作者：崔海峰，周艳华，吕署一，冯淑怡，黄颖，宋志前，王淳，刘振丽，孙明杰
【摘要】 目的 考察不同品种枳实对心血管和呼吸系统的作用差异。方法 采用麻醉大鼠，经十二指肠给予不同产地枳实提取物，给药剂量为4.2、2.1 g原药材/kg，给药后连续4 h观察大鼠血压、呼吸及心电图情况。结果 与对照组比较，酸橙大剂量组及甜橙大、小剂量组动物呼吸幅度于药后20 min一过性升高，后均恢复正常，各实验组之间差异均无统计学意义;实验期间未观察到枳实对心电的影响，各实验组之间差异无统计学意义;酸橙对血压的影响较显著，与对照组比较，酸橙大剂量组动物收缩压、舒张压及平均血压的降低于药后40、60、80 min差异均有统计学意义，小剂量组于药后60 min也有显著差异，提示酸橙确有一定的降压作用，作用持续时间可达2 h以上。甜橙对血压的影响并不明显，酸橙组与甜橙组比较有显著差异。结论 我国药典规定的两种枳实对呼吸系统有一过性的兴奋作用，对心脏的直接作用不明显，但酸橙的降压作用明显优于甜橙，在临床使用中应给予注意。
【关键词】 枳实;心血管系统;呼吸系统;大鼠
Abstract：Objective To investigate the different effects of 2 species of Fructus aurantii immaturus on cardiovascular and respiratory system. Methods The extract of 2 species of Fructus aurantii immaturus were administered to anesthetized rats by duodenum and the dosages were 4.2， 2.1 g crude drug/kg respectively. After administration， a continuous observation of blood pressure， respiration and ECG effects for 4 hours were performed. Results Compared with the control group， both of Citrus aurantium and Citrus sinesis exerted a transient increase to respiration rate after 20 min administration. No significant impact was observed during the experiment period on the ECG. The influence of Citrus aurantium on blood pressure was more significant. Compared with the control group， the effects of SBP， DBP and MBP reduced was observed in high-dose group of Citrus aurantium after 40， 60， 80 min administration， and so in low-dose group of Citrus aurantium after 60 min. The impact duration was up to 2 hours or more. However， the antihypertensive effect of Citrus sinesis was not obvious. And the blood pressure lowering effect of Citrus aurantium was superior to Citrus sinesis. Conclusion The 2 species of Fructus aurantii immaturus exert a transient excitatory effect on respiratory system. And the direct effect of them on heart is not obvious. The blood pressure lowering effect of Citrus aurantium is superior to Citrus sinesis. The attention should be given in the clinical usage of Fructus aurantii immaturus.
Key words：Fructus aurantii immaturus;cardiovascular system;respiratory system;rat
2005年版《中华人民共和国药典》(一部)规定枳实来源于芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培变种或甜橙Citrus sinesis Osbeck的干燥肉果，功效破气消积、化痰消痞，其主要有效成分是黄酮类和生物碱类，临床主要用于心血管和胃肠系统相关疾病的治疗[1-2]。然而，现代研究结果表明，不同品种枳实黄酮和生物碱类有效成分存在较大差异[3-5]，其是否影响枳实的功效，影响的程度如何，将直接制约其临床的应用。笔者对比研究来源于酸橙和甜橙两个品种的枳实对大鼠心血管和呼吸系统的影响，以期为临床合理用药提供依据。
1 实验材料
1.1 药物
甜橙和酸橙枳实分别采自贵州和重庆，经北京中医药大学生药学教研室刘春生老师鉴定，分别为甜橙Citrus sinensis Osbeck和酸橙Citrus aurantium L.的干燥幼果。分别称取甜橙枳实和酸橙枳实一定量，水蒸气蒸馏法提取挥发油6 h，滤过，滤液和挥发油留用。药渣加入70%乙醇回流提取2次，滤过，滤液和提取挥发油的滤液合并，减压回收乙醇，浓缩成每1 mL相当于1 g原药材的提取液。挥发油用等体积的乙醇稀释，分别加入各自的提取液中，即得实验样品。
1.2 动物
SD大鼠(Ⅱ级)50只，体重(250±20)g，雄性，中国药品生物制品检定所提供，许可证号：SCXK(京)2005-0004。
1.3 仪器
RM6240B多导生理记录仪，成都仪器厂生产。
2 实验方法
SD大鼠随机分为5组：对照组(蒸馏水)，酸橙大(4.2 g原药材/kg)、小剂量组(2.1 g原药材/kg)及甜橙大(4.2 g原药材/kg)、小剂量组(2.1 g原药材/kg);每组10只。实验前禁食12 h，实验时用10%乌拉坦1 mg/100 g腹腔注射麻醉动物，手术分离右侧颈总动脉，插管连至YPJ01型压力换能器记录血压;做气管插管术连HX300型呼吸流量换能器记录呼吸;用肢体Ⅱ导联进行心电描记。以上换能器均连于RM6240B型多导生理记录仪进行连续记录和实时分析，同时分离十二指肠以备给药。术后稳定30 min，待动物的呼吸、心电、血压平稳后，经十二指肠给药。酸橙大、小剂量组及甜橙大、小剂量组均给予0.84 mL/100 g等体积不同浓度的受试物药液，对照组给予等体积蒸馏水。稳定10 min给药，药后连续采样记录4 h。比较各实验组每20 min的收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、平均动脉压(MBP)、呼吸频率、呼吸幅度、心电图(包括P波幅度、R波幅度、PR间期、QRS波群时程、QT间期、ST段、T波幅度)及心率(HR)的变化率[6]。
3 统计学方法
计算各实验组药后每20 min变化率(药后每20 min均值减药前10 min均值，除以药前10 min均值，乘以100)，结果以—(—以)±s表示，采用SPSS 13.0统计软件进行方差分析(LSD，Tamhane’s T2)，比较对照组及甜橙与酸橙各剂量组的作用差异。
4 结果
4.1 酸橙和甜橙枳实对大鼠血压、心率变化的影响(见表1)
4.2 酸橙和甜橙枳实对大鼠呼吸变化的影响(见表2)
4.3 酸橙和甜橙枳实对大鼠心电图的影响
各实验组大鼠心电图(包括P波幅度、R波幅度、PR间期、QRS波群时程、QT间期、ST段、T波幅度)均未见明显变化(数据略)。表1 酸橙和甜橙枳实对大鼠血压、心率变化的影响(—(—响)±s，%)注：与对照组比较，*P&<0.05，**P&<0.01;与酸橙大剂量组比较，△P&<0.05，△△P&<0.01(下同)表2 酸橙和甜橙枳实对大鼠呼吸的影响(—(—呼)±s，%)
5 讨论
枳实主要含有黄酮类、生物碱类和挥发油类成分[2]，其所含黄酮类成分差异明显[3-5]，酸橙枳实的主要黄酮类成分为橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷及柚皮芸香苷，而甜橙枳实主要为橙皮苷及柚皮芸香苷，不含有柚皮苷及新橙皮苷。经对不同品种30多个批次枳实研究结果显示，这种差异是由于品种不同造成的，而且其主要生物碱辛弗林含量相差1倍[4]。研究表明，枳实所含生物碱和黄酮类成分对心血管系统的作用不尽相同，甚至相反。辛弗林是一种拟交感神经成分，作用于肾上腺α和5-羟色胺(5-HT)受体，具有降低门脉压和升高动脉压的作用[7-9]，其作为升高血压和抗休克的药物在临床应用。枳实黄酮类成分对心血管系统具有多方面的作用，包括抗血小板聚集、抗氧化、降脂以及降压等，其通过保护血管内皮细胞功能而具有降压作用是通过一氧化氮(NO)环化酶途径实现的[10]，同时其直接扩张血管作用是通过NO之外的途径实现的[11-13]。
本实验考察了来源于酸橙和甜橙枳实全成分对正常大鼠心电图、血压、呼吸系统的影响。结果显示，2种枳实给药后20 min动物呼吸幅度有较明显的升高，但作用持续时间短，随后即恢复正常，提示枳实对呼吸道平滑肌有一定的兴奋作用，但作用短暂。实验未观察到2种枳实对大鼠心电图的明显影响，但酸橙对血压的影响较显著，与对照组比较，酸橙大剂量组大鼠SBP、DBP及MBP的降低于药后40、60、80 min;小剂量组于药后60 min有显著差异，提示酸橙确有较好的降压作用，作用持续时间可达2 h以上。甜橙枳实对血压的降低并不明显，而且酸橙的降压效果明显优于甜橙，差异有统计学意义。造成此种差异的原因应该是甜橙和酸橙所含有效成分有质和量的差异所致，即枳实升压成分辛弗林在甜橙中的含量明显高于酸橙，而具有降压作用的黄酮类成分含量酸橙明显高于甜橙[4]，2种组分的综合作用结果是酸橙枳实对血压的影响明显大于甜橙枳实。
本研究结果提示，中药的功效与内在各种成分含量、组成比例和成分类型密切相关，中药品种来源可能直接影响药效作用，从而造成临床疗效差异。
参考文献
[1] 国家中医药管理局《中华本草》编委会. 中华本草[M].上海：上海科学技术出版社，1999.874.
[2] 朱 玲，杨 峰，唐德才.枳实的药理研究进展[J].中国药学报，2004， 32(2)：64-66.
[3] 刘振丽，宋志前，张 玲，等.枳实饮片中3类化学成分含量测定[J].中国中药杂志，2006，31(17)：1425.
[4] 王 淳.不同品种产地枳实有效成分的对比分析[D].北京：中国中医科学院，2009.
[5] 蔡逸平，隋有根，范崔生，等.枳实、枳壳药材的化学成分及药理研究概况[J].江西中医学院学报，1999，11(1)：18.
[6] 黄教成.试验动物血流动力学信号微型电子计算机实时分析系统[J].生物医学工程杂志，1991，7(3)：197-203.
[7] Brown CM， McGrath JC， Midgley JM， et al. Activities of octopamine and synephrine stereoisomers on alpha-adrenoceptors[J]. Br J Pharmacol，1988，93：417-429.
[8] Huang YT， Wang GF， Chen CF， et al. Fructus aurantii reduced portal pressure in portal hypertensive rats[J]. Life Sci，1995， 57：2011-2020.
[9] Tomoko Hibino1， Mitsutoshi Yuzurihara. Synephrine， a component of evodiae fructus， constricts isolated rat aorta via adrenergic and serotonergic receptors[J]. J Pharmacol Sci，2009， 111：73-81.
[10] Perez-Vizcaino F， Ibarra M. Endothelium-independent vasodilator effects of the flavonoid quercetin and its methylated metabolites in rat conductance and resistance arteries[J]. J Pharmacol Exp Ther，2006，302：66-72.
[11] Fitzpatrick DF， Hirschfield SL. Endothelium-dependent vasorelaxation caused by various plant extracts[J]. J Cardio Vasc Pharmacol，1995，26：90-95.
[12] Chen CK， Pace-Asciak CR. Vasorelaxing activity of resveratrol and quercetin in isolated rat aorta[J]. Gen Pharmacol，1996， 27：363-366.
[13] Woodman OL， Chan ECh. Vascular and anti-oxidant actions of flavonols and flavones[J]. Clin Exp Pharmacol Physiol，2004，31：786-790.