作者：范风云，惠延平，张新龙，朱晓慧
【关键词】 膀胱肿瘤
关键词 :膀胱肿瘤;脱噬作用;放射疗法;辐射耐受性
摘 要:目的 研究膀胱移行细胞癌的细胞凋亡与放疗敏感性的关系. 方法 光镜观察41例原发性膀胱移行细胞癌放疗前肿瘤组织细胞凋亡指数（AI）、分裂相指数（MI）及放疗后组织坏死程度. 结果 膀胱移行细胞癌AI和MI随肿瘤分化程度降低而增高，各组织学分级之间有显著性差异（P&<0.01），放疗后组织坏死程度亦随癌组织分化程度降低而加重，各组织学分级之间差异显著（P&<0.01）. 结论 分化越差的膀胱移行细胞癌增殖活性和细胞凋亡数越高，对放疗越敏感.AI可以作为选择放疗的一项指标.
Keywords:bladder neoplasms;apoptosis;radiotherapy;radia-tion tolerance
Abstract:AIM To assess whether the apoptotic index is useful in predicting tumor stage and effects of radiotherapy for bladder cancer patients.METHODS Forty-one cases of transitional cell bladder cancer were reviewed by light mi-croscopy in hematoxylin eosin slides for the presence of apop-totic index（AI）and mitotic index（MI）in the primary tumor biopsy specimens.The patients treated between1995and1998were included in this study.Radiotherapy was given to a median dose of45Gy.Clinicopathological tumor character-istics were studied in relation to the apoptotic index（AI），and as prognostic factors for the effects of radiotherapy and tumor stage.RESULTS Pretreatment apoptotic indexes and mitot-ic indexes were significantly increased with the decrease of the differentiation of the tumor cell（P&<0.01）.The degree of necrosis of the tumor was related with apoptosis and tumor stage（P&<0.01）.CONCLUSION The pretreatment apop-totic index is useful in predicting the effects of bladder cancer patients treated by radiotherapy.Assessment of biological tu-mor characteristics could allow the selection of patients for different treatment strategies.
0 引言
细胞凋亡（apoptosis）是一种具有特定形态和生化改变的细胞死亡过程，其与细胞生物学特性、细胞增殖密切相关［1-5］ .凋亡的发生是有机体维护自我平衡，调节机体正常生长发育的重要方式，凋亡与辐射的关系以及在放疗中的意义，近年来逐渐受到重视［6-9］ .有研究发现肿瘤受一固定剂量照射后，其凋亡反应与肿瘤的敏感性一致［6，7，10，11］ .这为临床治疗前和治疗中对肿瘤放射敏感性的评价、预后的评估及肿瘤的个体化治疗提供了途径.我们观察原发性膀胱移行细胞癌放疗前凋亡细胞数和分裂相数，对比观察放疗后癌组织变性坏死程度，分析凋亡细胞计数作为判断肿瘤放射敏感性指标的可行性.
1 材料和方法
1.1 材料
西京医院和唐都医院1995/1998原发性膀胱移行细胞癌患者41（男29，女12）例，年龄23～71岁，活检诊断前均未接受过放疗、化疗.全部由膀胱镜检取材并经病理确诊.诊断标准参照WHO1978年UICC分级标准，I级14例，Ⅱ级12例，Ⅲ级15例.活检诊断后患者均进行外照射治疗，膀胱外照射采用8mV-X线，常规分割治疗，每次2Gy，剂量为40～50Gy，时间为20～25次/4～5wk.放疗后全部病例行手术膀胱切除或肿块切除.放疗前、后膀胱癌组织标本，40g・L-1 甲醛固定，常规脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋，5μm切片，HE染色，光镜观察. 1.2 方法 放疗前膀胱移行细胞癌组织切片，光镜下观察其细胞凋亡指数（apoptotic index，AI）及分裂相指数（mitotis index，MI）.切片分别以16D目镜测微网（Nikon，日本产）为面积单位，在400倍放大下（面积为0.1024mm 2 ）计数网格中的凋亡细胞、凋亡小体及分裂相数目，随机选择肿瘤细胞丰富，分布均匀区域计数，出血、片状坏死区不作为观察区域.每例样本观察5个网格进行计数，取其均值，各组数值以x ±s表示.凋亡细胞的判断参考Walke［12］ 标准进行，其主要形态学改变常累及散在的单个细胞，显示细胞收缩，离开周围细胞，形成一个不被染色的晕轮（halo），核染色质固缩，集聚在核膜周边，或胞质浓缩，胞膜起泡，核裂解成若干碎片，胞质膜包裹细胞碎片形成所谓“凋亡小体”.分裂相的判断按临床病理标准进行.膀胱移行细胞癌放疗效果分度放疗后膀胱癌显示肿块缩小或消失，主要呈炎症、变性、坏死等改变.根据放疗后肿瘤标本变性坏死所占全部肿瘤标本比例分度，变性坏死&<50%定为Ⅰ度，50～80%定为Ⅱ度，&>80%定为Ⅲ度.
统计学处理:AI和MI采用t检验，放疗后变性坏死程度用等级资料秩和检验进行统计学处理.
2 结果
2.1 原发性膀胱移行细胞癌AI和MI
各级膀胱移行细胞癌组织中，均可见散在分布的凋亡细胞和细胞分裂相，分化越差的癌组织显示AI和MI越多，各级之间有显著性差异（P&<0.01，Tab1）.表1 膀胱移行细胞癌细胞凋亡指数和分裂相指数（略）
2.2 放疗后膀胱移行细胞癌组织变性坏死程度
放疗后肿瘤组织主要呈弥漫性变性坏死，部分为局灶性变性坏死伴有炎症反应及纤维组织增生，部分癌组织完全被坏死取代，分化程度越低的膀胱移行细胞癌变性坏死程度越重，各级之间有显著性差异（P&<0.01，Tab2）. 表2 膀胱移行细胞癌放疗后变性坏死程度（略）
3 讨论
肿瘤不仅是一种细胞增殖分化异常的疾病，也是一种细胞死亡异常的疾病.组织学显示所有的细胞均可发生凋亡，肿瘤细胞增殖率与凋亡率的比例可以决定肿瘤的净增长或生长速度［7，12］ .目前，放射治疗广泛应用于肿瘤治疗中，关于放疗效应与人体肿瘤细 胞增殖、凋亡水平的关系在鼻咽癌、胃癌、淋巴瘤等肿瘤有不少研究［6，11，13］ 膀胱癌细胞凋亡与放疗敏感性的关系，国外有少数报道［14，15］ ，国内尚无报道.
检测凋亡细胞有诸多方法，但形态学观察仍是判断细胞凋亡最基本、最经典的方法［12］ .我们对41例原发性膀胱癌放疗前后形态学观察发现，不同分级的移行细胞癌放疗前其癌细胞中均可见细胞凋亡和核分裂相存在，并随恶性程度增高，AI和MI均明显增高，不同分级组间有显著性差异（P&<0.01）.本组病例进行一定疗程放疗后，绝大多数病例癌组织坏死显著，分化程度越低的膀胱癌，其坏死程度越重，不同分级各组之间有显著性差异（P&<0.01）.
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