作者：许丽艳 张盈华 尹国武 张利朝 殷缨 郝晓柯
【关键词】 子宫内肿瘤
关键词: 子宫内肿瘤;T细胞;红细胞;Ag-NORs
摘 要:目的 探讨子宫内膜癌患者的免疫功能变化及临床意义. 方法 采用单克隆抗体直接免疫荧光染色法、红细胞花环试验及KL型肿瘤免疫图象分析仪，对21例子宫内膜癌患者和20名正常对照组分别测定其外周血T细胞亚群、红细胞免疫C3 b受体花环率（E-C3 bRR%）与红细胞循环免疫复合物花环率（ICR%）、核仁银染区面积/细胞核面积比值（I.S%）. 结果 子宫内膜癌患者CD+3 T细胞，CD+4 T细胞，CD+4 /CD+8 比值，E-C3 bRR%，I.S%值明显降低;CD+8 T细胞，E-ICR%明显升高，与对照组相比较差异显著（P&<0.01）. 结论 子宫内膜癌患者免疫功能低下;联合检测T细胞亚群、红细胞免疫与Ag-NORs可较全面反映子宫内膜癌患者的免疫功能状态，并可指导临床治疗.
Keywords:endometrial neoplasms;T lymphocyte;erythro-cyte;Ag-NORs
Abstract:AIM To study the significance of T lymphocyte subset erythrocyte immune function and argyrophilic protein in nucleolar organizer regions（Ag-NORs）in patients withcarcinoma of the endometrium.METHODS CD+3 T cell，CD+4 T cell，CD+8 T cell，CD+4 /CD+8 were determined by flow cytometery;E-C3 bRR%and E-ICR%were assayed by E-C3 bRR and ICR.Granules area of Ag-NORs/nuclear area（I.S%）were studied by KL image analysis system.RE┐SULTS CD+3 T cell，CD+4 T cell，CD+4 /CD
+8 ，E-C3 bRR%，I.S%in the patients were significantly lower than those in the healthy group（P&<0.01），however，the values of E-ICR%，CD+8 T cell were significantly higher than those of control group（P&<0.01）.CONCLUSION Immune function decreases in the patient.The detection of T lymphocyte sub-set，erythrocyte function and Ag-NORs can express the im-munologic function of carcinoma of the endometrium，and so is helpful for directing clinical therapy.
0 引言
在子宫癌肿中，子宫内膜癌的发病率有逐年上升的趋势.而子宫内膜癌的发生、发展与药物的疗效在一定程度上还取于子宫内膜癌患者自身免疫功能，当前全面系统的检测免疫功能的方法较少.因此，寻找简易可靠的免疫功能检测方法，对了解病情，指导治疗是当前迫切需要的.我们分别对子宫内膜癌患者与正常对照组进行了外周血T淋巴细胞亚群、红细胞免疫功能，核仁组成区相关嗜银蛋白（Ag-NORs）检测，并就三项检测结果进行了分析和临床意义研究，获得了较全面的资料，报告如下.
1 对象和方法
1.1 对象 子宫内膜癌21例，均来源于唐都医院1999-08/2000-05妇科患者，经临床及病理证实，未经放疗、化疗.年龄24～72（平均58.9）岁.正常对照组:20例，均为健康女性工作人员，年龄22～48（平均37）岁.
1.2 方法
1.2.1 T淋巴细胞亚群测定 采用单克隆抗体直接免疫荧光染色法，应用PROFILEⅡ型自动流式细胞仪，FITC标记的单克隆抗体CD3 ，CD4 ，CD8 及荧光标记的小鼠IgG由美国Coulter公司提供.激光荧光波长为488nm.按说明书进行操作，收集10000个淋巴细胞的光散射及荧光数据，用计算机分析测定结果.
1.2.2 红细胞免疫功能测定 取静脉血10μL，置于含营养液的试管内，将红细胞稀释成（1.2×107 ・mL
-1 ）悬液待用，在将致敏冻干酵母菌用生理盐水1mL溶解成（1×108 ・mL-1 ）悬液，再分别每管加0.05mL冰冻备用，再加C3 b致敏酵母菌悬液（1×108 ・mL-1 ）0.05混匀37℃水浴箱30min，取出后涂片37℃孵育暗干，然后瑞氏染色，油镜下计数200个红细胞，凡结合2个以上酵母菌为阳性，再计数花环百分率（%）.E-ICR花环试验与E-C3 bRR方法基本相同，其区别点为使用未致敏酵母菌悬液.试剂由陕西省人民医院免疫研究室提供.
1.2.3 Ag-NORs测定 无菌取静脉血0.5mL培养72h，分离固定淋巴细胞，制片染色，再用KL型肿瘤免疫图象分析计算核仁银染区面积/细胞核面积比值（I.S%）.试剂由北京开隆公司提供.
统计学处理:所有数据均用x ±s表示，用t检验.
2 结果
2.1 子宫内膜癌患者T细胞亚群测定结果 （Tab1） 子宫内膜癌患者CD+3 T细胞，CD+4 T细胞，CD+4 /CD+8 比值，低于正常对照组;CD+8 T细胞高于正常对照组，差异均有显著意义（P&<0.01）.
表1 子宫内膜癌患者T细胞亚群测定结果 略
2.2 子宫内膜癌患者E┐C3 bRR（%），E┐ICR（%）和I.S%测定结果 （Tab2，Fig1） 子宫内膜癌患者E-C
3 bRR（%），I.S%减低，E-ICR%增高，与正常对照组比较（P&<0.01）.
表2 子宫内膜癌患者E-C3 bRR（%），E-ICR（%）和I.S%测定结果 略
3 讨论
肿瘤的发生、发展与免疫功能密切相关，机体的抗肿瘤免疫则以细胞免疫占主导地位.淋巴细胞免疫具有极其重要的作用［1］ .T细胞执行特异性细胞免疫和免疫调节功能，CD+4 T细胞和CD+8 T细胞代表其两个主要亚群.正常情况下，两者处于动态平衡.当两者数量发生变化，破坏了这种平衡机制，可导致细胞免疫功能紊乱和免疫失调.本研究显示子宫内膜癌患者CD+3 T细胞，CD+4 T细胞，CD+4 /CD+8 比值减低，CD+8 增高，构成了子宫内膜癌T细胞亚群的特点.表明T细胞亚群与子宫内膜癌有一定关系，与文献报道相似［2］ .子宫内膜癌患者CD+4 /CD+8 比值减低，其原因是由于CD+4 细胞减少或CD+8 细胞增高，可能是由于TH细胞减少，TS细胞增高，负调节作用大于正调节作用，导致子宫内膜癌患者淋巴细胞免疫功能降低.
红细胞免疫功能是通过红细胞表面的CR1 和E-CR3 将癌细胞携带至肝脾加以消毁;通过CD58 ，CD59 ，CR1 ，CR3 与淋巴细胞、吞噬细胞上的CD2 ，CR1 ，CR2 ，CR3 相互作用，参与免疫调控［3］ .我们检测了子宫内膜癌患者及正常人的E-C3 bRR（%）和E-ICR（%），发现子宫内膜癌患者E-C3 bRR（%）低于正常对照组（P&<0.01）.其原因可能为子宫内膜癌患者血清中存在着抑制因子，导致红细胞CR1 分布密度降低，或抑制了CR
1 的活性，从而使C3 b粘附的肿瘤细胞结合减少.而子宫内膜癌患者E-ICR%明显高于正常对照组（P&<0.01）.其主要原因为红细胞膜表面E-C3 bRR分布密度下降，使单核-巨噬细胞不能及时有效地吞噬和清除红细胞表面携带的免疫复合物（IC），从而导致大量IC在血循环中沉积.Virella［4］ 等证实红细胞对机体的体液免疫，细胞免疫都有一定的调节作用，且多与红细胞膜表面E-C3 bRR分布有关.因此，子宫内膜癌患者的E-C3 bRR（%）减低，无疑使T，B细胞的调控失去平衡，而导致整个免疫系统功能降低［5］ .
Ag-NORs是核仁组成区嗜银蛋白的简称，它是位于第13，14，15，21及22号染色体上特殊部位的核糖体基因（rDNA），通过其转录而形成核糖体RNA.Ag-NORs可能是RNA聚合酶的亚基，起保持rD-NA链延伸的作用，对核糖体蛋白的形成及蛋白质合成起至关重要的作用［6，7］ .故Ag-NORs可作为核仁组成区及其rDNA转录活动的标志，用来反映核仁结构和功能的变化［8］ .淋巴细胞免疫功能可由各自的rDNA转录活性表达出来，基于此原理，我们对21例子宫内膜癌患者与20例健康人进行检查，发现I.S%明显下降，可能同机体免疫功能受到抑制有关.这一结果与子宫内膜癌患者T细胞亚群、红细胞免疫功能检测结果相一致.
以上研究认为Ag-NORs的检测联合T细胞亚群、红细胞免疫功能的检测能较全面的反映子宫内膜癌患者的免疫功能状态，对了解病情、指导治疗有一定的作用.
参考文献:
［1］Su LY，Xu YD，Geng YZ.Preliminary study on lymphocyte subsets and tumor immunology ［J］.J Immunol，1992:8（4）;251-253.
［2］Yin FB，Tang CS，Zuo CT.Preipheral T-cell subpopulations and NK cell activities in patients with ovarian malignant tumors ［J］.Shiyong Fuchan Ke Zazhi（J Pract Obstet Gynecol），1997;13（3）:145-147.
［3］Deckert M，KuBar J，Bernar A.Functional cooperation between CD58 and CD59 in adhesion of T cell ［J］.J Immunol，1992;148（3）:672-677.
［4］Virella G，Rugeles MT，Hyman B，Via M，Goust J，Frankis M.The interaction of CD2 with it SLFA-3ligand expressed by autologous erythrocytes results in ehancement of B cell respons-es ［J］.Cell Immunol，1988;116（2）:308-400.
［5］Fearon Dt.Identification of the membrancer glycoprotein that is the C3 b receptor of the human erythrocyte，polymorphnuclear leukocyte，B lymphocyte and monocyte ［J］.J Exp Med，1980;152（1）:20-24.
［6］Egan MJ，Crocker J.Nucleolar organizer regions in cutaneous tumors ［J］.J Pathol，1988;154（3）:247-253.
［7］Anonymous.NORs-a new method for the pathologist ［J］.Lancet，1987;1（11）:1413-1414.
［8］Plotton D，Menagger M，Jeannesson P，Himber G，Pigeon F，Adnet J.Improvement in the staining and in the visualization of the argyrophilic protein of the nuclelar organizer at the optical level ［J］.Histochem J，1986;18（1）:5-14.