作者：赵保民，黄裕新，赵宁侠，刘梅，尚磊，黄梅，王庆莉
【关键词】 电针
关键词: 电针;足三里;胃酸;胃肠激素
摘 要:目的 探讨电针足三里穴对大鼠胃酸分泌的调控机制. 方法 75只SD大鼠随机分为5组，在清醒状态下针刺双侧足三里穴，以空白对照、非经非穴作对照，三阴交穴作经穴对照.同步测定胃液量、pH值及胃液酸度，放免法测定血浆、胃液、胃粘膜胃泌素（Gas）和表皮生长因子（EGF）含量，透射电镜观察胃粘膜腺细胞超微结构. 结果 电针刺激足三里穴后大鼠空腹胃液量明显减少［（0.30±0.11）vs（0.63±0.12）mL，P&<0.01］，胃液酸度明显降低［（30±3）vs（41±1）mmol L-1 ，P&<0.05］，胃液pH升高.胃粘膜Gas含量增多［（136±17）vs（73±4）ng L-1 ，P&<0.01］，血浆Gas含量下降［（84±22）vs（108±30）ng g-1 ，P&<0.01］，胃液Gas无变化;胃液及胃粘膜EGF含量显著升高［（3.2±1.1）vs（1.8±0.4）μg L-1 和（5.1±0.8）vs（2.4±0.4）μg g-1 ，P&<0.01］，血浆EGF无变化.胃壁细胞泌酸小管不扩张，小管泡充盈不足，且数量不减少，非经非穴组及空白对照组各项指标无显著变化. 结论 电针足三里穴抑制大鼠胃G细胞Gas释放，降低血浆Gas，增加胃粘膜、胃液EGF含量;电针足三里可改变胃壁细胞超微结构，抑制胃壁细胞泌酸小管功能、降低胃酸分泌.
Keywords:electroacupuncture;zusanli;gastric acid;gas-trointestinal hormones
Abstract:AIM To investigate the regulative mechanism of electroacupunture（EA）on gastric acid secretion in rats.METHODS SD rats（n=75）were randomized into5groups:Control group，non-point group，Sanyinjiao group，zasanli group，and unite group.All rats in consciousness were stimulated by electroacupuncture except control group.We measured the pH of fasting gastric juice as well as its vol-ume and acidity.Meanwhile radioimmunoassay was applied to assay the contents of gastrin（Gas）and epidermal grouth factor（EGF）in plasma，gastric juice and gastric mucosa tis-sue.Cellular ultra-microstructure of gastric mucosa coat was observed under a fransmission electron microscope.RESULTS After EA，it was discovered that the volume of the fasting gastric juice significantly reduced（0.30±0.11）vs（0.63±0.12）mL，P&<0.01，and the acidity of the gastric juice significantly dropped（30±3）vs（41±1）mmol L-1 ，P&<0.05，and the pH of gastric juice rose.EA stimulation of zusanli led to a drop of plasmic Gas（84±22）vs（108±30）ng L-1 ，P&<0.01，a rise of Gas in gastric mucous coats（136±17）vs（73±4）ng g-1 ，P&<0.01，but little change in Gas in gastric juice.Besides，there were some other changes ob-served.EGF of both gastric juice and gastric mucous coat in-creased（3.2±1.1）vs（1.8±0.4）μg g-1 ，P&<0.01，and（5.1±0.8）vs（2.4±0.4）μg g-1 ，P&<0.01respectively wheres plasmic EGF didn’t change，were unfilled and didn’t decrease in their number.The above indexes in non-point group were not different from those of control group（P&<0.05）.CONCLUSION EA stimulation of zusanli can inhibit Gas release，reduce Gas contents in plasma and gastric juice，enhance contents of EGF in gastric mucosa and juice，change ultra-microstructure of gastric gland cells，and inhibit the se-cretory function of acinotubules in paritetal cell.Finaly，The gastric acid secretion is decreased.
0 引言
中医认为，经络内属脏腑、外络肢节，胃与脾互为表里，相互影响，针刺经络腧穴，可激发内源性生理性调节，影响饮食的受纳、腐熟与运化.现代实验研究表明，针灸对胃酸分泌具有调节作用，可能与某些胃肠激素有关［1］ .但针刺如何调节胃肠激素的变化，是否调节脏腑细胞分子结构及超微结构，进而影响胃酸分泌，尚未见有关研究报告.我们在观察针刺后胃酸分泌变化的同时研究了胃泌素、表皮生长因子含量及受体表达情况［2］ ，观察到胃腺细胞超微结构的变化.旨在探讨电针足三里穴对大鼠胃酸分泌的调控机制.
1 材料和方法
1.1 材料
SD健康大鼠75只（本校实验动物中心提供），体质量200～250g，12～14wk，雌雄兼配，随机分为正常对照组、非经非穴组、足三里穴、三阴交穴组和联合穴位组（足三里+三阴交），共5组，每组15只.采用我们自行设计并改造的实验笼，大鼠自行钻进后关笼，在无麻醉无创伤完全清醒状态下以G6805-A型电针治疗仪（广东汕头医疗仪器厂）行电针，参数选择频率范围2～15Hz，空载电压20～35V，调制脉冲为疏密波，双下肢轻微颤抖为宜，时间30min.对照组每日按规定时间在笼内滞留30min，不行针刺.其余各组大鼠每日同一时辰电针双侧穴位，持续30min，连续3d.
1.2 方法
参照《中国兽医针灸学》和《大鼠的解剖和组织》确定穴位.足三里穴定位于大鼠后肢膝关节下方腓骨小头下约5mm处;非经非穴定位于足三里穴旁0.5cm处;三阴交定位于大鼠后肢内踝上10mm处.各实验组大鼠于电针结束前禁食24h，自由饮水，结束后即刻im846合剂1mL kg-1 .麻醉后即刻断头取血，血液置于预先加有100g L-1 EDTA20μL和抑肽酶100U的试管中，摇匀，4℃，4000r min-1 离心20min，取上清液，-70℃保存待测激素.双结扎法完整取胃，于幽门一端切开一小口，插入锑电极，读取pH值，然后抽取胃液，计量，用生理盐水稀释至2mL，100℃水煮5min，4000r min-1 离心20min，取上清液分装，-70℃保存待测激素.胃液冷冻前留0.5mL，以1g L-1 酚红为指示剂，0.01mol L-1 NaOH进行滴定，计算胃液酸度（mmol L-1 ）.取胃液后留取1.0cm×0.3cm×0.5cm胃组织块于40g L-1 多聚甲醛液中固定备用于免疫组检测.另取胃粘膜小块组织于2.5g L-1 戊二醛中固定用于透射电镜观察.其余胃粘膜放入称量瓶中，称体质后加入生理盐水1mL，沸水煮10min，加0.1mol L-1 醋酸1.0 mL，倒入匀浆管中，用离散器匀浆，取上清液0.1mL L-1 NaOH滴定pH至7.4，离心（4℃，4000r min-1 ，20min），-70℃保存待测激素.血浆、胃液及胃粘膜组织、胃泌素和表皮生长因子含量测定采用的放免盒购自北方生物技术研究所（94）卫药准字R-25号.利用均相竞争抑制原理平衡饱和法测定血浆、胃液及胃粘膜匀浆的Gas和EGF含量，严格按说明书操作进行，数据由FJ-2003-50G型γ计数仪电脑分析得出.透射电镜用胃粘膜组织标本经2.5g L-1 戊二醛固定4℃，2h，PBS反复换洗2～3h，10g L-1 锇酸固定2h，然后递度乙醇脱水，浸蜡与包埋，制作超薄切片，载于铜网，在JEM-2000EX透射电镜下观察胃壁细胞、主细胞及内分泌细胞超微结构.
统计学处理:实验数据以x ±s表示，本校统计学教研室提供的SPLM软件系统进行数据分析，两两比较方差分析，直线相关及Bartle tt方差齐性检验.
2 结果
2.1 电针后大鼠空腹胃液量、pH及胃液酸度
电针后足三里穴组和三阴交穴组空腹胃液量显著下降（P&<0.01），足三里组和联合穴组胃酸轻度降低（P&<0.05），胃液pH值升高（P&<0.05，Tab1），其余各组无明显变化.表1 电针后大鼠空腹胃液量、pH及胃液酸度（略）
2.2 电针后大鼠胃液、血浆Gas和EGF含量
足三里穴组血浆、胃液Gas均下降，三阴交穴组和联合穴位组血浆Gas降低（P&<0.01），胃液Gas升高（P&<0.01）.三阴交穴组血浆EGF降低（P&<0.05），胃液EGF升高（P&<0.01，Tab2），足三里穴组血浆EGF无变化（P&>0.05），胃液EGF增高（P&<0.01）.联合穴位组胃液EGF下降. 表2 电针后大鼠血浆、胃液和胃粘膜Gas和EGF含量（略）
2.3 电针后大鼠胃粘膜Gas和EGF含量
电针足三里使大鼠胃粘膜Gas和EGF含量均显著增加（P&<0.01），三阴交穴组胃粘膜Gas下降（P&<0.01），EGF含量升高（P&<0.05，Tab2），非经非穴组胃粘膜及联合穴位组均无显著变化.
2.4 透射电镜观察结果
正常大鼠胃壁细胞体积大，呈球形，大圆形核，细胞内大量线粒体轻度肿胀，内质网不扩张，泌酸小管数量不多，呈扩张状态，微绒毛稀疏.足三里穴组壁细胞体积最大，大球形，胞内线粒体丰富，明显肿胀，内质网多且明显扩张，泌酸小管及小管泡充盈不足，不扩张，微绒毛密集拥挤.三阴交穴组壁细胞胞质疏松空虚，线粒体无明显肿胀，滑面内质网不扩张，泌酸小管呈扩张状态，充盈，微绒毛稀疏.
针刺对胃分泌机能的影响，无论在人还是动物身上，研究报道较多，但所得结果并不一致.中医临床实验研究认为，对健康人针刺足三里可使胃酸分泌下降［3］ ，在疾病状态下针刺足三里则具有双向调节作用［4］ .以正常实验动物为对象的研究中，多数实验结果是抑制胃酸分泌，如对带有胃瘘的狗进行慢性实验，针刺足三里可使碳酸氢盐和钠分泌增加，而胃酸分泌减少，胃液酸度从（48±12）mmol L-1 下降到（8±3）mmol L-1 ，即使在Ach负荷时，也使电针足三里大鼠胃酸分泌减少，pH升高.但也有报告使胃酸和胃蛋白酶明显增加，恒健生等观察到电针后胃酸排出量明显升高，停针后40min才接近针前水平.本实验参照恒健生采用的电针参数，结果足三里组不仅胃液量减少，胃酸度也明显下降，表明电针足三里对清醒大鼠胃酸分泌具有明显抑制作用，其他研究报告也有类似结果
［5，6］ .
中医理论认为足阳明胃经属胃络脾，足太阴脾经属脾络胃，二者一阳一阴，一脏一腑，构成表里相合关系，相互作用，互相影响.本实验结果表明针刺足三里引起胃液量下降，pH升高，胃酸度下降，针刺三阴交穴，胃液量减少，但不降低胃液酸度，说明二穴对胃酸分泌其有不同的影响.联合刺激二穴胃液酸度降低和pH升高，胃液量不减少，提示二穴联合抑制胃酸分泌同时，提高胃粘液分泌.与中医关于足三里为强壮穴和保健穴的认识相一致.三阴交作为配穴治疗疾病亦有重要的临床意义.现代研究表明，胃肠肽类激素在调节胃酸分泌机制中具有重要作用，在针刺对胃酸分泌的调节中占主导地位.Jin［7］ 针刺足三里引起狗胃酸分泌减少，同时血液中生长抑素（SS），血管活性肽（VIP）和内啡肽含量增加.针刺狗足三里G细胞胃泌素含量增加，而血浆Gas下降.针刺人足三里穴后血清Gas水平增高，而胃蛋白酶原下降，胰多肽释放受抑制，生长抑素和胃动素无变化.孙大勇等［8］ 电针狗足三里穴血浆及胃粘膜Gas均增高，生长抑素、蛙皮素含量下降.我们观察到针刺大鼠足三里胃酸分泌下降，同时血浆Gas及胃液Gas减少，胃粘膜Gas增高.综上所述，电针足三里使胃粘膜Gas贮存增高，抑制G细胞胃泌素释放入血及胃腔.由于循环Gas对靶细胞发挥抑酸作用，因而血浆胃泌素减少是电针足三里抑制胃酸分泌作用的重要因素之一.
EGF是近年来重点研究的又一重要胃肠激素，不仅具有对胃肠粘膜的营养作用，还具有抑酸作用.它主要来源于颌下腺，也来源于贲门腺、胃腺、食管腺［9］ 和十二指肠腺.动物实验发现切除小鼠颌下腺胃液EGF含量下降，醋酸诱发的鼠胃溃疡愈合明显延缓，给予外源性EGF后加速溃疡愈合［10］ .研究认为EGF通过诱导细胞DOC（乌氨酸脱羧酶）活性和增加多胺合成来抑制组织胺刺激的壁细胞泌酸功能［11］ .同时直接作用于壁细胞及调节G细胞释放胃泌素［12］ 因而具有抑酸作用.本实验发现电针足三里血浆EGF无变化，但胃液及胃粘膜EGF含量明显增加.由于EGF主要通过腔面作用于粘膜细胞其次通过旁分泌作用于壁细胞，因而认为胃液EGF及胃粘膜EGF增加在电针抑酸作用中发挥一定作用.
经络与脏腑相关，形态与功能相联系［13］ .推测电针足三里抑制胃酸分泌，必然影响大鼠壁细胞泌酸过程.但尚未见国内外相关文献报告.本实验观察到电针足三里后大球形壁细胞内线粒体肿胀，有大量的粗面内质网和滑面小管泡扩张，说明壁细胞功能很活跃，同时发现泌酸小管不扩张，管内液量相对不足，管状囊泡缩小，微绒毛短，相互靠近，但囊泡数量不减少，提示分泌小管功能低下，壁细胞处于酸分泌静止期.有人观察到，当壁细胞兴奋后，酸分泌旺盛，小管泡数量迅速减少，同时顶端胞膜逐渐扩展，分泌小管分支并与细胞顶端配合，分泌小管壁上微绒毛延长变密，产生泌酸效应.我们未观察到这些现象.一般认为泌酸小管扩张，泌酸表面积增大提示产酸多或有酸积累，本实验中对照组和三阴交穴组泌酸小管均处于扩张状态，而足三里组相对不扩张，因此证明电针足三里抑制了壁细胞产酸及泌酸小管的排酸功能，因而胃酸分泌下降.综上所述，电针足三里抑制大鼠胃酸分泌，可通过减少血浆及胃液Gas，增加胃液及胃粘EGF含量，抑制壁细胞泌酸小管功能，而达到抑酸作用.但目前针刺研究中观察到的肽类激素有限，而激素间相互关系又很复杂，因此有待进一步探讨.
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