、去除结石的临床研究十分活跃，包括微创保胆内镜取石术、溶石疗法、排石疗法等，但其不足之处是存在一定的复发率。因此，预防胆囊结石具有重大的临床价值。胆囊结石的形成与胆汁成分的改变、胆汁淤积沉淀产生胆固醇小结晶或胆红素钙沉淀有关。西医的预防药物有消炎利胆的硫酸镁、阿司匹林、胆囊收缩素及抗生素等，有早期溶解胆固醇结晶的熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸等，但是，上述药品长期服用均有较大的副作用。所以目前应用西药防止胆囊结石复发是不现实的。中医理论认为，胆囊结石的形成是由于肝气郁结、湿热内蕴、瘀血阻滞导致胆汁淤积而成，临床上耳穴贴压刺激人体胆俞、胆囊、胆管等穴位，能疏肝利胆、增加胆汁的分泌和排空，使胆汁排泄通畅［5］。防石胶囊则专为微创保胆内镜取石术后防止结石复发而设计，方中金钱草、姜黄、威灵仙、赤芍利胆消炎；党参、白术、甘草益气和胃健脾；赤芍、莪术、山楂及枳实活血化瘀、消积软坚；决明子、枳实通腑理气。相关的临床观察显示，耳压及防石胶囊能明显减轻胆囊的炎症，提高胆囊的收缩功能，有助于降低取石后胆囊结石的复发率(待发表)。本研究则从动物实验角度表明，耳压及防石胶囊能预防豚鼠胆囊胆固醇及胆红素结石的形成，其机制可能与它们能分别降低胆汁中钙离子浓度及降低胆红素含量有关。本研究结果为其临床预防胆囊结石的复发提供了实验依据。
【

参考文献

】
　　［1］李健，杨卓欣．微创保胆内镜取石术加防石胶囊治疗胆囊结石的初步观察［Ｊ］．中国中医药科技，2003，1（10）：503．

　　［2］董米连，薛之祥．胆囊Ⅲ号方预防胆固醇结石的实验研究［Ｊ］．中国中西医结合外科杂志，1997，3（1）：6．

　　［3］龙明照．四金化石胶囊降低豚鼠实验性胆红素结石模型血脂的实验研究［Ｊ］．南京中医药大学学报，1997，13（3）：152．

　　［4］袁联之．胆囊切除术后的远期副作用［J］．现代手术学杂志，1998，3（3）：227．

　　［5］董洪涛．耳针对胆道系统功能调整的研究现状［Ｊ］．江西中医药，1998，4（2）：41．

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