作者：郁红礼，吴皓，张科卫，崔小兵
【摘要】 目的 建立半夏及其不同炮制品中总游离有机酸的含量测定方法，比较半夏及其炮制品中总游离有机酸的含量。方法 采用电位返滴定法，以琥珀酸为对照品，测定生品及炮制品中总游离有机酸的含量。结果 分别测定了3批生品及清半夏、姜半夏中游离有机酸含量，姜半夏和清半夏中游离有机酸含量相对于生品有不同程度的提高。加样回收率为95.20%，RSD=1.81%。结论 本法简便、准确、可靠，可作为半夏及其炮制品清半夏和姜半夏中游离有机酸测定方法。
【关键词】 半夏;有机酸;电位返滴定法;含量测定
Abstract：Objective To determine and compare the contents of free total organic acids in Pinellia ternata and its processed products. Methods Back potentiometric titration was employed to determine the contents of free total organic acids in Pinellia ternata and its processed products. Results The contents of free total organic acids in three batches of Pinellia ternata and its processed products were determined. The contents of free total organic acids in prepared rhizoma pinelliae was higher than that of the crude drug. The recovery was 95.20% and RSD was 1.81%. Conclusion This method were simple， accurate and can be used to estimate the quality of Pinellia ternata and its processed products (prepared with potash alum and juice of rhizima zingiber or with just potash alum).
Key words：Pinellia ternata;organic acid;back potentiometric titration;content determination
半夏为天南星科半夏属植物三叶半夏Pinellia ternata (Thunb) Breit.的干燥块茎，首载于《神农本草经》，临床应用广泛。自古以来，半夏因其味辛辣、麻舌而刺喉，具有“戟人咽”的刺激性，被列为有毒中药，故临床多使用炮制品。《中华人民共和国药典》(一部)2005年版收载半夏的炮制品有清半夏、姜半夏、法半夏3种，除法半夏单列外，清半夏与姜半夏均列于半夏炮制项下[1]，饮片质量控制水平低。半夏中总游离有机酸具有止咳及抑制胃癌细胞的作用，为半夏及炮制品的有效成分之一[2]。本研究以总游离有机酸为指标，采用电位返滴定法，测定并比较了半夏及其炮制品清半夏、姜半夏中总游离有机酸的含量。
1 仪器与试药
Phs-3C型酸度计;BP211D电子天平(德国Sartorius公司);HJ-1型磁力搅拌器(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司);数显恒温水浴锅(上海申胜生物技术有限公司);5 mL微量滴定管(天津市天玻玻璃仪器有限公司)。
半夏生品及其炮制品清半夏与姜半夏各3批(产地分别为贵州、四川、甘肃，批号分别为080714、080715、080716)，来源于浙江中药饮片厂，均按《中华人民共和国药典》[1]方法炮制，由国家药典委员会委托生产。经本校中药鉴定教研室王春根教授鉴定为天南星科植物三叶半夏Pinellia ternata (Thunb) Breit.的干燥块茎及半夏的各炮制品。琥珀酸对照品(国药集团化学试剂公司，分析纯，纯度≥99.5%，批号T20071108)，邻苯二甲酸氢钾(国药集团化学试剂公司，分析纯，纯度≥99.8%，批号F20090519)。其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 试液的配制
氢氧化钠滴定液(0.1 mol/L)、盐酸滴定液(0.1 mol/L)配制参照2005年版《中华人民共和国药典》(一部)滴定液(附录ⅩⅤ F)配制。
2.2 供试品溶液的制备
取半夏生品及其炮制品粉末(过4号筛)约5 g，精密称定，置锥形瓶中，加乙醇50 mL加热回流1 h。同上操作，再重复提取2次。放冷，滤过，合并滤液，蒸干，残渣精密加入氢氧化钠滴定液(0.1 mol/L) 10 mL，超声处理(功率500 W，频率40 kHz) 30 min，转移至50 mL量瓶中，加新沸过的冷水至刻度，摇匀，即得。
2.3 测定方法
精密吸取上述溶液25 mL，[《中华人民共和国药典》2005年版(一部)附录Ⅷ A]照电位滴定法，用盐酸滴定液(0.1 mol/L)滴定过量碱液，记录滴定液消耗体积，以△E/△V(即相邻2次的电位差和加入滴定液的体积差之比)为纵坐标，以滴定液体积(V)为横坐标，绘制(△E/△V)-V曲线。△E/△V的极大值对应的体积即为滴定终点，并将滴定的结果用空白实验校正。每1 mL氢氧化钠滴定液(0.1 mol/L)相当于5.904 mg的琥珀酸(C4H6O4)。
2.4 精密度试验
精取琥珀酸对照品87.95 mg，加氢氧化钠滴定液(0.101 3 mol/L)50 mL溶解，转移至250 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密吸取上述溶液6份，每份25 mL，按“2.3”项下方法测定总游离有机酸的量，计算RSD=1.56%，表明本法精密度良好。
2.5 稳定性试验
取半夏生品(四川080715)，按供试品溶液制备方法制成供试液，按“2.3”项下方法滴定，隔2 h测1次，共测6次。结果表明，供试液中总游离有机酸含量在10 h内稳定，RSD=2.81%。
2.6 重复性试验
取同一批号半夏生品(四川080715)，依法处理样品6份，按“2.3”项下方法测定总游离有机酸的含量，结果表明该法重复性好，RSD=2.02%，总游离有机酸的平均含量为0.42%。
2.7 加样回收率试验
取半夏生品(四川080715)6份，每份约2.5 g，精密称定，置250 mL圆底烧瓶中，分别加入琥珀酸对照品，按“2.3”项下方法提取测定。计算回收率为95.20%，RSD=1.81%，符合方法学考察要求，结果见表1。表1 半夏中总游离有机酸的加样回收率试验结果
2.8 半夏及不同炮制品总游离有机酸含量测定
取半夏及清半夏、姜半夏饮片粉末约5 g，精密称定，按上述方法制备供试品溶液;按上述色谱条件进行测定含量。含量测定结果见表2;半夏生品及炮制品(四川080715)滴定曲线见图1。表2 半夏及清夏、姜半夏总游离有机酸含量测定结果
3 讨论
2005年版《中华人民共和国药典》(一部)收载的半夏炮制品有3种，除法半夏单列外，清半夏与姜半夏均列于半夏炮制项下。生品及炮制品均没有含量测定项。2010年版药典已将清半夏、姜半夏自半夏炮制项下分离单列，半夏与清半夏增加总酸含量测定项。本试验以总游离有机酸作为质控指标，研究半夏饮片的质量控制方法，研究结果已收载于《中华人民共和国药典》2010年版(一部)。由试验结果可知，半夏经过炮制后，总游离有机酸含量有不同程度提高，原因可能是炮制过程中呈酸性的白矾溶液使某些成盐的有机酸游离而含量增加。
本方法较现有的测定游离有机酸含量的方法[3]更简便，供试品溶液制备方法不需静置过夜，制备时间缩短，方法准确可靠、灵敏度高，可作为半夏及其炮制品清半夏、姜半夏的总游离有机酸的含量测定方法。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社，2005.78.
[2] 张科卫，吴 皓，沈绣红.半夏中总游离有机酸的作用[J].南京中医药大学学报，2001，17(3)：159.
[3] 刘 逊，吴 皓.电位返滴定法测定姜半夏中有机酸含量[J].中华中医药学刊，2009，27(2)：290-291