【关键词】 雷公藤;肾小球系膜细胞;白细胞介素6
【关键词】 雷公藤;肾小球系膜细胞;白细胞介素6
1材料和方法
雷公藤经水浸30 min后,水提3次,30 min/次,水煎浓缩后含生药6.1 g/L. SD大鼠6只(中国药科大学动物房),雌雄不限,体质量200~250 g. 分为雷公藤组和对照组,每日6 mL/kg灌胃,7 d,于最后1次灌胃后2 h内静脉取血,离心取血清,56℃灭活,过滤除菌. MTT(Sigma),溶于PBS,浓度5 g/L,过滤除菌,4℃避光保存. 无菌取SD大鼠双肾肾皮质剪碎,研磨,分别通过140,80,200目筛网,收集肾小球,V型胶原酶消化,收集细胞,接种于含100 mL/L新生牛血清MEM培养液中,置37℃,50 mL/L CO2孵育箱中培养. 24 h后换液,以后每3 d换液1次,待细胞铺满培养瓶时,经倒置显微镜确认为系膜细胞. 用2.5 g/L胰蛋白酶消化,并传代培养,所用实验细胞均为第3代细胞. 空白对照组(组1):正常大鼠血清;雷公藤高剂量组(组2):200 mL/L含药血清;雷公藤中剂量组(组3)100 mL/L含药血清;雷公藤低剂量组(组4):50 mL/L含药血清. 按常规进行细胞增殖检测和IL6检测.
2结果
各组A值由高到低依次为组1(0.380±0.044),组4(0.341±0.038),组3(0.337±0.029)与组2(0.305±0.022). 其中组3,组2与组1差异有统计学意义(P&<0.05,P&<0.01). 培养上清中的IL1浓度(ng/L),从高至低依次为组1(61.7±6.4),组4(53.5±2.4),组3(49.8±1.5)与组2(47.6±1.3),其中组2,组3,组4与组1差异均有统计学意义(P&<0.01).
3讨论
多种物质、细胞因子包括白介素6(IL6)可以刺激系膜细胞活化、增殖;而活化后的系膜细胞代谢发生变化,又合成并分泌多种炎症介质(也包括IL6等)和基质成分,从而形成一个不断放大的病理过程,最终导致肾小球炎症和硬化[1-2]. 因此,有效地抑制肾小球系膜细胞增生、 调控疾病状态下系膜细胞产生IL6的水平,将有利于控制肾小球慢性进行性毁损的过程,从而控制慢性肾脏疾病的发展,延缓肾功能恶化. 雷公藤是免疫抑制作用最可靠的中药之一,具有抑制体液免疫,调节患者体内存在的各免疫细胞亚群之间的病理平衡,纠正免疫系统紊乱,以及调控T淋巴细胞、单核细胞等产生细胞因子等作用[2]. 本结果表明,雷公藤具有抑制体外培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖的作用,并可抑制系膜细胞产生IL6,这些作用有助于阻抑肾小球硬化的发生,此可能是雷公藤治疗肾脏疾病、延缓肾功能慢性进行性恶化的机制之一.
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参考文献
】[1] 张,朱汉威,蒋更加,等. PDGF-BB对肾小球系膜细胞[Ca2+]i和细胞增殖的影响[J]. 上海第二医科大学学报,2003,23(4):318-321.
[2] 向明,张程亮. 雷公藤免疫抑制作用研究进展[J].中草药, 2005,36(3):458-461.