作者：尹爱平， 吕卓人， 蒋红莉， 郭亚娟
【关键词】 肾小球肾炎
【Abstract】 AIM: To study the variance of endogenous ouabain (EO) in glomerulonephropathy with hypertension and renal hypofunction. METHODS: The serum EO of normal controls and patients with glomerulonephropathy accompanied with hypertension and renal hypofunction was detected with a method of ELISA coating， to find the relationship between the EO concentration and renal hypofunction. RESULTS: Patients with glomerular diseases had an increased serum EO concentration， which was not related to blood pressure （P&<0.01）. The EO levels （μg/L） in group of normal renal function （1.46±0.54），azotemia （2.74±0.63） and uremia （3.58±0.79），were all higher than that of normal controls (0.87±0.35) (P&<0.01). A positive correlation was found between the degree of renal disfunction and serum EO concentration. Serum EO concentration changed earlier than serum and urineβ2MG. CONCLUSION: The level of EO increases obviously in glomerulonephritis especially with hypertension and renal hypofunction. Serum EO is more sensitive than blood and urine β2MG in detection of renal dysfunction.
【Keywords】 endogenous ouabain；glomerular disease；hypertension；renal function；β2MG
【摘要】 目的： 研究内源性哇巴因（EO）在肾小球疾病伴高血压及肾功能减退时的变化. 方法：采用酶标免疫吸附抗原包被法检测正常对照组和肾小球疾病伴高血压及肾功能减退组患者的血清EO浓度，观察EO与高血压及肾功能减退的关系. 结果： 各种肾小球疾病，无论血压增高与否，患者均有血清EO浓度的升高(P&<0.01)肾小球疾病肾功能正常组（1.46±0.54）μg/L、氮质血症组（2.74±0.63）μg/L及尿毒症组（3.58±0.79）μg/L的血清EO水平均明显高于正常对照组（0.87±0.35）μg/L (P&<0.01). 且随肾功能的减退，血清EO水平呈增高趋势. 与正常对照组相比，无论血清或尿的β2微球蛋白(β2MG)增高与否，其血清EO水平都高于正常，表明在肾小球发生病变后，即使目前反应肾小球及肾小管功能最敏感的指标之一还没有发生变化，血清EO已经升高. 结论：血清EO在肾小球肾炎伴高血压及肾功能减退时明显升高. 血清EO反应肾功能损害比血、尿β2MG更敏感.
【关键词】 内源性哇巴因；肾小球肾炎；高血压；肾功能；β2微球蛋白
0引言
内源性哇巴因(endogenous ouabain， EO)是具有多种生理功能和病理意义的内源性钠泵抑制物，它能抑制心脏、血管壁、中枢神经系统及肾小管等细胞膜上的钠泵，具有调节水盐代谢和血管壁张力等功能［1，2］. 在多种病理状态下EO均可发生变化，与疾病的发生演变密切相关，尤其在原发及继发高血压中具有重要意义. 我们观察了肾小球疾病伴高血压或肾功能减退患者血清EO水平，以探讨其与肾性高血压及不同肾功能状态的关系.
1.1材料
哇巴因及辣根过氧化物酶（HRP，购自美国Sigma公司），卵清蛋白哇巴因、抗哇巴因多克隆抗体、辣根过氧化物酶抗哇巴因抗体和底物液由本实验室制备.
1.2对象
患者组为本院肾内科经肾病理检查证实为原发或继发肾小球疾病者46（男 33，女 13）例，平均年龄（33.9±18.7）岁. 根据血压分为血压增高组和血压正常组；根据肾功能分为肾功能正常组、氮质血症组和尿毒症组等；对肾功能正常组进一步分为血β2微球蛋白(β2microglobulin， β2MG)正常组和血β2MG升高组、尿β2MG正常组和尿β2MG升高组. 全部患者均可排除感染性炎症和肿瘤. 对照组为本校健康学生及教师20（男12，女8）例，平均年龄（36.2±4.5）岁. 与患者组在年龄、性别构成上无显著性差异.
1.3方法
患者入院后次日晨空腹、未活动、未服药时采肘静脉血10 mL. 对照者清晨空腹采肘静脉血10 mL. 标本在室温下静置1 h，分离血清，-70℃冰箱保存，同批测定EO浓度. 取待检血清1 mL，每管加蛋白酶K消化液1000 μL，37℃水浴3 h后加入苯酚氯仿溶液1000 μL，混合振荡5 min，9000 g离心15 min，取上清，37℃负压干燥，加入Tween20磷酸盐缓冲液（PBST）100 μL溶解待测. 塑料微孔板吸附抗原，用哇巴因偶联物包被抗原，包被液抗原浓度为3 μg/mL，100 μL/孔4℃过夜，封闭，PBST洗板３次（每次2 min），加入不同稀释度的哇巴因标准品或上述预处理的样本（100 μL/孔）及1∶30 000倍稀释的HRP抗哇巴因抗体（100 μL/孔），37℃放置1 h后PBST洗板5次（每次2 min），加入底物液显色，置室温10 min，立即加100 μL/孔2 mol/L h3SO4，终止酶反应. 酶标仪测定A450 nm值，每条均设立阴性和阳性对照. 根据标准管的A值绘制标准曲线，计算样本的EO含量.
统计学处理: 结果数据用x±s表示. 组间比较采用方差分析以及Dunnettt检验，P&<0.05为有统计学意义.
2结果
2.1血清EO水平与肾小球疾病时血压变化的关系血压增高肾小球疾病患者23例，血压正常肾小球疾病患者23例，正常健康人对照20例三组血样中EO水平结果显示：前两组血清EO水平［（2.91±0.96）及（2.00±1.20）μg/L］明显高于第三组（0.87±0.35）μg/L，提示患肾小球疾病者无论有无血压的增高，血清EO浓度均明显高于对照组（P&<0.01）；而前两组相比，血清EO水平略高，但无统计学意义（P&>0.05）.