关于复方中药CCM┐AT13抗胃癌SGC┐7901细胞作用机制

作者：李永琦，许才绂，黄裕新，赵国宁，王庆莉

【关键词】 胃肿瘤
　　关键词: 胃肿瘤;中药;MTT
　　摘 要:目的 研究科室自组复方中药CCM-AT13对胃癌细胞及正常细胞的作用. 方法 与华蟾素、5-FU对比，通过MTT法研究CCM-AT13对胃癌细胞的杀伤作用. 结果 10mg・L-1 CCM-AT13，5-FU与华蟾素的杀伤率分别为（87.2±3.3）%，（34.5±3.0）%与（29.7±1.7）%，CCM-AT13具有较强的杀伤肿瘤细胞作用，杀伤率明显高于5-FU与华蟾素，而对人血管内皮细胞与大鼠血管平滑肌细胞杀伤作用较弱. 结论 CCM-AT13抗肿瘤作用明显，具有极大的临床应用价值.
　　Keywords:stomach neoplasm;medicine，Chinese tradition-al;MTT
　　
　　Abstract:AIM To investigate the effects of a compound Chinese traditional medicine（CCM-AT13）on gastric cancer cell and normal cells.METHODS MTT assay and cytocidal rate were employed.RESULTS Cytocidal rates of of CCM-AT13，5-FU and Huachansu at10mg・L-1 concentration were（87.2±3.3）%，（34.5±3.0）%and（29.7±1.7）%re-spectively.Cytocidal rate of CCM-AT13was markedly high-er than that of5-FU and Huachansu injection.CONCLU┐SION CCM-AT13has potent antitumor effects and great clinical value.

　　0 引言　　
　　中药治疗肿瘤在我国已有悠久历史，近年来，世界各国对中草药抗肿瘤的机制进行了广泛的研究［1，2］ .胃癌是我国常见恶性肿瘤之一，目前对于半数无法手术切除的中晚期胃癌及术后患者联应用联合化疗方案治疗效果并不理想［3，4］ ，寻找更有效的治疗胃癌手段，改进胃癌治疗现状是目前抗肿瘤研究的重要课题之一.我科根据胃癌解剖学特点结合中医外科学知识自组复方中药并制备成注射剂CCM-AT13，成分为皂角刺、乌梅、白芨与大黄.我们研究目的是用MTT实验［5-7］ 将结果与华蟾素、5-FU作对比，以了解CCM-AT13对SGC-7901细胞、人血管内皮细胞与大鼠平滑肌细胞的作用.
　　
　　1 材料和方法
　　
　　1.1 材料
　　人胃癌SGC-7901细胞系（本校西京医院消化病研究所提供，本室传代保存）;人血管内皮细胞、大鼠血管平滑肌细胞（本校唐都医院高血压研究室培养提供）;复方中药CCM-AT13注射液（本科研究组方并制备的注射剂，由皂角刺、乌梅、白芨与大黄四味组成，质量比例为2∶2∶1∶1，每毫升含原生药0.5g，色淡黄，透明，pH6.5）;华蟾素注射液（Huachansu，中国淮北生化制药厂）;5-FU针剂（天津河北制药总厂）;MTT试剂（美国Sigma公司）;RPMI1640细胞培养液（美国Gibco公司）.
　　
　　1.2 方法
　　人胃癌SGC-7901细胞在37℃，50mL・L-1 CO2 孵箱内培养，于含100g・L-1 小牛血清的RPMI1640细胞培养液中贴壁生长，以EDTA-胰酶混合液消化传代.将呈对数生长的细胞分别以1×108 ・L-1 （人胃癌SGC-7901细胞、人血管内皮细胞）与5×108 ・L-1 （大鼠血管平滑肌细胞）接种于96孔板上，每孔100μL，然后按一定的浓度梯度分别加入复方中药、华蟾素与5-FU，每一浓度加4孔，每孔100μL，对照组加同量的培养液，调零组只加培养液200μL，孵育48h后，每孔加入50μL MTT（2g・L-1 ），继续孵育4h，然后倾去所有液体，每孔再加入DMSO150μL，以酶联免疫仪490nm波长测定各孔A（OD）值，计算不同药物不同浓度下培养细胞的存活率［SR=（用药组A（OD）值/对照组A（OD）值）×100%］［8］ 及药物对细胞的杀伤率（CR=1-SR）.
　　
　　统计学处理:采用SPLM统计软件（本校预防医学系统计学教研室提供）进行统计处理.
　　
　　2 结果
　　
　　2.1 存活率与药物浓度曲线
　　以细胞的存活率和药物浓度绘制曲线可见SGC-7901细胞的存活率随3种药物的浓度增加而下降，CCM-AT13在2mg・L-1 浓度水平即可达到&>50%的杀伤率，5-FU与华蟾素的IC50 值均&>10mg・L-1 （Fig1）.
　　2.2 复方中药CCM┐AT13对人胃癌SGC┐7901细胞的杀伤作用
　　在每同一浓度水平，CCM-AT13对人胃癌SGC-7901细胞的杀伤作用都明显高于华蟾素与5-FU（P&<0.05，Fig2），华蟾素与5-FU作用相差不显著（P&>0.05）.在10mg・L-1 浓度水平，CCM-AT13，5-FU与华蟾素的杀伤率分别为（87.2±3.3）%，（34.5±3.0）%和（29.7±1.7）%.
　　
　　2.3 复方中药CCM┐AT13对人血管上皮细胞、大鼠血管平滑肌细胞的作用
　　复方中药在10mg・L-1 ，50mg・L-1 浓度水平对培养的人血管内皮细胞、大鼠血管平滑肌细胞的杀伤作用明显低于对人胃癌SGC-7901细胞的杀伤作用（P&<0.01），CCM-AT13在10mg・L-1 浓度水平对人胃癌SGC-7901细胞、大鼠血管平滑肌细胞与人血管内皮细胞的杀伤率分别为（87.2±3.3）%，（19.2±1.7）%与（15.3± 2.1）%（Fig3）.
　　
　　在50mg・L-1 浓度水平，CCM-AT13与华蟾素对人胃癌SGC-7901细胞的杀伤率分别为100%和（56.9±3.1）%（P&<0.01）.
　　
　　3 讨论
　　
　　体外肿瘤细胞培养和MTT实验是目前肿瘤药物筛选一种有效、快捷的方法.通过该种方法不仅可以发现有效的抗肿瘤药物，而且还可以从细胞水平和分子水平对抗肿瘤机制进行研究
［9-12］ ;在临床上可以指导肿瘤临床用药和调整用药组合，减少肿瘤多药耐药性的发生［13-15］ .中药抗肿瘤作用已经得到证实，从中草药及植物中提取并用于肿瘤治疗的单体越来越多，同时中药的复方作用也已开始得到承认和重视［16］ .南美抗肿瘤药物研发办公室制定的植物提取物抗肿瘤的有效性标准为IC
　　 50 ≤50mg・L-1［17］ . 转贴于 　　CCM-AT13是由皂角刺、乌梅、白芨与大黄四味中药按2∶2∶1∶1质量比例组成，经过中药注射液提取工艺流程制备而成的注射剂.根据中医理论，皂角刺辛散温，性锐利能直达病所，具有消肿托毒排脓之功效;乌梅酸涩性平，可开胃消食，去青黑痣，蚀恶肉;白芨能消肿生肌，收敛止血;大黄攻积导滞，逐瘀通经，四味中药合用可达到中医祛腐生新治疗肿瘤的效果.CCM-AT13的IC50 ≤2mg・L-1 ，证明CCM-AT13具有较强的杀伤人胃癌SGC-7901细胞作用［17，18］ ，杀伤效应符合一级动力学，在不同浓度水平杀伤率皆明显高于5-FU与华蟾素.
　　
　　CCM-AT13对恶性增殖的人胃癌SGC-7901细胞杀伤作用明显大于对培养的正常细胞杀伤作用，说明CCM-AT13主要杀伤增殖活跃的肿瘤细胞，而对增殖缓慢的正常细胞杀伤作用较弱，当CCM-AT13剂量达到50mg・L-1 时，对人胃癌SGC-7901细胞杀伤率达到100%，产生绝对杀伤效应，但仍不能全部杀灭培养的正常细胞，这说明CCM-AT13可能对正常细胞毒性作用较小，且无抗血管生成作用.
　　CCM-AT13与5-FU、华蟾素相比，具有较独特的抗肿瘤作用，具有较大的临床应用价值，有待进一步研究.
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