关于胃癌组织中p16，p53和P┐糖蛋白的表达与预后

　　　　　　 作者：黄宗明　李青　晏培松　胡沛臻　马福成　王映梅

【关键词】 蛋白质p53
　　关键词: 蛋白质p53;蛋白质p16;胃癌
　　
　　摘 要:目的 探讨胃癌及癌前病变组织中p16，p53蛋白和P-糖蛋白（P-gP）的表达与预后的关系. 方法 应用免疫组化检测20例胃癌前病变、76例腺癌和10例正常组织中p16，p53和Pg-P的表达状况. 结果 p16，p53蛋白和P-gP在正常对照组、癌前病变组和腺癌组的阳性率分别90%，70%，50%;10%，20%，53%;0，5%，51%.p16，p53和P-gP在癌前病变与腺癌之间的阳性表达以及p16蛋白在临床分期Ⅰ和Ⅱb之间的表达均有显著差异（P&<0.05），但与肿瘤分化无关，而p53蛋白与P-gP阳性表达之间有显著相关（P&<0.05）. 结论 p16，p53蛋白的异常表达与胃癌的发生有关，胃癌组织中p16蛋白的低表达和p53蛋白高表达均提示该患者预后较差，其中p53蛋白的高表达也提示该肿瘤细胞对某些化疗药物具有耐药性.
　　
　　Keywords:protein p53;protein p16;stomach neoplasm
　　
　　Abstract:AIM To detect the correlation between the ex-pression status of p16，p53protein，P-glycoprotein in gastric adenocarcinoma and prognostic value as predictor.METH┐ODS 20cases of gastric precancerous lesions and76adeno-carcinomas and10normal control tissues were analyzed by immunohistochemical staining.RESULTS Positive expres-sion of p16，p53and P-gP in normal，precancerous adenocar-cinoma were90%，70%，50%;10%，20%，53%;0，5%，51%，respectively.There were significant differences of p16，p53protein and P-gP positive expression between carcinoma and precancerous lesion or normal control tissues（P&<0.05），respectively，but not for differentiation.Between clinical stageⅠandⅡb of p16protein expression there was also significant difference（P&<0.05）.There was significant association between p53protein and P-gP positive expression（P&<0.05）.CONCLUSION Abnormal expression of p16protein and p53protein are closely associated with gastric oncogenesis.High expression of p53protein or low expres-sion of p16protein in tumormay indicate a poor prognosis.The positive expression of p53protein shows that the tumor cells might be capable of resistance agains some chemothera-peutics drugs.
　　
　　0 引言
　　
　　国内外有大量文献报道抑癌基因p16，p53功能的失活、基因突变或缺失与胃癌之间的关系，但对肿瘤中p16蛋白的表达与胃癌的预后关系的报道甚少，p16，p53蛋白异常表达与胃癌预后之间的关系仍未明确.我们应用免疫组化方法对106例胃癌和癌前病变组织中的p16，p53蛋白和多药耐药基因（MDR1）编码的P-糖蛋白（P-gP）的表达进行研究，分析p53，p16蛋白之间以及它们与P-gP之间的关系，从肿瘤耐药性角度探讨p16，p53蛋白的表达与胃癌的发生、发展及预后的关系.
　　
　　1 材料和方法
　　
　　1.1 材料 收集1998-04/1999-07就诊于西京医院的胃癌切除和胃镜活检石蜡包埋标本106（男67，女39）例.其中慢性萎缩性胃炎10例和粘膜慢性胃炎伴肠型不典型增生10例，高分化管状腺癌（G1）27例、中分化腺癌23（G2）例、低分化腺癌（G3）26例，病理检查无病变的胃标本10例作为正常对照组.男女比例1 1.8，年龄28～72（45±6）岁.肿瘤的临床分期按早期（Ⅰ）未见淋巴结癌转移;中期（Ⅱ）淋巴结癌转移，Ⅱa为肿物旁淋巴结癌转移，Ⅱb远处淋巴结癌转移;晚期（Ⅲ）远处器官癌转移.p16蛋白（SA2058）mAb，p53蛋白（BP53-12）（突变型）mAb试剂盒为武汉博士德生物工程有限公司产品，P-gP（MAB-0229，鼠抗）mAb为福州迈新生物技术开发公司产品.
　　
　　1.2 方法 免疫组化染色采用SP法，具体步骤略作修改:切片脱蜡至水;100℃高压锅蒸浴抗原修复10min，室温冷却后用双氧水阻断30min;切片移置湿盒内用胰蛋白酶消化10min后滴加第一抗体，并移置冰箱过夜;置37℃复温1h;滴加第二抗体，作用30min;DAB显色（镜下观察显色结果并及时阻断）;常规脱水透明封片，镜检（在每次检测过程中均设阳性、阴性对照和空白对照）.以上染色各步均需0.01mol L，pH7.4PBS缓冲液冲洗3次.
　　
　　统计学分析采用χ2 检验.
　　
　　2 结果
　　
　　p16蛋白阳性染色主要位于胞质中，少数为胞核着色.p53蛋白阳性染色位于胞核.P-gP大部分阳性染色为胞质或胞膜着弱黄褐色（Fig1）.p16，p53和P-gP在正常对照组、癌前病变组和腺癌组的阳性率分别为90%，70%，37%;10%，20%，53%;0，5%，51%.各组间均有显著差异（P&<0.05），但不同分化的肿瘤组织间无显著差异.在肿瘤的临床分期中，p16蛋白在Ⅰ期与Ⅱb期之间的阳性表达有显著差异（P&<0.05），p53蛋白与P-gP阳性表达之间则有显著相关（P&<0.01），免疫组化结果和各组间关系（Tab1，2）.
　　
　　图1 略
　　
　　3 讨论
　　
　　p16蛋白是一种新近被分离和鉴定的多种肿瘤抑制基因的表达产物（MTSI）［1］ ，其功能与细胞周期活动密切相关.目前研究认为，p16基因在与Rb，cyclin D1/CDK4共同组成的细胞增殖调控途径中，可同cy-clin D竞争结合CDK4或CDK6，阻断或抑制cyclin D-CDK4或CDK6复合物对pRb的磷酸化，使细胞不能进入G1/S期而发挥其调节作用［2］ .胃癌组织中，p16基因经常结构上的缺失与突变，这种缺失或突变均可造成p16蛋白的异常表达或功能丧失［3］ .p16蛋白功能的丧失使CDK4活性的调节失控，进一步引起CDK4介导的Rb过度磷酸化，从而解除其产生抑制作用而导致细胞生长失控.在我们研究中，肿瘤中的p16蛋白阳性率明显低于对照组和癌前病变组，并随着组织的分化程度下降而降低，随肿瘤的分期升高而下降，在良性病变与恶性肿瘤之间以及临床Ⅰ期和Ⅱb之间的表达均有显著差异（P&<0.05），而p16与p53蛋白或与P-gP表达之间则无显著相关.结果表明p16蛋白的低表达率与肿瘤的浸润性生长和淋巴结转移有密切关系，p16蛋白的表达率可作为判断肿瘤预后的独立指标之一.

　　p53蛋白是肿瘤抑制基因p53的表达产物.p53基因突变与胃粘膜细胞的癌变密切相关［4］ ，其突变主要发生在相对保守区的第5～8外显子（相当于p53蛋白与DNA结合区域）上的点突变和等位基因缺失，这种突变使p53核心区域空间构像发生变化，影响与DNA的结合和p53的磷酸化，造成p53失去正常的转录调控和对受损DNA的校正修复功能，导致组织细胞的异常增殖，乃至肿瘤的发生.在胃癌的研究中有文献［5，6］报道，晚期胃癌中的p53表达水平明显高于早期胃癌;过度表达突变型p53蛋白的胃癌肿瘤细胞的增殖活性较高，其术后的5a生存率明显低于p53蛋白未表达者，这种差异与胃肿瘤组织中的血管形成和肿瘤细胞的增殖活性有关［7］ .在本研究中，p53蛋白在癌前病变组织中的阳性率为20%（4/20），肿瘤的阳性率为54%（41/76），两者之间有显著差异（P&<0.05），p53蛋白的表达虽然在肿瘤的分化程度、肿瘤的临床分期之间无显著差异（P&>0.05），但（Tab1，2）显示其阳性率随组织分化程度的下降而增高，随肿瘤的分期增高而上升.
　　
　　表1 各组p53，p16蛋白和P-gP的阳性表达　略
　　
　　表2 p53，p16蛋白的阳性表达与肿瘤的临床分期　略
　　
　　P-gP是一种多药耐药基因（MDRI）编码的、具有能量依赖性药物流出泵功能的跨膜蛋白，能将肿瘤 细胞内的化疗药物泵出细胞外，导致细胞内药物浓度降低、毒性作用减弱或丧失，细胞从而产生耐药性.Benhattar等［8］ 认为，p53基因突变的患者对5-Fu不敏感，其术后生存期与不用5-Fu者无明显差异，表明p53状态与化疗药物疗效有密切关系.Cascinu等［9］ 也研究表明，p53蛋白免疫组化染色阴性的肿瘤细胞对化疗药物的敏感性显著高于p53蛋白阳性.本研究中，P-gP的阳性表达在胃腺癌的分化程度、临床分期之间无显著差异，但与p53蛋白的阳性表达显著相关（P&<0.05），表明p53蛋白阳性的肿瘤细胞对某些化疗药物具有较低的敏感性，这可能是其预后较差的主要原因之一.
　　

参考文献

　　
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