作者：刘蓬勃 徐德忠 王歆 李玉松 王文勇
【关键词】 Fcγ受体
关键词: Fcγ受体;免疫荧光染色;胎盘
摘 要:目的 检测Fcγ受体（FcγR）在胎盘组织的分布. 方法 免疫荧光染色法结合普通荧光显微镜观察. 结果 人胎盘滋养层细胞表面存在FcγRⅢ，主要分布于滋养层细胞和绒毛间质细胞.FcγRⅡ主要存在于绒毛间质细胞.FcγRⅠ在胎盘的各层细胞均未检测到.另外，这3型FcγR在绒毛间隙的母血细胞中也存在. 结论 FcγRⅢ分布在不同的胎盘细胞，提示可能与其不同功能有关.
Keywords:Fcγreceptor;immunofluorescent staining;pla-centa
Abstract:AIM To detect the distribution of FcγR in hu-man placenta.METHODS Immunofluorescent technology and fluorescence microscopy were used.RESULTS HBsAg seropositive and seronegative placenta tissues were tested for FcγR by immunofluorescent technology.We found that FcγRⅢwas mainly expressed on trophoblast cells（TC）and vil-lous meseachymed cells（VMC），FcγRⅡonly on VMCs and FcγRⅠwas not found on any placenta cells.In addi-tion，all three types of FcγR existed in inter-villous space of mother bloodstream.CONCLUSION Three types of FcγR were found in different placenta cells，which suggests they may be in correlation with their functions.
0 引言
用木瓜蛋白酶（Papain）对免疫球蛋白（Ig）水解后，在重链第219位氨基酸将Ig分为两个Fab段和一个Fc段，细胞表面能与Fc段结合的受体称为Fc受体（Fc R），而与IgGFc段结合的受体称为Fcγ受体（FcγR）.人类Fcγ受体（FcγR）分为3类，即FcγRⅠ，FcγRⅡ和FcγRⅢ.其中FcγRⅠ表达于单核细胞和巨噬细胞，主要与IgG1和IgG3单体高亲和力结合;FcγRⅡ分布较广，人类单核/巨噬细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、B淋巴细胞、血小板等表面均发现FcγRⅡ，该受体也主要与IgG单体结合;FcγRⅢ存在于粒细胞、NK细胞、巨噬细胞及单核细胞，该受体有两种形式:一个是与磷酸酯相连的分子FcγRⅢ1，存在于血细胞表面.另一个是跨膜受体FcγRⅢ2，存在于胎盘细胞表面，只能与聚合IgG免疫复合物结合后，介导免疫复合物的跨膜转运.除人类血细胞外，甲状腺、肝脏、肾脏、胰脏、小肠、肺、子宫、皮肤等组织均不表达FcγRⅠ，FcγRⅡ和FcγRⅢ.目前仅有少数研究报道胎盘组织中存在此受体［1］ .我们的研究通过免疫荧光组织化学方法对胎盘组织各层细胞进行FcγR的检测，以期阐明FcγR在胎盘细胞的分布.
1 材料和方法
1.1 材料 标本来源:1997/1998在太原市传染病院妇产科收集乙肝表面抗原（HBsAg）阳性足月分娩胎盘组织7例，乙肝病毒（HBV）感染标志全阴性胎盘组织2例.用手术刀切取约1.5cm×1cm×2cm大小的胎盘组织（包括母面及胎儿面）浸入40g・L-1 多聚甲醛中固定后常规石蜡包埋，切成5～7μm的组织切片，65℃干烤12h，编号整理后备用.
1.2 方法 纯化的鼠抗人单克隆抗体（McAb）CD16（3G8），CD32（FLI8.26），CD64（10.1）购于深圳晶美生物工程有限公司（美国Pharmingen公司生产）;FITC标记的羊抗鼠IgG自制，并用伊文蓝进行稀释，胎盘组织切片经常规脱蜡至水后加入1∶20稀释的单抗（CD16，CD32，CD64）各50μL，放入湿盒4℃过夜后，再加入伊文蓝稀释的FITC标记的IgG50μL，放入37℃温箱数小时，PBS振洗后，缓冲甘油封片，荧光显微镜观察、照相.
1.3 对照设置 以CD16，CD32，CD64单抗代之以PBS作为空白阴性对照，以正常鼠血清代替CD16，CD32，CD64单抗作为替代阴性对照.
使用免疫荧光组织化学方法检测7例血清学HBsAg阳性的胎盘细胞FcγRⅠ，FcγRⅡ和FcγRⅢ，并在荧光显微镜上进行了观察，发现所有胎盘标本绒毛滋养层存在FcγRⅢ（CD16）（Fig1，×200），另外在绒毛间质细胞也存在该受体（Fig2，×200），但不能分清是在Hofbouer细胞还是成纤维细胞，在胎盘母面的蜕膜和绒毛毛细血管内皮细胞未检测到该受体.检测FcγRⅡ（CD32）发现，该受体存在于绒毛间质细胞（Fig3，×200），而滋养层细胞和毛细血管内皮细胞未检测到.FcγRⅠ（CD64）在胎盘的各层细胞均未检测到.另外，这三种受体均存在于绒毛间隙的母血细胞中.对血清HBV感染标志全阴性的胎盘组织检测FcγRⅠ，Ⅱ，Ⅲ（照片略），结果与HBsAg血清学阳性组织相一致，说明FcγR是胎盘细胞表面存在的固有受体，不受HBV感染与否的影响.不加FcγR单抗而代之以PBS的空白阴性对照及不加FcγR单抗而代之以正常鼠血清的替代阴性对照均无荧光显示（Fig4，×200），进一步表明本实验是可靠的，可排除假阳性结果.这说明本实验是在严格对照条件下进行的，结果是可信的.
图1 －图4 略
3 讨论
有关胎盘FcγR的检测近年来已有一些报道，检测方法和技术也比较先进.Bright等［2］ 在共聚焦显微镜上观察到FcγRⅠ（CD64）存在于足月分娩胎盘绒毛间质或成纤维细胞，FcγRⅡ（CD32）表达于胎盘毛细血管内皮细胞，而FcγRⅢ（CD16）表达于绒毛周围的滋养层，另外还发现这三型FcγR均表达于Hofbouer细胞.Nishikiori等［3］ 用间接免疫荧光和cDNA克隆方法在人胎盘滋养层观察到FcγRⅢ，而未观察到FcγRⅠ和FcγRⅡ.进一步用PCR方法对胎盘滋养层细胞的FcγRⅢcDNA克隆序列显示，与粒细胞上与磷酸酯相连的FcγRⅢ不同，胎盘滋养层细胞表面的FcγRⅢ是跨膜分子.与这些研究相比，我们也发现滋养层细胞存在FcγRⅢ，而Bright等［2］ 在绒毛间质的Hofbouer细胞、成纤维细胞观察到FcγRⅢ，我们只观察到整个间质细胞存在而不能精确定位到细胞类型.FcγRⅡ的观察也存在此问题，究其原因是因为使用的观察方法不同，我们在普通荧光显微镜下观察，而以上研究均是在共聚焦显微镜下观察.用普通荧光显微镜观察免疫荧光染色的标本，由于受到不在焦平面上荧光的干扰，造成观察结果本底较高，分辨不清组织结构.使用共聚焦显微镜可使荧光显微镜下模糊不清的结构得到准确清晰的定位［4］ .本次研究由于条件限制，我们未能使用共聚焦显微镜观察FcγR在胎盘细胞中的分布，但从普通荧光显微镜的观察结果来看，胎盘细胞确实存在FcγR，国外研究也得到相同的结论.另外，由于单抗来源困难，我们未进一步对FcγR分型，特别是FcγRⅢ进行分型以确定胎盘细胞表面的FcγR是一跨膜受体.这些不足之处有待于改进.
致 谢 太原传染病院妇产科白主任等协助收集标本;本校中心实验室王春梅老师在共聚焦显微镜技术方面给予指导.
参考文献
［1］Sedmak DD，Davis DH，Singh U，van de Winkel JG，Anderson CL.Expression of IgG Fc receptors in the human placenta and on endothelial cells in human:An immunohistochemical study ［J］.Am J Pathol，1991;138（1）:175-181.
［2］Bright NA，Ockleford CD，Anwar W.Ontogeny and distribu-tion of Fc gamma receptors in the human placenta，transport or immune surveillance ［J］.J Anat，1994;184（Pt2）:297-308.
［3］Nishikiori N，Koyama M，Kikuchi T，Kimura T，Ozaki M，Harada.Membrane-spanning Fc gamma receptorⅢisoform ex-pressed in human placental trophoblasts ［J］.Am J Reprod Im-munol，1993;29（1）:17-25.
［4］Wang CM，Huang XF，Li YS，Wang WY.Comparision of ap-plications between laser confocal scanning microscope and fluo-rescent microscop in medical research ［J］.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），1997;18（Special）:62-63.