【关键词】 喉肿瘤
【Abstract】 AIM: To detect the expression of IKK， IκB and NFκB in laryngeal carcinomas and to explore its significance for the genesis and development of carcinomas. METHODS: The expression of IKKα， IκBα and NFκB p65 in 20 cases of laryngeal carcinomas and 10 cases of normal laryngeal tissues was detected by Western blot technique. RESULTS: The expression of IKKα and NFκB p65 in laryngeal carcinoma tissues was higher compared with that in normal laryngeal tissues and the expression of IκBα was lower (P&<0.05). CONCLUSION: The expression imbalance of IKK， IκB and NFκB is closely associated with the genesis and development of laryngeal carcinomas.
【Keywords】 laryngeal neoplasms; immunobloting; IKK; IκB; NFκB
【摘要】 目的：检测喉癌组织中IKK， IκB和NFκB的表达，并进而揭示其在肿瘤发生发展中的意义. 方法：采用免疫印迹法（Western blot）分析20例喉癌标本和10例正常喉黏膜标本中IKKα， IκBα， NFκB p65的表达. 结果：喉癌组织中IKKα和NFκB p65的表达水平明显高于正常组织， IκBα表达水平明显低于正常组织（P&<0.05）. 结论：IKK， IκB和NFκB表达失衡与喉癌的发生发展有着密切关系.
【关键词】 喉肿瘤；免疫印迹法；IKB激酶；IκB；核因子κB
0引言
核因子κB（nuclear factor kappa B， NFκB）是近年来研究的热点，其激活参与炎症、细胞增殖、细胞凋亡等基因的凋节. NFκB和NFκB的抑制蛋白IκB及IκB激酶IKK与肿瘤的发生发展关节密切，在多种肿瘤中存在异常表达［1］. IKK， IκB和NFκB在喉癌中的表达情况国内外尚未见报道. 我们应用免疫印迹法，对IKKα， IκBα， NFκB p65在喉癌中的表达进行了研究，探讨IKK， IκB， NFκB p65与喉癌发生发展的关系.
1材料和方法
1.1材料
收集重庆医科大学第一医院耳鼻咽喉科200107/200207期中20例（全部为男性）手术切除的喉癌组织及10例正常喉组织标本，肿瘤切除后30 min内采集喉癌组织，同时切取距肿瘤2 cm以外的喉组织作正常对照组，立即置于液氮保存. 所有病例均经病理证实为鳞状细胞癌，并且未行放疗、化疗. 20例喉癌组织按UICC 1997年标准分期：Ⅰ期4例、Ⅱ期6例、Ⅲ期9例、Ⅳ期1例；肿瘤分化程度：Ⅰ级8例、Ⅱ级10例、Ⅲ级2例；颈部淋巴结转移3例. IκBα抗体购自北京中山公司，IKKα抗体、NFκB p65抗体和Western blot发光试剂购自美国Satus Cruzs公司.
1.2方法
组织总蛋白的提取采用Satus Cruzs公司方案. RIPA液裂解喉癌及正常喉组织，Bradford法检测蛋白浓度，-70℃冻存. 以每泳道60 μg上样，经SDSPAGE电泳后，电转至硝酸纤维膜，先各加入IKKα， IκBα和NFκB p65一抗，再加入辣根过氧化物酶标记的二抗，以Western blot发光试剂检测杂交信号. 凝胶成像分析系统进行密度扫描；Image Master VDS Software软件分析蛋白区带；IKKα， IκBα和NFκB p65量用蛋白区带积分光密度值表示.
统计学处理：采用SPSS 10.0统计学软件，结果用x±s表示，采用t′检验.
2结果
2.1IKKα的表达Western blot检测结果显示喉癌组织IKKα积分光密度值为1887.63±328.34，正常喉组织IKKα积分光密度值为698.56±103.85，两样本的t′检验，差异有显著性(P&<0.05， Fig 1）.
2.2IκBα的表达Western blot检测结果显示喉癌组织IκBα积分光密度值为491.54±82.85，正常喉组织IκBα积分光密度值为2033.09±170.17，两样本的t′检验，差异有显著性(P&<0.05， Fig 2）.
3讨论
IKK， IκB和NFκB是NFκB信号传导通路的组成成分，在肿瘤的发生发展中起着关键作用，其参与癌变的机制是其可调控与细胞分化和细胞凋亡相关基因的表达，进而促进肿瘤细胞的分化，抑制肿瘤细胞凋亡. 在静息状态下， NFκB和IκB以无活性形式存在于细胞质中. 当细胞受到某些细胞外信号刺激时，通过信号传导激活IKK的上游激酶而促使IKK活化，活化的IKK通过对IκB的磷酸化而使IκB与NFκB二聚体解离，致使NFκB被激活并易位入核与靶基因的κB位点结合，启动下游基因转录. IKK， IκB和NFκB的表达失衡是一些疾病发生发展的重要原因之一，肿瘤的发生发展与它们表达失衡存在着更为密切的关系.
研究发现，在人结肠腺癌组织中，NFκB的亚单位RelA(p65)的表达较结肠腺瘤、正常结肠黏膜明显增强，提示NFκB p65表达的增强在从低度结构不良的结肠腺瘤到结肠腺癌的转变中扮演了重要角色［2］. Nair等［3］的实验证实，NFκB的DNA结合活性随着宫颈癌的恶性程度的增加而增加，而IκBα在宫颈癌组织中不能检测到，而在正常宫颈组织中能够检测到. Tamatani等［4］的研究表明，在头颈部癌组织中，NFκB的结合活性和IκB激酶IKK的亚单位IKKα的表达较正常组织明显增强，而IκB明显减弱. 以上实验说明，NFκB信号传导通路在恶性肿瘤的发生发展中起到一定作用，在致癌因素作用下，活化的IKK促进IκB的磷酸化、降解，使与IκB相结合的NFκB从二聚体解离，从而促进了肿瘤的发生、发展.
在本研究中，我们发现，在喉癌组织中IKKα和NFκB p65的表达明显高于正常喉组织，IκBα的表达明显低于正常喉组织. 我们的实验提示，IKK、IκB和NFκB在喉癌的发生发展中可能扮演着重要的角色，其活化与喉癌的恶性潜能有着密切的关系，它有望成为喉癌治疗的新靶点［5］.
参考文献
［1］ Karin M， Cao Y， Greten FR， et al. NFkappaB in cancer: From innocent bystander to major culprit［J］. Nat Rev Cancer， 2002;2(4): 301-310.
［2］ Yu HG， Yu LL， Yang Y， et al. Increased expression of RelA/nuclear factorkappa B protein correlates with colorectal tumorigenesis［J］. Oncology， 2003; 65(1): 37-45.
［3］ Nair A， Venkatraman M， Maliekal TT， et al. NFkappaB is constitutively activated in highgrade squamous intraepithelial lesions and squamous cell carcinomas of the human uterine cervix［J］. Oncogene， 2003; 22(1):50-58.
［4］ Tamatani T， Azuma M， Aota K， et al. Enhanced IkappaB kinase activity is responsible for the augmented activity of NFkappaB in human head and neck carcinoma cells［J］. Cancer Lett， 2001;171(2): 165-172.
［5］ Bharti AC， Aggarwal BB. Nuclear factorkappa B and cancer: Its role in prevention and therapy［J］. Biochem Pharmacol， 2002; 64(56): 883-888.