【摘要】 【目的】观察“通督调神固本”电针法对血管性痴呆（ＶＤ）模型大鼠学习记忆能力和血浆内皮素（ＥＴ）含量的影响。【方法】将成年健康ＳＤ大鼠（ＳＰＦ级）随机分为假手术组８只、电针组９只（电针治疗，取百会、大椎、脾俞、肾俞穴）、西药组８只（尼莫通治疗，剂量为12mg/kg）和模型组８只（不作治疗）。采用改良的四血管阻断法复制ＶＤ模型，Morris水迷宫法测定大鼠学习记忆能力，放射免疫法测定血浆ＥＴ含量。【结果】模型大鼠血浆ＥＴ含量显著性升高（Ｐ＜０.０１），其学习记忆能力表现出明显的障碍，在水迷宫实验中，其逃避潜伏期显著性延长（Ｐ＜０.０１），在原平台象限跨越平台次数与其他３个象限比较无显著性差异（Ｐ＞０.０５）。而电针组、西药组大鼠逃避潜伏期显著性缩短（Ｐ＜０.０１），相同时间内跨越原平台次数显著性多于其他３个象限（Ｐ＜０.０１），并可使血浆ＥＴ含量显著性降低（Ｐ＜０.０１），与假手术组比较无显著性差异（Ｐ＞０.０５）。【结论】“通督调神固本”电针法治疗ＶＤ的作用可能与其调节血浆ＥＴ含量，有效提高ＶＤ大鼠学习记忆能力有关。
【关键词】 血管性痴呆／针灸疗法； 内皮素／血液； 通督调神固本； 疾病模型，动物； 大鼠
针灸治疗血管性痴呆（vascular dementia，VD）具有多系统、多水平、多层次、多靶点的特点。本课题组在长期的临床和科研实践中，总结出“通督调神固本”之法，选取精而少的穴位（百会、大椎、脾俞、肾俞）治疗ＶＤ，取得了肯定的临床疗效［１］，并通过对氧自由基、脑神经递质及脑细胞超微结构等的观察加以证实［１-４］。大量的临床和实验研究表明，内皮素（endothelin，ET）不仅可促使脑缺血的进一步加重，并通过脑神经元或胶质细胞的直接影响参与ＶＤ发生和发展的全过程［５-６］。本文观察了“通督调神固本”电针法治疗对痴呆大鼠血浆ＥＴ含量及学习记忆能力的影响，为探讨针灸治疗ＶＤ和对脑细胞保护作用的机理提供实验依据。现报道如下。
1 材料与方法
1.1 动物、分组与造模
成年雄性健康ＳＤ大鼠（ＳＰＦ级）４８只，体质量180~220g，由广州中医药大学实验动物中心提供〔实验动物许可证号：ＳＣＸＫ（粤）２００３-０００１；使用实验动物质量合格证编号：００１１１３６〕。随机抽取８只大鼠作假手术对照组，其他４０只均采用改良的四血管阻断法［7］复制ＶＤ模型。术后7d存活并无肢体残疾的大鼠２５只，将其随机分为电针组９只、西药组８只和模型组８只。假手术组８只全部存活。实验动物均按常规饲养。
1.2 主要仪器
ＳＤＱ-３０双极射频电凝器（上海手术器械厂）；Morris水迷宫（广州中医药大学实验动物中心提供）；Ｇ６８０５-１型治疗仪（中国青岛华声仪器厂）；１次性无菌针灸针（苏州天一针灸器械有限公司）；ＳＮ-６９５Ｂ型放免γ测量仪（上海核仪器一厂）。
1.3 治疗方法
电针组采用２８号25mm毫针，参考《实验针灸学》［８］取穴，于模型大鼠头部百会穴（顶骨正中）斜刺１０mm，大椎穴（第７颈椎下）、脾俞穴（第１２胸椎下两旁肋间）和肾俞穴（第２腰椎下两旁）各直刺５mm，连接电针仪，施以连续波，频率150Hz，强度以大鼠安静耐受为度（约１mA），每天电针１次，留针２０min；西药组给予尼莫通（拜耳医药保健有限公司生产，批号：１１０１５６），按12mg／kg灌胃，每日１次；模型组给予生理盐水，按２０mL/kg灌胃，每日１次。各组均连续治疗１５d。假手术组在同等条件下饲养，未予任何治疗。
1.4 检测方法
1.4.1 行为学观测 治疗结束后开始水迷宫检测［９］。水迷宫内水深４１cm，水温２２℃~26℃。在水池壁标明４个入水点，由此将水池等分为４个象限（Ｅ，Ｓ，Ｗ，Ｎ），任选一象限正中放置平台，没于水下１cm，水面覆盖塑料泡沫。①定位航行试验：将受试大鼠按顺时针方向依次由Ｅ，Ｓ，Ｗ，Ｎ４个入水点面向池壁放入水中。记录２min内寻找平台的时间（逃避潜伏期，escape latency）。如果大鼠在２min内找到平台，记录其实际逃避潜伏期；如果在２min内未找到平台，由试验者将其引上平台并停留１０s，逃避潜伏期记为２min。历时6d，每天１次。②空间探索试验（spatial probetest）：定位航行试验结束后撤出平台，然后任选一相同入水点将大鼠放入水中，测其２min内跨原平台及其他３个象限相应平台位置的次数。
1.4.２ 血浆ＥＴ含量测定 各组大鼠于水迷宫检测后取样，眼眶采血，每mL加入０.３mol/Ｌ抗凝剂乙二胺四乙酸二钠（EDTA Na2+）2μL和抑肽酶５００kU，４℃温度下立即离心，３ ５００r/min离心15min，取上清液低温保存，采用放射免疫法（ＲＩＡ）测定，在广州中医药大学核医学中心测试，操作按照试剂盒说明进行（放免试剂盒由解放军总医院放免所提供，批号：０５１１２５）。
1.5 统计学方法
采用ＳＰＳＳ １３.０ for windows统计软件。
2 结果
2.1 各组对大鼠学习巩固和再现能力的影响
结果见表１、表２。表１结果显示，模型组大鼠平均逃避潜伏期显著性延长（Ｐ＜０.０１）；电针组及西药组可显著性缩短逃避潜伏期（Ｐ＜０.０１），与假手术组水平相仿（Ｐ＞０.０５）。表２结果显示，假手术组、电针组和西药组大鼠在原平台象限跨相应平台次数显著性多于其他３个象限（Ｐ＜０.０１）。模型组在原平台象限跨越相应平台次数与其他３个象限的跨越次数比较无显著性差异（Ｐ＞０.０５）。各组大鼠在原平台象限跨越相应平台次数比较，模型组显著性少于假手术组（Ｐ＜０.０１），而电针组、西药组跨越原平台象限次数显著性增加（与模型组比较，Ｐ＜０.０１），与假手术组比较无显著性差异（Ｐ＞０.０５）。表明模型组大鼠学习获取能力较差，电针和尼莫通均可改善模型大鼠的学习巩固和再现能力。
2.2 各组对大鼠血浆ＥＴ含量的影响
表３结果显示，模型组大鼠的血浆ＥＴ含量显著高于假手术组（Ｐ＜０.０１），而西药组、电针组可显著降低血浆ＥＴ含量（Ｐ＜０.０１），与假手术组比较差异无显著性意义（Ｐ＞０.０５）。 表1 各组大鼠平均逃避潜伏期比较（略）
Table 1 Comparison of escape latency in various groups（略）
统计方法：t检验；①Ｐ＜０.０１，与假手术组比较；②Ｐ＜０.０１，与模型组比较
表2 各组大鼠跨越原平台及其他３个象限相应平台位置的次数比较（略）
Table ２ Comparison of frequency of rats passing through the platform in the original and other 3 platform quadrants
统计方法：t检验；①Ｐ＜０.０１，与假手术组比较；②Ｐ＜０.０１，与模型组比较；③Ｐ＜０.０１，与同组原平台象限比较
表3 各组大鼠血浆ＥＴ含量比较（略）
Table 3 Comparison of plasma ET content in various groups
统计方法：方差分析；①Ｐ＜０.０１，与假手术组比较；②Ｐ＜０.０１，与模型组比较
3 讨论
血管性痴呆属于中医“呆病”范畴。《医林改错》指出：“高年无记性者，脑髓渐空”。脑为髓之海，其输上在于盖，即“百会”，百会为“三阳五会”，位居巅顶，针刺此穴可醒脑益智、开窍醒神。“大椎”乃“诸阳之会”，为手足三阳经之脉气交会的集中点。督脉为阳脉之海，入属于脑，故电针此二穴，可达疏通气血、通调督脉、醒脑开窍、益智复聪之功，称为“通督调神”。中医认为本病的病因病机为“虚、痰、瘀”相互转化，即肾虚、痰瘀相互影响，互为因果，其病机为本虚标实，以精气亏虚为本，痰热瘀血为标［１０］。历代医家也十分强调精、气、血不足以及肾虚髓空在痴呆发病中的作用。因此我们以中医整体观为指导，选择针灸治疗，在选取督脉之“百会”、“大椎”的基础上，配肾俞、脾俞，称之为“通督调神固本”。肾俞调补肾虚，脾俞健脾化痰，针刺此二穴既补先天之肾虚，又健后天之脾弱。诸穴合用，既养血活血，又行气化瘀，从而养血生精、藏精生髓、填髓充脑、安神健脑，使脑髓得以荣养而复聪。
ＥＴ是作用最强的缩血管物质，也是一种神经介质。在急性脑血管病中，患者血浆ＥＴ含量明显升高。ＥＴ收缩血管，使血压升高，维持缺血缺氧脑组织的灌注压，是机体的一种保护性反应［５］。但ＥＴ使血管持续性收缩，加重脑缺血，并作用于神经细胞，使神经细胞钙超载，产生自由基，进一步加重脑损害［１１］。众多研究表明，ＥＴ在病理情况下是一种有害介质，其升高只能使病情恶化，而无助于病变的恢复和修复［１２-１３］。因此，拮抗ＥＴ的产生，有利于ＶＤ的治疗和康复。本研究观察发现，ＶＤ大鼠血浆ＥＴ显著性升高，而经电针治疗后，ＥＴ含量显著降低，大鼠学习记忆能力也明显增强，其作用与尼莫通相仿。
本实验研究表明，以“通督调神固本”为法则的电针疗法，可调节ＶＤ模型大鼠异常升高的血浆ＥＴ含量，拮抗ＥＴ对脑组织的进一步损害，从而改善ＶＤ大鼠的学习记忆能力。
参考文献
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