【关键词】 九节龙皂甙
关键词: 九节龙皂甙;细胞凋亡;流式细胞术;Hela
0 引言
细胞凋亡（Apoptosis）是一种生理性细胞程序化死亡，与肿瘤的发生、发展密切相关，已成为当前肿瘤研究的新热点.九节龙皂甙是从川产九节龙全草中提出的单体［1］ ，我们观察九节龙皂甙诱导Hela细胞凋亡，采用流式细胞术（flow cytometry，FCM）进行分析，结果如下:
1 材料和方法
1.1 细胞系及细胞培养 人宫颈癌细胞株（Hela）为上皮样癌细胞，本校403研究所提供.细胞培养方法见
参考文献
［2］.1.2 细胞凋亡的诱导和分析 实验组分别以1.56～50.0μg・mL-1 九节龙皂甙（本校药物研究所提供）作用Hela细胞（106 ・mL-1 ）0～72h，未经过药物处理的细胞为阴性对照组，加入等量培养液（100mL・L-1 胎牛血清的RPMI1640培养液）中细胞常规培养，按作用不同时间，分别收集细胞，经PBS洗涤2次，加入-4℃700mL・L-1 乙醇固定过夜，离心收集细胞，再经PBS洗涤后，依次加入膜穿孔剂，溴化乙锭（PI）和Rnase4℃染色30min，350目筛网过滤，Epics-profileⅡ流式细胞仪（美国Coulter公司）上进行DNA含量及细胞周期分析. 转贴于 2 结果
细胞凋亡过程中，核内DNA被降解成寡核苷酸片断，经PI染色后可直接观察到细胞DNA含量变化.染色的小分子DNA在细胞周期分布图中，形成正常二倍体细胞DNA峰（G1 峰）之前的亚二倍体峰，即Apoptosis峰（亦称Ap峰），是凋亡细胞核固缩及DNA降解的结果，根据Ap峰可测凋亡细胞占细胞总数的比例.图1示6.25mg・L-1 作用48h后G1 峰前出现凋亡峰，占细胞总数的34.5%，而阴性对照组细胞G1 峰无凋亡峰出现（图2）.
图1 －图2 略
3 讨论
九节龙皂甙各剂量处理组随时间的增加S期（DNA合成期）及G2 期（DNA合成后期）细胞数少于阴性对照组，G1 期（DNA合成前期）细胞数较阴性对照组增加，表明九节龙皂甙抑制了癌细胞DNA合成，使癌细胞增殖活性受到抑制.同时在计算机显示屏上动态观察到，九节龙皂甙处理48h后，随电压增高，大部分细胞碎片移动，但有部分细胞并不移动，这一现象可能是药物使Hela细胞改变了形态，体积减小所致，至于确切其机制有待进一步阐明.
参考文献
［1］张清华，王晓娟，缪振春.川产九节龙皂甙的化学研究［J］.药学学报，1993;28（9）:673-678.
［2］司徒镇强，吴军正主编.细胞培养［M］.西安:世界图书出版公司，1996:127-134.