【摘要】 目的 研究酸枣仁颗粒的制备工艺，优选酸枣仁乙醇提取最佳工艺条件。方法 以酸枣仁皂苷A提取率为指标，采用高效液相色谱法测定含量。应用正交试验设计进行筛选。结果 醇提的最佳工艺条件为第1次加8倍量的70%的乙醇回流提取60 min，第2次加6倍量的70%的乙醇回流提取40 min，第3次加6倍量的70%的乙醇回流提取40 min。结论 优选得到的工艺稳定可行。
【关键词】 酸枣仁颗粒;酸枣仁;酸枣仁皂苷A;醇提工艺
Abstract：Objective To study the optimum process for Suanzaoren granules， and to optimize the ethanol-extracting process for jujuboside A in Semen Ziziphi Spinosae. Methods With the extracting rate of jujuboside A as the index， HPLC was used to determine the content of jujuboside A in extracted solution and the extracting conditions were optimized by orthogonal design. Results The optimum extracting condition was adding 8 times amount of 70% ethanol and refluxing for 60 min， then adding 6 times amount of 70% ethanol， refluxing and extracting for 40 min (two times). Conclusion The optimized process is stable and highly efficient.
Key words：Suanzaoren granules;Semen Ziziphi Spinosae;jujuboside A;ethanol-extracting process
酸枣仁颗粒处方由酸枣仁、知母、川芎、茯苓、甘草组成。处方来源于《金匮要略》，具有养血安神、清热除烦的功用，主治虚烦不眠。现代临床常用于治疗失眠症、更年期综合征等。方中重用酸枣仁，以其性味甘平，入心肝之经，养血补肝，宁心安神，为君药。酸枣仁皂苷A为其镇静催眠的有效成分之一[1]。经试验摸索，用水提取酸枣仁皂苷A提取率较低，与文献报道乙醇提取优于水提取相一致[2]。为更好地发挥其药用功效，拟采用乙醇回流提取的方法，用L9(34)正交表设计试验，确定该处方中酸枣仁的最佳提取工艺。以酸枣仁药材中酸枣仁皂苷A提取率作为考察指标，采用高效液相色谱法进行含量测定，现将试验结果报道如下。
1 仪器与试药
Dionex-U3000高效液相色谱仪;Dionex-VW3100紫外检测器;Advantage系列超纯水机(美国pall);BS124S电子分析天平(德国Sartorius);SB-12DT超声波清洗仪(宁波新芝生物仪器厂产品)。酸枣仁皂苷A对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号11704-20040)。投料药材经本实验室鉴定为鼠李科植物酸枣Ziziphus jujuba Mill.var.spinosa (Bunge) Hu ex H.F.Chou的干燥成熟种子。其他所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 酸枣仁皂苷A的含量测定[3-4]
2.1.1 色谱条件 色谱柱为Dionex Acclaim?120 C18(4.6 mm×150 mm，5 ?m);乙腈-水(30∶70)为流动相;流速1 mL/min;检测波长204 nm;理论塔板数按酸枣仁皂苷A峰计算应不低于3 000。
2.1.2 标准曲线的制备 精密称取酸枣仁皂苷A对照品5.1 mg，置10 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，备用。精密移取该溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL分别置2 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制成不同浓度的对照品系列溶液，用0.45 ?m微孔滤膜过滤，进样20 ?L。以峰面积A对浓度C(mg/mL)进行线性回归，线性方程为A=15.944C-0.253， r=0.999 9(n=5)，结果表明，在0.051～0.306 mg/mL范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系。
2.1.3 样品溶液的制备 将“2.2”项得到的滤液分取适量后回收乙醇，残渣加水经超声波处理后，定量转移至100 mL的容量瓶中，定容，摇匀，移取20 mL置分液漏斗，加用水饱和的正丁醇萃取4次，每次15 mL。合并正丁醇层，再用正丁醇饱和的氨水洗涤2次，每次10 mL。将正丁醇液减压浓缩至干，干燥物用甲醇溶解后定量转移至5 mL容量瓶中，定容，摇匀后作为测试液，进行含量测定。
2.1.4 酸枣仁颗粒中酸枣仁皂苷A提取率的计算 用高效液相色谱法测定样品溶液中酸枣仁皂苷A的含量，并计算酸枣仁颗粒中酸枣仁皂苷A的提取率。
2.2 醇提工艺正交设计
按处方比例称取药材60 g，加乙醇回流提取，以提取时间、加醇量、乙醇浓度为考察因素，每个因素设计3个水平。以酸枣仁皂苷A的提取率作为考察指标，按L9(34)正交表安排试验，平行操作，见表1。表1 因素水平表
2.3 正交试验及结果
按醇提正交试验设计方案安排试验，得滤液，试验结果见表2，方差分析见表3。
结果表明，以酸枣仁颗粒中酸枣仁皂苷A的提取率为评价指标时，直观分析显示各因素作用主次为B&>C&>A，最佳提取方案为A2B3C2。方差分析结果表明，加醇量(B)、醇浓度(C)二因素均对结果有显著影响，因此选用B3C2;而提取时间虽然无显著影响，但酸枣仁皂苷A的提取率ⅠA与酸枣仁皂苷A的提取率ⅡA极差较大，因此提取时间选用A2。表2 L9(34)正交试验结果表3 酸枣仁皂苷A提取率方差分析注：F0.10(2，2)=9.00，F0.05(2，2)=19.00，F0.01(2，2)=99.00
2.4 验证试验
为了进一步考察优选工艺的可靠性及稳定性，按优选工艺条件进行3次验证试验，结果表明正交试验优选的工艺条件稳定、可靠。见表4。表4 验证试验结果
3 讨论
笔者通过正交试验设计的方法，优化酸枣仁颗粒中酸枣仁醇提工艺，为酸枣仁皂苷A成分的提取提供试验依据，以便更好地应用于临床。
优选后的最佳工艺条件为A2B3C2，即醇提的最佳工艺条件为第1次加8倍量的70%乙醇回流提取60 min，第2次加6倍量的70%乙醇回流提取40 min，第3次加6倍量的70%乙醇回流提取40 min。
在正交试验设计时，我们也曾考虑以提取后的浸膏得率为考察指标，但醇浓度、提取时间、加醇量三因素均对浸膏得率无显著影响。
参考文献
[1] 陈百泉，杭钢军，许启泰.酸枣仁皂苷的镇静催眠作用[J].中药材， 2002，25(6)：429-430.
[2] 吴立明.加味酸枣仁胶囊的研制[J].中国药师，2004，7(5)：346-347.
[3] 李玉娟，车镇涛，毕开顺，等.反相高效液相法测定酸枣仁中酸枣仁皂苷A的含量[J].中国中药杂志，2001，26(5)：309-310.
[4] 周庆武，李玲玲，纪 标，等.反相高效液相色谱法测定酸枣仁颗粒中酸枣仁皂苷A与酸枣仁皂苷B的含量[J].时珍国医国药，2008，19(3)：718-719.