关键词: 基质金属蛋白酶-2;CD147;免疫组化;卵巢肿瘤
摘 要:目的 了解基质金属蛋白酶（MMP-2）及CD147在卵巢良、恶性上皮性肿瘤中的表达，探讨其与卵巢癌转移发生的关系. 方法 用免疫组化SP法对47例卵巢癌组织、19例交界性上皮性卵巢肿瘤、17例良性上皮性卵巢肿瘤组织中MMP-2及CD147的表达情况进行了检测. 结果 MMP-2在恶性及交界性上皮性卵巢肿瘤中的强阳性表达率分别为59%，42%，明显高于良性组强阳性表达率30%（P&<0.05），在卵巢癌中MMP-2的表达与卵巢癌的临床分期有关，Ⅲ～Ⅳ期卵巢癌强阳性表达率71%，明显高于Ⅰ～Ⅱ期卵巢癌强阳性表达率37%（P&<0.05），与分化程度无明显关联，但有淋巴结转移的病例强阳性表达率87%，明显高于无淋巴结转移组.CD147在恶性及交界卵巢上皮性肿瘤中的强阳性表达率分别为64%，57%，而良性组则未见CD147的表达.在卵巢癌中，CD147的强阳性表达率与临床分期有关，Ⅲ～Ⅳ期的癌组织强阳性表达率74%，明显高于Ⅰ～Ⅱ期强阳性表达率45%，在不同分化程度卵巢癌组织中CD147的强阳性率无明显差异，有无淋巴结转移的卵巢癌组织中CD147强阳性表达率差异显著. 结论 MMP-2及CD147均与卵巢癌的分期及淋巴结转移有关，CD147与MMP-2的产生关系密切.
Keywords:matrix metalloproteinase-2;CD147;immunohis-tochemistry;ovarian epithelial tumor
Abstract:AIM To investigate the expression of matrix met-alloproteinase-2（MMP-2）and CD147in ovarian epithelial tumor.METHODS The expression of MMP-2and CD147was detected in malignant，borderline and benign ovarian tis-sues by immunohistochemical SP method.Monoclonal anti-bodies against MMP-2and CD147were used.RESULTS In-tense expression rates of MMP-2in the malignant，border-line，benign epithelial tumor tissues of ovary was59%，42%，30%respectively，There were a significant difference between malignant，borderline and benign tumors（P&<0.05）.In ovarian cancer，the expression of MMP-2had a significant relevance to clinical phases and lymph node metas-tasis.The intense expression rate（71%）in phasesⅢ～Ⅳof ovarian cancer was much higher than that in phasesⅠ～Ⅱ（37%）;no relevance was observed with pathological grades.The intense expression rates of CD147in the malignant，bor-derline，benign ovarian epithelial tumor were64%，57%，0respectively.Significant difference was observed between ma-lignant，borderline and benign ovarian epithelial tumor.In o-varian cancer，the expression of CD147was associated with clinical phases;the intense expression rate（74%）in phasesⅢ～Ⅳof ovarian cancers was much higher than that in phas-esⅠ～Ⅱ（45%）.18of23cases with lymph node metastasis had intense expression of CD147，while only12of24cases without lymph node metastasis had intense staining of CD147.No association was observed with pathological grades.CONCLUSION Both MMP-2and CD147have rele-vance to clinical phases and lymph node metastasis of ovarian cancer，but CD147isn’t the unique factor in increasing the expression of MMP-2to contribute to the metastasis of ovari-an cancer.
0 引言
卵巢癌是妇科常见恶性肿瘤，由于70%患者就诊时已属晚期，常形成难治的复发及转移，故也是妇科恶性肿瘤的首要死因.肿瘤细胞从原发瘤脱离形成转移灶的过程中，需要反复降解细胞外基质及基底膜构成的自然屏障，因此能降解细胞外基质及基底膜的酶的产生与卵巢癌的转移密切相关.基质金属蛋白酶（MMP-2）由于能降解细胞外基质的主要成分Ⅳ型胶原，被认为在肿瘤的转移中发挥重要作用［1］ .CD147则由于能刺激基质金属蛋白酶的产生亦有利于肿瘤细胞的转移.我们利用免疫组化法检测MMP-2及CD147在卵巢上皮性肿瘤中的表达以探索MMP-2及CD147与卵巢癌转移发生的相关性.
1 材料和方法
1.1 材料 收集西京医院妇科1993-01/1999-03住院患者83例，均为初诊，术前未经化疗及放疗.其中良性上皮性卵巢肿瘤17（浆液性10，粘液性7）例，交界性上皮性卵巢肿瘤19（浆液性11，粘液性8）例，卵巢癌47（浆液性癌33，粘液性癌11，子宫内膜样癌2，透明细胞癌1）例.83例标本均经手术切除.卵巢癌按细胞分化程度采用三级分类法，Ⅰ级12例，Ⅱ级16例，Ⅲ级19例.临床分期按1985年FIGO分期标准分期，Ⅰ～Ⅱ期16例，Ⅲ～Ⅳ期31例.淋巴结转移23例.
1.2 主要试剂 MMP-2单克隆抗体，SP超敏试剂盒购自福州迈新公司，CD147单克隆抗体购自深圳晶美公司.
1.3 方法 标本均经40g L-1 多聚甲醛固定，常规石蜡包埋，作5μm连续切片，分别进行HE染色及免疫组化染色.切片常规脱蜡至水，h3 O2 灭活内源性过氧化物酶，微波修复抗原，正常山羊血清封闭，分别滴加MMP-2单抗及CD147单抗，4℃过夜，滴加生物素化二抗及过氧化物酶标记的抗体，DAB显色，苏木精复染，脱水透明封片.将MMP-2及CD147染色阳性的卵巢癌组织作为阳性对照，阴性对照选择PBS代替一抗.
1.4 判断标准 MMP-2以细胞质呈清晰棕黄色为阳性，CD147以胞膜及胞质呈棕黄色为阳性.根据显色强度及范围分为:阴性（-）:无阳性细胞染色;弱阳性（+）:阳性细胞小于50%或显色浅;强阳性（）:切片中阳性细胞大于50%或显色深.
统计学处理:采用χ2 检验.
2 结果
2.1 MMP┐2及CD147在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达 MMP-2表达在卵巢上皮性肿瘤细胞的胞质（Fig1），在良性、交界性卵巢上皮性肿瘤及卵巢癌组织中的强阳性表达率分别为30%，42%和59%，阳性表达率分别为59%，90%和95.8%，均呈梯度增高，交界性及卵巢癌组织中的强阳性表达率及阳性表达率与良性组相比差异均有显著性（P&<0.05），恶性与交界性组强阳性表达率及阳性表达率相比差异不明显.CD147的表达为浆膜型（Fig2），在恶性、交界性及良性卵巢上皮性肿瘤组织中的强阳性表达率分别为 64%，57%和0，阳性表达率分别为79%，74%及0.交界性及卵巢癌组织中的强阳性表达率及阳性表达率与良性组相比差异显著（P&<0.05），恶性与交界性组强阳性表达率及阳性表达率无明显差异（Tab1）.
图1 － 图2 略
表1 各类卵巢上皮性肿瘤组织中MMP-2及CD147的表达 略
2.2 卵巢癌不同临床期别的MMP┐2及CD147的表达 47例卵巢癌中，MMP-2及CD147的表达情况与临床分期的关系（Tab2）.其中MMP-2在Ⅰ～Ⅱ期与Ⅲ～Ⅳ期的强阳性表达率差异明显（P&<0.05），但阳性表达率与临床期别无关.CD147在卵巢癌组织中的强阳性表达率及阳性表达率均与卵巢癌的临床分期有关（P&<0.05）.
表2 不同临床期别卵巢癌组织中MMP-2和CD147的表达 略
2.3 MMP┐2及CD147表达与组织学分级及淋巴结转移的关系 47例卵巢癌中，MMP-2及CD147与卵巢癌病理分级及淋巴结转移的关系（Tab3）.MMP-2在癌组织中强阳性表达率及阳性表达率与卵巢癌的病理分级均无关，但有淋巴结转移的癌组织MMP-2强阳性表达率明显高于无淋巴结转移组（P&<0.05），而MMP-2的阳性表达率高低与有无淋巴结转移关系不明显.CD147在卵巢癌组织中的强阳性及阳性表达情况与卵巢癌的病理分级均无关.23例有淋巴结转移的病例CD147的强阳性表达率及阳性表达率均高于无淋巴结转移的癌组织（P&<0.05）.
2.4 MMP┐2及CD147在卵巢癌中表达的相关性 MMP-2及CD147的联合表达率为66%，多同时表达，强阳性表达率二者相比差异不明显，但MMP-2阳性表达率95.8%明显高于CD147的阳性表达率72%（P&<0.05）. 转贴于 3 讨论
基质金属蛋白酶（MMPs）是一组结构和功能相关的锌离子依赖性内肽酶，至少由20种能降解细胞外基质的酶类组成［2-4］ .MMP-2是其中一种，它以无活性的前体形式产生，激活后可以分解基底膜的主要成分 Ⅳ型胶原［5，6］ .因此除在正常的胚胎发育、器官发生、血管形成及子宫复旧等生理过程中参与细胞外基质调节［7，8］ 外，在肿瘤的转移发生中也具有重要意义.当MMP-2表达升高时，肿瘤的转移能力增强［9，10］ .我们的实验证明，随着卵巢癌分期的升高、肿瘤细胞的播散，MMP-2的强阳性表达亦升高.但未发现MMP-2表达过量与肿瘤的组织学分级之间的明显相关性.另外，交界性卵巢上皮性肿瘤与卵巢 癌中MMP-2的表达亦无明显差异，这也从一个侧面解释了分化较好的癌组织在临床上却常发生腹腔播散及淋巴结转移［11］ .
表3 MMP-2和CD147在卵巢癌中的表达及其与组织学分级和淋巴结转移的关系 略
CD147是分子量为50～60ku的跨膜糖蛋白，属免疫球蛋白超家族成员，主要功能为参与细胞-细胞或细胞-基质的粘附［12］ .CD147作为细胞外基质金属蛋白酶刺激物（EMMPRIN），具有刺激肿瘤细胞周围间质成纤维细胞分泌Ⅳ型胶原酶的能力，促进肿瘤细胞的转移［13，14］ .我们的实验显示，随着肿瘤临床分期的增高、淋巴结的转移，CD147的表达亦增强，这说明CD147的表达的确与肿瘤的转移有一定关联.且CD147与MMP-2多同时表达，联合表达率为66%，强阳性表达率之间无明显差异，说明CD147确能促进MMP-2的产生.但MMP-2表达阳性率较高却与临床分期无关，而CD147的阳性表达率较MMP-2低且与临床分期有关，同时良性上皮性卵巢肿瘤无CD147表达却有MMP-2表达均说明CD147主要与病理状态下MMP-2的产生有关.至于MMP-2的表达阳性率高于CD147可能与生理状态下MMP-2的产生有关，也可能与除受细胞-细胞间相互接触的影响外的其他因素有关［15］ .
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